VEGF、OPN的表達(dá)與胃癌浸潤、轉(zhuǎn)移的相關(guān)性及聯(lián)合檢測的臨床意義*

朱棟良，尹小平，王芳元

(咸寧市中心醫(yī)院肝膽胰胃腸外科，湖北咸寧437100)

VEGF、OPN的表達(dá)與胃癌浸潤、轉(zhuǎn)移的相關(guān)性及聯(lián)合檢測的臨床意義*

朱棟良，尹小平，王芳元＊＊

(咸寧市中心醫(yī)院肝膽胰胃腸外科，湖北咸寧437100)

目的研究血清血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和骨橋蛋白(OPN)的表達(dá)與胃癌浸潤、轉(zhuǎn)移等病理分期的相關(guān)性，探討二者聯(lián)合檢測診斷胃癌的臨床意義。方法采用酶聯(lián)免疫吸附試驗法(ELISA)檢測40例胃癌患者(胃癌組)，30例健康體檢者(健康組)血清中VEGF、OPN的濃度，并分析其與胃癌患者臨床病理因素之間的關(guān)系。結(jié)果胃癌患者血清VEGF、OPN水平明顯高于健康組(P＜0.01);胃癌患者血清VEGF和OPN的濃度與胃癌病理分期、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及分化程度相關(guān)(P＜0.05);胃癌患者血清OPN濃度與VEGF濃度呈正相關(guān)(r=0．5431，P＜0.05);VEGF、OPN單獨(dú)檢測診斷胃癌其敏感性分別為67.5%、77.5%，二者聯(lián)合檢測敏感性提高至92.7%。結(jié)論血清中VEGF、OPN的表達(dá)水平與胃癌的浸潤、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，VEGF、OPN表達(dá)具有正協(xié)同作用，兩者聯(lián)合檢測能更準(zhǔn)確預(yù)測胃癌的浸潤、轉(zhuǎn)移等病理分期。

血管內(nèi)皮生長因子;骨橋蛋白;胃癌;浸潤;轉(zhuǎn)移

胃癌是我國最常見的消化道腫瘤，具有起病隱匿，早期易漏診、易轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)率高等特點(diǎn)，根據(jù)2008年癌癥統(tǒng)計結(jié)果，我國大陸地區(qū)人群胃癌發(fā)病率和死亡率均僅次于肺癌，位居第二位［1，2］，而臨床上缺乏準(zhǔn)確的早期篩查手段，術(shù)前對預(yù)測胃癌的浸潤和轉(zhuǎn)移缺乏高效的檢測方法。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是一種最重要的血管形成因子，能增加血管通透性，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，對活體血管形成有強(qiáng)烈的誘發(fā)作用。在腫瘤的生長過程中，腫瘤細(xì)胞分泌血管生長因子，增加腫瘤血管形成，促進(jìn)腫瘤發(fā)展、轉(zhuǎn)移［3，4］，并成為腫瘤發(fā)生發(fā)展及治療中的研究熱點(diǎn)課題。骨橋蛋白(OPN)是一種磷酸化糖蛋白，為非膠原基質(zhì)蛋白，在促進(jìn)細(xì)胞增殖、移行、重塑細(xì)胞外基質(zhì)、降低細(xì)胞黏附中發(fā)揮重要作用，且和血管因素密切相關(guān)［5～7］。本研究通過檢測胃癌血清中VEGF和OPN水平與胃癌浸潤、轉(zhuǎn)移和術(shù)前CT征象的相關(guān)性，探討二者聯(lián)合檢測并與術(shù)前CT掃描相結(jié)合，為病情分析和判斷預(yù)后提供可靠依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集2012年1月至2013年3月在我院就診的40例胃癌患者(胃癌組)，其中男23例，女17例;年齡26～81歲，中位數(shù)57.2歲;術(shù)前均未接受過放化療，術(shù)前胃鏡活檢證實為胃腺癌;同期在我院健康體檢者30例(健康組)，其中男18例，女12例;年齡27～71歲，中位數(shù)54.8歲;均經(jīng)胃鏡確診無胃部疾病，排除其他惡性腫瘤及嚴(yán)重心血管、代謝性疾病(獲得倫理委員會批準(zhǔn)，并簽知情同意書)。兩組患者年齡、性別等一般資料比較差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

1.2 標(biāo)本采集抽取術(shù)前患者和健康體檢者5ml清晨空腹靜脈血，注入無抗凝管，離心(2000rpm，10min)，吸取血清100μl體積分裝，－80℃冷凍備用。

