丹紅注射液對大鼠單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)復(fù)位后健側(cè)睪丸生精功能的影響

夏 康，吳麗琴

廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬重慶北碚中醫(yī)院泌尿外科，重慶400700

丹紅注射液對大鼠單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)復(fù)位后健側(cè)睪丸生精功能的影響

夏 康，吳麗琴

廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬重慶北碚中醫(yī)院泌尿外科，重慶400700

目的：探討丹紅注射液對大鼠單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)復(fù)位后健側(cè)睪丸的組織學(xué)以及附睪精子生成的影響。方法：將30只健康雄性Wistar大鼠隨機分為假手術(shù)組(A組)、睪丸扭轉(zhuǎn)復(fù)位組(B組)、丹紅注射液處理組(C組)，每組10只。按Turner法建立左側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)模型，A組大鼠切開左側(cè)陰囊，使左側(cè)睪丸充分游離暴露，不予以扭轉(zhuǎn)，模擬Turner法手術(shù)過程隨意搬動睪丸，隨后縫合關(guān)閉陰囊;B組大鼠按Turner法制作睪丸扭轉(zhuǎn)模型：左側(cè)睪丸順時針繞精索旋轉(zhuǎn)720°，肉膜白膜縫合固定以防止復(fù)位，陰囊縫合，扭轉(zhuǎn)6小時后復(fù)位固定;C組大鼠按上述相同方法制備睪丸扭轉(zhuǎn)模型，于睪丸扭轉(zhuǎn)復(fù)位前60分鐘腹腔注射丹紅注射液(2mL/kg)，同時在術(shù)后3天每天分別注射丹紅注射液(2mL/kg)。各組喂養(yǎng)至術(shù)后4周時處死，取右側(cè)睪丸標(biāo)本行組織病理學(xué)觀察，同時取右側(cè)附睪尾部行精子計數(shù)及活動率檢測。檢測睪丸組織一氧化氮合酶 (NOS)、血清超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平。結(jié)果：C組與B組相比，生精上皮層數(shù)增多，平均曲細(xì)精管直徑(MSTD)增大，同時附睪精子計數(shù)與活動率明顯升高，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。C組大鼠睪丸組織SOD水平升高，NOS、MDA水平降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論：丹紅注射液能夠減輕大鼠單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)復(fù)位后健側(cè)睪丸組織損害，使附睪精子生成顯著增多，機制可能為減少大鼠睪丸組織內(nèi)自由基生成，提高其抗自由基能力。

丹紅注射液；睪丸扭轉(zhuǎn)；超氧化物歧化酶；一氧化氮合酶；丙二醛

睪丸扭轉(zhuǎn)是泌尿外科常見病，治療不及時可導(dǎo)致睪丸壞死［1］。常發(fā)生于青少年，早期手術(shù)復(fù)位后仍有36%～39%患者出現(xiàn)精液異常［2］。因此如何通過藥物治療減少復(fù)位手術(shù)后對睪丸生精功能的影響是研究熱點之一。本實驗通過建立大鼠單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)模型，探討丹紅注射液對大鼠單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)復(fù)位后健側(cè)睪丸的組織學(xué)以及附睪精子生成的影響及相關(guān)作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 雄性Wistar大鼠，SPF級，6～7周齡，體質(zhì)量120～150 g，購于重慶醫(yī)科大學(xué)大學(xué)動物實驗中心［動物實驗合格證號：SCXK(渝) 2012-0001］，丹紅注射液(步長倍通制藥有限公司生產(chǎn)，批號：70713)。

1.2 方法

1.2.1 動物分組、模型建立以及取材 30只雄性Wistar大鼠隨機分為假手術(shù)組(n=10，A組)；睪丸扭轉(zhuǎn)復(fù)位組(B組，n=10)；丹紅注射液治療組(C組，n=10)。模型建立參考Turner法［3］。以3%戊巴比妥鈉40 mg/kg對大鼠實施腹腔麻醉，取左下腹部小切口，顯露左側(cè)睪丸。A組將睪丸游離后縫合固定于陰囊壁。其余2組將睪丸順時針扭轉(zhuǎn)720°維持6小時后復(fù)位。C組于睪丸扭轉(zhuǎn)復(fù)位前60分鐘腹腔注射丹紅注射液(2mL/kg)，同時在術(shù)后3天每天分別注射丹紅注射液(10μ/kg)。3組均喂養(yǎng)至術(shù)后4周時處死，取右側(cè)睪丸標(biāo)本行組織病理學(xué)觀察，同時取右側(cè)附睪尾部行精子計數(shù)及活動率檢測。檢測睪丸組織一氧化氮合酶(NOS)、血清超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。

