地格達(dá)-4對(duì)酒精性脂肪肝模型大鼠肝功能的影響*

烏日?qǐng)D那順，包納日斯

1北京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，北京100029；2內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)

地格達(dá)-4對(duì)酒精性脂肪肝模型大鼠肝功能的影響*

烏日?qǐng)D那順1，包納日斯2△

1北京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，北京100029；2內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)

目的：觀察蒙藥地格達(dá)-4對(duì)酒精性脂肪肝模型大鼠肝功能的影響。方法：將Wistar大鼠進(jìn)行造模后隨機(jī)分為空白組，模型組，硫普羅寧組和地格達(dá)-4高、中、低劑量組?？瞻捉M和模型組給以羧甲基纖維素鈉，硫普羅寧組給予硫普羅寧40mg/kg，地格達(dá)-4高、中、低劑量組分別給以1 400、700、350mg/kg地格達(dá)-4。灌胃4周后，腹主動(dòng)脈采血，檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（γ-GT）等指標(biāo)。結(jié)果:地格達(dá)-4高劑量組、中劑量組與模型組ALT相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；地格達(dá)-4高、中、低劑量組間ALT相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；地格達(dá)-4中劑量組與模型組、地格達(dá)-4高劑量組、低劑量組AST、γ-GT相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；地格達(dá)-4高、中、低劑量組比硫普羅寧組γ-GT相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論：地格達(dá)-4對(duì)酒精性脂肪肝大鼠的肝功能有確切的保護(hù)作用，且中等劑量為首選劑量。

地格達(dá)-4；蒙藥；酒精性脂肪肝；大鼠；肝功能

從蒙醫(yī)學(xué)理論角度可將酒精性脂肪肝分為3個(gè)階段，即初期、中期和晚期。初期屬蒙醫(yī)學(xué)“未消毒癥”［1］范疇,是因?yàn)殚L(zhǎng)期大量服用了含有人體非必須物質(zhì)酒精而導(dǎo)致胃中毒，出現(xiàn)惡心、嘔吐、泛酸、食欲減退，胃部出現(xiàn)燒灼感等“希拉”增盛性癥狀。而中期和晚期屬“通拉嘎未消癥”［1］范疇。主要出現(xiàn)非正常性脂肪過盛相關(guān)的癥狀和體征，如腹部肥胖、四肢消瘦、食欲減退、面色灰暗、乏力等。而地格達(dá)-4［2］(肋柱花、沙蓬、肉豆蔻、梔子)是治療希拉增盛性疾病的代表性方藥，有抑“希拉”之功效，主治“希拉”增盛所致的胃脘疼痛等癥。因此將其選定為自然科學(xué)基金課題“蒙醫(yī)三根調(diào)節(jié)法及其代表性方劑對(duì)酒精性脂肪肝的作用機(jī)制研究”當(dāng)中調(diào)節(jié)“三根”之一“希拉”的代表性方劑。本次試驗(yàn)旨在闡明地格達(dá)-4是通過影響酒精性脂肪肝的哪些相關(guān)指標(biāo)而發(fā)揮調(diào)節(jié)“希拉”之作用的。從而為系統(tǒng)闡明蒙醫(yī)三根法治療酒精性脂肪肝的作用機(jī)理奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 雄性Wistar大鼠［動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK-(軍2012-0004)］，66只，體質(zhì)量150～170 g。

1.2 藥物、試劑與儀器 地格達(dá)-4［國(guó)家蒙藥制劑中心內(nèi)蒙古國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院制劑室提供，批號(hào)：呼衛(wèi)注字(97)001-013］，硫普羅寧片(山西云中制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字H20093445)，谷丙轉(zhuǎn)氨酶［英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：YK0154］、谷草轉(zhuǎn)氨酶［英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：YK0172］、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶試劑盒［英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：YK0020)，邁瑞B(yǎng)S-200型全自動(dòng)生化分析儀。

1.3 造模、分組 以文獻(xiàn)［3-4］為依據(jù)，將大鼠隨機(jī)分為2組，空白組13只，以蒸餾水每日0.005mL/g連續(xù)灌胃8周；造模組53只，以56°白酒逐步增加酒精量灌胃，頭三日稀釋為15%的酒精含量以0.005mL/g灌胃，再稀釋為30%酒精含量灌胃3日，其后增加到45%的酒精含量灌胃8周。8周后空白和造模組每組隨機(jī)選取3只大鼠處死后取肝臟，制成肝組織病理切片，顯微鏡下觀察，判定是否造模成功。然后將模型組隨機(jī)分為模型對(duì)照組、硫普羅寧組、地格達(dá)-4高、中、低劑量組，每組分配10只大鼠。

