胃復(fù)春聯(lián)合維甲酸治療胃癌癌前病變的療效及對(duì)Rb、C-erbB-2表達(dá)的影響

蘇秀麗，金建軍，邢魯奇

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胃復(fù)春聯(lián)合維甲酸治療胃癌癌前病變的療效及對(duì)Rb、C-erbB-2表達(dá)的影響

蘇秀麗，金建軍，邢魯奇

目的 觀察胃復(fù)春聯(lián)合維甲酸治療胃癌癌前病變的療效及對(duì)Rb、C-erbB-2表達(dá)的影響，探討二者干預(yù)胃癌癌前病變進(jìn)展的可能機(jī)制，為胃癌的二級(jí)預(yù)防提供理論依據(jù)。方法 通過胃鏡活檢、病理檢查確診獲取異型增生(dysplasia，Dys)伴或不伴胃黏膜腸化(intestinal metaplasia，IM)122例，隨機(jī)分為治療組63例，對(duì)照組59例。治療組用藥為維甲酸、胃復(fù)春；對(duì)照組用藥為奧美拉唑、硫糖鋁。服藥3月后再次由胃鏡活檢獲取病理標(biāo)本，采用免疫組化法檢測(cè)治療前后Rb、C-erbB-2表達(dá)情況。結(jié)果 服藥3個(gè)月后，治療組有效率68.25%，對(duì)照組37.29%相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；能上調(diào)Rb表達(dá)強(qiáng)度(U=2.543,P<0.05)，下調(diào)C-erbB-2的表達(dá)(U=3.032，P<0.05)，與對(duì)照組相比，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，臨床觀察胃復(fù)春聯(lián)合維甲酸無明顯毒、副作用。結(jié)論 胃復(fù)春聯(lián)合維甲酸可促進(jìn)胃黏膜異型增生的逆轉(zhuǎn)，降低癌變風(fēng)險(xiǎn)，可能的作用機(jī)制之一是上調(diào)抑癌基因Rb的表達(dá)、下調(diào)癌基因C-erbB-2的表達(dá)，可用作胃癌的預(yù)防治療。

胃復(fù)春；維甲酸；胃癌癌前病變；抑癌基因Rb；癌基因C-erbB-2

目前較為肯定的胃癌前病變是指胃黏膜上皮細(xì)胞異型增生及腸型化生。研究證明，部分癌前病變可以逆轉(zhuǎn)[1-2]，成為胃癌預(yù)防研究的重點(diǎn)。本文研究中成藥胃復(fù)春聯(lián)合西藥維甲酸對(duì)胃黏膜異型增生及腸型化生的療效及對(duì)抑癌基因Rb和癌基因C-erbB-2表達(dá)的影響，探討這兩種藥物對(duì)胃癌癌前病變的治療價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 患者來自2011年9月至2014年1月河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化道門診，胃鏡檢查為慢性胃炎，病理證實(shí)為胃黏膜慢性炎伴異型增生伴或不伴腸上皮化生共122例。慢性胃炎診斷標(biāo)準(zhǔn)及病理診斷標(biāo)準(zhǔn)符合慢性胃炎的中西醫(yī)結(jié)合診治方案及附錄I慢性胃炎的病理診斷標(biāo)準(zhǔn)和分類[3]，依照就診患者單日入治療組，雙日入對(duì)照組，隨機(jī)分為治療組63例(輕度異型增生15例，中度異型增生36例，重度異型增生12例，異性增生合并腸化生32例)，及對(duì)照組59例(輕度異型增生14例，中度異型增生35例，重度異型增生10例，異型增生合并腸化生31例)。兩組性別、年齡及臨床癥狀等一般資料均具有可比性(P>0.05)。

1.2 排除標(biāo)準(zhǔn) ①合并惡性腫瘤者；②消化性潰瘍者；③合并其他慢性疾病需長(zhǎng)期服藥者；④年齡低于14歲、超過65歲者；⑤禁忌服藥的妊娠哺乳期婦女、過敏體質(zhì)及需用藥物過敏者；⑥合并精神神經(jīng)癥狀及其他服藥依從性差、資料不全、無法判斷療效者；⑦治療前1周服用制酸劑及黏膜保護(hù)劑。