1.2.2 檢測方法 1)睪丸組織病理學(xué)檢查：睪丸組織10%甲醛固定后，常規(guī)石蠟包埋切片，行HE染色，對睪丸組織進行形態(tài)學(xué)觀察；2)精子計數(shù)及活動率測定：取附睪尾部制成精子懸液，37℃溫水孵育15分鐘用精子計數(shù)板檢測密度。高倍鏡下隨機記錄100個精子中活動精子百分率；3)SOD活性采用黃嘌呤氧化酶法測定，MDA含量采用硫代巴比妥酸法測定，NOS活性采用化學(xué)比色法測定。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 數(shù)據(jù)統(tǒng)計采用SPSS 13.0軟件，計量資料用(±s)表示，多組比較用單因素方差分析。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 睪丸組織病理學(xué)觀察 A組：生精細(xì)胞層次有序，精細(xì)小管結(jié)構(gòu)完整。B組：生殖細(xì)胞結(jié)構(gòu)松散，可見散在壞死細(xì)胞，精細(xì)小管結(jié)構(gòu)連續(xù)性中斷。C組：生殖細(xì)胞結(jié)構(gòu)松散，未見壞死細(xì)胞，精細(xì)小管結(jié)構(gòu)較完整。

2.2 附睪精子計數(shù)分析 C組精子密度與活動率明顯高于B組(P＜0.05)，大鼠睪丸組織NOS、MDA水平水平顯著低于B組(P＜0.05)，睪丸組織SOD水平顯著高于B組(P＜0.05)。見表1。

表1 3組精子計數(shù)、活率、睪丸組織SOD、NOS、MDA含量檢測

3 討論

研究認(rèn)為睪丸扭轉(zhuǎn)時組織缺血，復(fù)位后血流再次恢復(fù)后大量氧分子充滿再灌注組織，產(chǎn)生大量氧自由基，通過氧化反應(yīng)以及應(yīng)激炎癥反應(yīng)導(dǎo)致睪丸組織細(xì)胞損傷［4-5］。單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)后可引起對側(cè)睪丸的損害，并導(dǎo)致生精功能低下和生育機能障礙，其機制可能與自身免疫性的交感性睪丸炎癥有關(guān)，研究發(fā)現(xiàn)一側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)后復(fù)位可導(dǎo)致免疫激活引起腫瘤壞死因子、炎癥反應(yīng)作用導(dǎo)致對側(cè)睪丸生殖細(xì)胞損傷［6］。因此，如何應(yīng)用藥物保護復(fù)位手術(shù)后對健側(cè)睪丸生精功能有重要意義。

丹紅注射液為丹參、紅花等提取物的中藥制劑，其主要成分為多種丹參酮、紅花黃素、紅花酮苷、原兒茶醛等。研究表明，丹紅注射液具有抗氧化、防止血栓形成及擴張血管等作用，能顯著改善微循環(huán)，并對心、腦、腎臟缺血損傷有保護作用［7］。