1.4 給藥、取材 空白組和模型對(duì)照組以1%羧甲基纖維素鈉溶液每日0.005 mL/g連續(xù)灌胃4周；地格達(dá)-4高、中、低劑量組分別用1 400、700、350mg/kg的地格達(dá)-4，以1%羧甲基纖維素鈉溶液配制成混懸溶液后每日0.005mL/g連續(xù)灌胃4周；硫普羅寧組用40mg/kg的硫普羅寧片研磨后以1%羧甲基纖維素鈉溶液配制成混懸溶液，每日0.005mL/g連續(xù)灌胃4周；同時(shí)繼續(xù)造模。4周后各組同時(shí)禁食不禁水16小時(shí)，用20%烏拉坦0.005mL/g腹腔注射麻醉，開腹，腹主動(dòng)脈采血，3 000 r/min離心，取血清，-20℃冷藏備用。

1.5 指標(biāo)檢測(cè) -20℃冰箱內(nèi)取出血清，室溫自然融化后用試劑盒，檢測(cè)全自動(dòng)生化儀檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(γ-GT)等指標(biāo)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 運(yùn)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以(±s)表示，各組間數(shù)據(jù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

地格達(dá)-4對(duì)各試驗(yàn)組大鼠肝功能的影響見表1。

表1 各組血清肝功指標(biāo)比較 U/L

3 討論

有研究發(fā)現(xiàn)每日飲酒超過50 g，血液中ALT、AST、γ-GT水平就會(huì)明顯升高，并且?guī)缀跛谢颊逜ST水平都高于ALT，AST/ALT＞2就可以考慮為酒精性肝炎［5-8］。因此，ALT、AST、γ-GT的顯著升高也是酒精性脂肪肝發(fā)病機(jī)制中的一個(gè)重要參考指標(biāo)，能否有效降低血液中ALT、AST、γ-GT，也就成為了酒精性脂肪肝療效評(píng)價(jià)中不可缺少的客觀指標(biāo)。本試驗(yàn)結(jié)果表明蒙藥地格達(dá)-4對(duì)以上3個(gè)指標(biāo)有明顯的作用，可顯著降低ALT、AST、γ-GT水平，這表明地格達(dá)-4有很好的保護(hù)肝功能的作用。從ALT和AST在肝臟發(fā)病機(jī)制中的作用來看，ALT和AST的顯著升高預(yù)示著肝細(xì)胞發(fā)生了損傷。因此，地格達(dá)-4是通過降低血液中的ALT和AST起到保護(hù)受損的肝細(xì)胞之作用的。血液中γ-GT顯著升高預(yù)示著肝內(nèi)和肝外膽管梗阻或脂肪肝的發(fā)生，從本試驗(yàn)來看這兩者都是存在的。因此，地格達(dá)-4具有疏通梗阻的膽道之作用，也具有直接治療酒精性脂肪肝的作用。這恰好符合地格達(dá)-4的功能、主治。因?yàn)樵诿舍t(yī)學(xué)理論當(dāng)中地格達(dá)-4是治療“希拉”增盛性疾病的代表性方藥。“希拉”屬熱性，是人體熱能的主要來源，并且肝臟內(nèi)有“變色希拉”，與“希拉”有著相同的性質(zhì)，是將來自胃的食物精華轉(zhuǎn)變?yōu)椤褒R素(血液)”和“蘇素(膽汁)”的重要物質(zhì)。因此，“希拉”與肝膽的熱性疾癥有著密切的關(guān)系，而酒精性脂肪肝是由辛辣、熱性物質(zhì)酒精引起的，“齊素、希拉”增盛性疾病。地格達(dá)-4具有抑“希拉”、清黃疸、清熱之功效，是治療此病的不二之選。

試驗(yàn)結(jié)果還表明，3個(gè)肝功能指標(biāo)中，中劑量地格達(dá)-4的治療作用比高劑量和低劑量地格達(dá)-4更加優(yōu)越。中劑量地格達(dá)-4相當(dāng)于人體的常規(guī)用量，也就是說在治療酒精性脂肪肝時(shí)應(yīng)該首選常規(guī)劑量進(jìn)行治療，至于高劑量地格達(dá)-4為什么沒能起到顯著的治療作用有待進(jìn)一步闡明，而低劑量沒起作用的原因可能是劑量不足［9-10］。對(duì)于γ-GT的治療作用，中劑量地格達(dá)-4比硫普羅寧還要優(yōu)越，這表明地格達(dá)-4對(duì)于治療酒精性脂肪肝引起的肝內(nèi)外膽管梗阻療效更佳。

［1］ 策·蘇榮扎布.蒙醫(yī)內(nèi)科學(xué)［M］.呼和浩特：內(nèi)蒙古人民出版社，1986：187-191.