1.3 檢測方法及試劑VEGF采用ELISA方法檢測，試劑盒由深圳晶美生物有限公司提供，最低敏感濃度為46.9pg/ml，變異系數(shù)小于5.0%。OPN應(yīng)用ELISA檢測，鼠抗人OPN單抗(100μl，1mg/ml，CHEMICON公司)，兔抗人OPN多抗(100μl，CHEMICON公司)，OPN標(biāo)準(zhǔn)品1mg(CHEMICON公司)，生物素化羊抗兔IgG(H+L，1.5mg/100μl，北京中山生物技術(shù)有限公司)，親和素－辣根過氧化酶復(fù)合物(Avidin HRP，200μl，華美公司)。所有操作嚴(yán)格按照說明書檢測。

1.4 評判標(biāo)準(zhǔn)以健康體檢組VEGF、OPN 2s作為上下警戒值，血清VEGF、OPN的上界水平分別為106.0 μg/ml，32.7μg/ml。

1.5 CT掃描技術(shù)評定標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用64排螺旋CT，常規(guī)上腹部平掃加增強(qiáng)明確胃癌術(shù)前分期，并經(jīng)兩位對普外科疾病診斷經(jīng)驗豐富的影像科副主任醫(yī)師分別閱片確認(rèn)。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法使用SPSS 13.0軟件分析所有數(shù)據(jù)。計數(shù)資料采用卡方檢驗，兩變量之間的關(guān)系采用Pearson相關(guān)分析。以P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清VEGF和OPN水平比較胃癌組血清VEGF、OPN濃度均高于健康組，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，在胃癌患者中VEGF、OPN陽性檢出率分別為77.5%、67.5%，健康組其陽性檢出率分別為13.3%、10.0%，明顯低于胃癌組，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。見表1。

表1 兩組間血清VEGF、OPN濃度比較

2.2 VEGF、OPN聯(lián)合檢測效能評價VEGF、OPN單獨(dú)檢測診斷胃癌其敏感性分別為67.5%、77.5%，特異性分別為90.0%、87.7%，兩者聯(lián)合檢測診斷胃癌敏感性、特異性分別為92.5%、83.3%。與單獨(dú)檢測相比，聯(lián)合檢測敏感性升高，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，特異性差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

2.3 VEGF、OPN的相關(guān)性胃癌患者血清VEGF與OPN水平呈正相關(guān)(r=0．5431，P＜0.05)。

2.4 血清VEGF、OPN與臨床特征的關(guān)系胃癌患者血清VEGF、OPN水平在術(shù)后病理分期、有無區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、腫瘤直徑大小、分化程度等方面比較其差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，而在不同年齡、性別胃癌患者VEGF、OPN水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，見表2。

表2 胃癌組臨床、病理特征與血清OPN與VEGF水平的關(guān)系(ˉx±s，μg/ml)

3 討論

目前暫無單一指標(biāo)能夠?qū)δ[瘤的生物學(xué)行為和預(yù)后作出準(zhǔn)確預(yù)測，臨床上多用標(biāo)記物聯(lián)合檢測。目前常用的胃癌腫瘤標(biāo)志物有CEA、CA19－9、CA72－4幾種，但因這些標(biāo)志物的特異性不高，某些指標(biāo)在腫瘤性及炎癥應(yīng)激性疾病中均有明顯升高，而且缺乏組織特異性，對于腫瘤的病理分期分級也沒有明確的提示意義，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足臨床需要，因此開發(fā)新的有效的胃癌標(biāo)志物迫在眉睫［8～10］。

本研究結(jié)果顯示:在胃癌組的血清VEGF、OPN水平顯著高于健康組，并且與胃癌的術(shù)后病理分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、腫瘤大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分化程度相關(guān)。胃癌患者血清中VEGF、OPN的表達(dá)水平呈正相關(guān)，兩者聯(lián)合檢測在胃癌患者中敏感性明顯高于單獨(dú)檢測。VEGF作為一種最常見最有效的促血管生長細(xì)胞因子，可以結(jié)合于血管內(nèi)皮生長因子受體，激活細(xì)胞內(nèi)信號級聯(lián)途徑，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞增殖加快，血管生成增多［11］。胃癌患者VEGF高表達(dá)，加速血管形成，促進(jìn)腫瘤生長，促使癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移，形成肉眼不能識別的新癌灶。目前針對VEGF及其受體已有商品化的單克隆抗體，如貝伐單抗等在臨床中應(yīng)用于晚期腫瘤患者，有效的延長患者生存期［12，13］。