本實驗發(fā)現(xiàn)，大鼠睪丸扭轉(zhuǎn)再復(fù)位模型健側(cè)睪丸生殖細(xì)胞結(jié)構(gòu)松散，可見散在壞死細(xì)胞，精細(xì)小管結(jié)構(gòu)連續(xù)性中斷。丹紅注射液組未見壞死細(xì)胞，精細(xì)小管結(jié)構(gòu)較完整。實驗說明大鼠睪丸扭轉(zhuǎn)再復(fù)位后健側(cè)睪丸組織受到損害同既往研究一致［8］。丹紅注射液組生殖細(xì)胞損害程度較輕。扭轉(zhuǎn)復(fù)位組同丹紅注射液組精子計數(shù)及精子活動率較假手術(shù)組減少(P＜0.05)，說明大鼠睪丸扭轉(zhuǎn)后精子質(zhì)量明顯降低。丹紅注射液治療組同扭轉(zhuǎn)復(fù)位組比較精子計數(shù)以及精子活動率更高。MDA是過氧化脂質(zhì)的分解產(chǎn)物，通過測定MDA可反映體內(nèi)自由基產(chǎn)生的程度；SOD是細(xì)胞中主要的抗氧化酶之一，它在機體清除氧自由基的過程中起著關(guān)鍵作用；NOS不僅是生物體內(nèi)重要遞質(zhì)，而且能對細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用。精子質(zhì)膜上含有豐富的不飽和脂肪酸，極易被氧化，可引起精子結(jié)構(gòu)的改變，進而影響精子功能［9-10］。本實驗表明丹紅注射液治療組同扭轉(zhuǎn)復(fù)位組比較SOD升高，MDA、NOS水平降低。說明丹紅注射液能提高大鼠睪丸組織內(nèi)SOD水平、降低MDA、NOS水平，減少NO合成，改善精子質(zhì)量。

綜上所述，大鼠睪丸扭轉(zhuǎn)再復(fù)位后健側(cè)睪丸精子計數(shù)以及精子活動率降低，丹紅注射液能夠減輕健側(cè)睪丸組織損害，保護健側(cè)睪丸生精功能。這可能與其能提高大鼠睪丸組織內(nèi)SOD水平，降低MDA、NOS水平有關(guān)。

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Effcetsof DanHong Injection on the RatSperm atogenesis of the Healthy Testisafter Reduction of Testicular Torsion of the Affected Side

XIA Kang,WU Liqin
Urology Departmentof BeibeiHospital of Chinese Medicine Affiliated to Guangzhou University of Chinese Medicine,Chongqing 400700,China

Objective:To study theeffectof DanHong injection on thehistology of healthy testisand the sperm production of epididym ides of rats undergoing the reduction by testicular torsion on the affected side.Methods:The30maleWistar ratswere randomized into the sham-operated group(A),the reduction group(B)and the injection group (C)w ith 10 rats in each.Themodelsw ith testicular torsion established by Turnermethod,rats in group A were cut the leftscrotum to isolate and expose the testisw ithout torsion and rotate the testis by im itating the Turner operating process and lastly stitched the wound;as in the a group themodels established,the left testis of rats in group Bwere rotated 720°clockw ise round the varicosity to be fixed by stitching the sarcolemma and albuginea and the leftscrotum were closed,after fixation for6 hours the testiswere reduced and fixed;themodelsestablished as in the A and B group,the testis in the C group were injected DanHong injection 2m L/kg in the abdomen before the reduction of torsion for 60 m inutes and after the operation the rats were injected DanHong injection 2 m L/kg for 3 days.A fter feeding for 4 weeks,the rats of three groupswere killed,the right testiswere collected to be observed histopathologically,the sperm of the rightepididymideswere counted and their activity ratio were detected.Meanwhile,the levels of the nitricoxide synthase (NOS),serum superoxide dismutases(SOD)and malondialdehyde (MDA)were determ ined respectively.Results:In the comparison of the C and B group,the quantities of sem iniferous epithelium cellof the rats in group C were increased,the diameters of the seminiferous tubuleswere enlarged, sperm counts of epididym ides and activity ratios were raised significantly,and the differences between the two groupswere significant(P＜0.05).The SOD levelsof the rats'testes in group Cwere increased,while the NOSand MDA levelswere decreased,and the differences showed statisticalmeaning(P＜0.05).Conclusion:The DanHong injection can lighten impairmentof the healthy testis from the reduction of torsion of the affected side and significantly increase the sperm production of epididym ides,one of themechanismsmay be relevant to its reducing the production of the free radicalsand advancing itsability in fighting against the free radicals.

DanHong injection;testicular torsion;SOD;NOS;MDA

R285.5

A

1004-6852(2015)02-0015-03

2014-07-28

夏康(1979—)，男，碩士學(xué)位，主治醫(yī)師。研究方向：泌尿外科疾病的診治。