［2］楊·阿敏.方劑學(xué)［M］.沈陽：遼寧民族出版社，1995：174.

［3］ 張偉等.大鼠酒精性脂肪肝模型的建立［J］.安徽醫(yī)藥，2012，16(7)：885-886.

［4］ 羅先欽，徐曉玉，黃崇剛，等.決明子總蒽醌對(duì)酒精性脂肪肝大鼠肝組織脂質(zhì)過氧化與PPAR-γ表達(dá)的影響［J］.中國(guó)中藥雜志，2012，48(12)：116-118.

［5］Lieber C.Alcohol ic fatty l iver：its patho genesis and mechanism of progression to inf lammation and fibrosis［J］.Alcohol，2004，34(7)：9-19.

［6］Ramaiah S，Rivera C，Aeteel G.Ear ly-phasea-lcohol ic l iver disease：An update on animal models，pathology， and pathog enesis［J］.Inter J toxicol，2004，23(5)：217-231.

［7］Arteel G.Oxidants and antioxidants inalcoho-l induced l iver disease［J］.Gast r oenterology，2003，124：778-790.

［8］Ar teel G，Marsano L，Mendez C，et al.Advances in al cohol ic liver disease［J］.Best Prac Res Cl ini Gast r Oenterol，2003，44(4)：625-647.

［9］ 井源，韓婷，吳靜，等.酒精性脂肪肝病理學(xué)研究進(jìn)展［J］.實(shí)用肝臟病雜志，2008，11(1)：67-69.

［10］文健，吳永彬.硫普羅寧治療酒精性脂肪肝臨床療效及安全性分析［J］.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2012，39(9)：2162-2163.

InfluencesofD igda-4 over the Hepatic Function ofRatsw ith A lcoholic Fatty Liver

WU Ritunashun1,BAONarisi2△
1 School of Preclinical Medicine in Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100029,China; 2 Inner Mongolia Medical College

Objective:To study the effectofmongolianmedicine digda-4 on the hepatic function of ratsw ith alcoholic fatty liver.Methods:A fter established,thew istar ratsmodelwere random ized into the blank group and the model group,the tiopronin group aswell as the digda-4 group of low,medium and high dosages.The blank and model groups were given carboxymethyl cellulose natrium;the tiopronin group were administered tiopronin,40 mg/kg;the low,medium and high digda-4 groupswere respectively fed digda-4 of 1 400,700 and 350mg/kg.A fter 4-week gavage,alanine aminotransferase (ALT),aspartate transam inase (AST)andγ-glutamyl transferase(γ-GT) were tested in the rats'blood samples collected from abdominal aorta.Results:Compared withmodel group,the ALT contents in the digda-4 groups of high and medium doses had a significant difference(P＜0.05);among the digda-4 groupsof low,medium and high doses,the ALT contentswere significantly differenteither(P＜0.05);comparedw ith themodelgroup and the digda-4 groupsofhigh and low doses,the contentsof AST andγ-GT in the digda-4 group ofmedium doses had significant differences(P＜0.05);compared w ith the tiopronin group,theγ-GT contents in the digda-4 group of low,medium and high dosages had a significantdifference(P＜0.05).Conclusion: Digda-4 hasdefinitely protective effecton hepatic function of ratswith alcoholic fatty liver,and themedium dose is preferred.

digda-4;Mongolianmedicine;alcoholic fatty liver;rats;hepatic function

R285.5

A

1004-6852(2015)02-0008-03

2014-05-29

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(編號(hào)81160549)。

烏日?qǐng)D那順(1976—)，男，在讀博士研究生。研究方向：肝病的蒙醫(yī)治療。

△通訊作者：包納日斯(1962—)，男，博士研究生導(dǎo)師，博士后，教授。研究方向：肝病的蒙醫(yī)治療。