OPN是一種非膠原性骨基質(zhì)糖蛋白，廣泛的分布于多種組織和細(xì)胞中，既往研究表明其可與細(xì)胞表面整合素受體相互作用，調(diào)控細(xì)胞粘附，還可以調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶家族中某些蛋白的表達(dá)，從而調(diào)控腫瘤的侵襲遷移能力［14］。OPN在巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞中合成并在刺激下大量分泌，可能與腫瘤細(xì)胞的免疫微環(huán)境失衡相關(guān)，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移［15］。胃癌患者血清中高水平的OPN可能來自于腫瘤細(xì)胞過度增殖分泌到血液中，使腫瘤細(xì)胞逃避宿主免疫系統(tǒng)的識別和殺傷，從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)展和轉(zhuǎn)移。在胃癌進(jìn)展過程中，腫瘤細(xì)胞分泌的OPN可能通過激活細(xì)胞內(nèi)多種信號傳導(dǎo)途徑，促使癌細(xì)胞的趨化粘附和浸潤遷移，OPN能夠上調(diào)VEGF的效應(yīng)，故體內(nèi)的OPN表達(dá)量增加，促進(jìn)VEGF的表達(dá)，促使胃癌的血管生成，增加血管通透能力，加速腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移，在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中可能有相互協(xié)同作用。血液中的OPN及VEGF含量異常升高，提示腫瘤的生長和侵襲轉(zhuǎn)移處于活動期，具有更高的惡性程度。本研究中證實OPN及VEGF含量與胃癌的臨床病理分期相關(guān)，可以作為胃癌術(shù)前診斷的重要血清學(xué)指標(biāo)。

綜上所述，檢測VEGF和OPN有助于篩選轉(zhuǎn)移高危病例，兩者聯(lián)合檢測的意義更為顯著，能更準(zhǔn)確的預(yù)測胃癌浸潤、轉(zhuǎn)移等臨床病理學(xué)特征，為胃癌早期診斷、病情分析和判斷預(yù)后提供可靠的依據(jù)。因此，我們認(rèn)為VEGF和OPN可以作為胃癌臨床檢測新的腫瘤標(biāo)志物。

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Correlation of Combined Detection of Serum VEGF，OPN and Gastric Cancer Invasion，Metastasis

ZHU Dong－liang，YIN Xiao－ping，WANG Fang－yuan
(The Department of Hepatobiliary Gastrointestinal Surgery，Xianning Central Hospital，Xianning Hubei 437100，China)

ObjectiveStudy of serum vascular endothelial growth factor(VEGF)and osteopontin (OPN)the relationship between the expression of gastric cancer invasion，metastasis and other pathological staging to study the serum vascular endothelial growth factor(VEGF)and osteopontin(OPN)expression and the correlation with tumor invasion and metastasis，and investigate the clinical significance of combined detection of both.MethodsSerum VEGF and OPN concentrations in 40 patients with gastric cancer(gastric cancer group)and 30 healthy subjects(healthy group)were detected by enzyme－linked immunosorbent assay (ELISA)and the clinical pathological factors relations were analyzed.ResultsSerum VEGF and OPN levels of patients with gastric cancer were significantly higher than that of the healthy group，the difference was statistically significant(P＜0.01).Serum OPN and VEGF concentrations were closely related to the clinical staging of gastric cancer，tumor size，lymph node metastasis，distant metastasis and the degree of differentiation(P＜0.05). Serum concentrations of OPN in patients with gastric cancer was positively correlated with VEGF concentrations (r=0.5431，P＜0.05).Detection sensitivity of VEGF or OPN alone was 67.5%or 77.5%respectively，while combined detection sensitivity increased to 92.7%.ConclusionSerum VEGF and OPN expression levels were closely related to the invasion and metastasis of gastric cancer.VEGF and OPN expression has a positive synergistic effect with eath other.Combined detection of the expression levels of OPN and VEGF can improve the diagnosis of gastric cancer，more accurately.

Vascular endothelial growth factor;Osteopontin;Gastric cancer;Invasion;Metastasis

R735.2

A

2095－4646(2015)01－0001－04

2014－11－23)

湖北省自然科學(xué)基金資助項目(2011CDB316);咸寧市科技研究與開發(fā)項目(2012FFC11601)

＊＊通訊作者，E－mail:xnzxyywfy@126.com