1.3 活檢部位 取材部位為距幽門2.5 cm的胃竇部3、6、9點(diǎn)及胃角4個(gè)部位取材4塊，標(biāo)本足夠大，達(dá)黏膜肌層,對(duì)可能或肯定存在的病灶另取標(biāo)本，分開裝瓶，病理申請(qǐng)?zhí)峁┎∈?、取材部位。?biāo)本由10%中性緩沖福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，注明姓名，按次序編號(hào)，常溫保存。

1.4 治療方法 治療組口服胃復(fù)春片3片/次，3次/d；維甲酸片10 mg/次，3次/d，療程為3個(gè)月；奧美拉唑20 mg/次，2次/d，硫糖鋁0.75 g/次，3次/d，療程為4周。對(duì)照組口服奧美拉唑20 mg/次，2次/d，硫糖鋁0.75 g/次，3次/d，療程為4周。所用藥物均為固定廠家藥品，治療過程中停服其他藥物。治療前后采用問卷調(diào)查，詳細(xì)記錄患者病史、臨床癥狀及一般情況，行放大內(nèi)鏡檢查及病理活檢，并化驗(yàn)血常規(guī)及肝腎功能。治療期間定期隨訪臨床變化及不良反應(yīng)。

1.5 療效判定標(biāo)準(zhǔn) 參照中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)消化系統(tǒng)專業(yè)委員會(huì)慢性胃炎療效判定標(biāo)準(zhǔn)[3]。腸化或異型增生減輕達(dá)兩個(gè)級(jí)度以上(含兩個(gè)級(jí)度)為顯效，腸化或異型增生減輕達(dá)一個(gè)級(jí)度為有效，無明顯改變或改變未達(dá)到一個(gè)級(jí)度為無效(注：輕、中、重度異型增生依次為相差一個(gè)級(jí)度)。

1.6Rb、C-rebB-2表達(dá)檢測(cè)

1.6.1 試劑 采用MaxVisionTM快捷免疫組化法，檢測(cè)基因Rb、C-erbB-2表達(dá)產(chǎn)物，試劑盒均購(gòu)于福州邁新生物技術(shù)公司。

1.6.2 結(jié)果判定 以試劑盒提供陽(yáng)性片作陽(yáng)性對(duì)照，用PBS置換一抗作為空白對(duì)照。細(xì)胞內(nèi)棕褐色顆粒為Rb蛋白陽(yáng)性著色，定位于胞核，少數(shù)見于胞漿，僅胞漿著色為非特異性，Rb陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)參照Mark Kelley[4]實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)，采用半定量積分法分級(jí)，計(jì)數(shù)隨機(jī)10個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞中的陽(yáng)性細(xì)胞百分率及顯色深淺。依據(jù)著色深淺評(píng)分：①基本未著色0分，淺色為1分，中度著色為2分，深色為強(qiáng)陽(yáng)性，計(jì)3分。②按陽(yáng)性細(xì)胞百分率分為:染色細(xì)胞數(shù)0～5%計(jì)0分，6%～25%計(jì)1分，26%～75%計(jì)2分，>75%為3分。兩項(xiàng)相加最終結(jié)果評(píng)定:0～1分陰性(-)，2～3分弱陽(yáng)性(+)，4～5分中度陽(yáng)性(++)，>5分強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。C-erbB-2陽(yáng)性著色為棕黃色，定位于胞膜，結(jié)果判定參照美國(guó)Hercept Test評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[5]：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<10%、僅有胞漿著色者為陰性，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>10%，顯色弱且不連續(xù)為陽(yáng)性(+)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>10%，連續(xù)胞膜染色，強(qiáng)度中等為(++)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>10%，胞膜連續(xù)著色呈強(qiáng)陽(yáng)性為(+++)。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所得結(jié)果采用SPSS 17.0軟件包統(tǒng)計(jì)分析，等級(jí)資料用秩和檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)處理。

2 結(jié)果

2.1 治療前后內(nèi)鏡檢查及病理活檢結(jié)果 治療組病理結(jié)果有效率為68.25%，與對(duì)照組37.29%相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見表1。

表1 兩組治療后病理療效的比較 例(%)

注：兩組比較U=4.241,P<0.01。

2.2 治療前后Rb及CerbB-2的表達(dá) 結(jié)果見表2、表3。Rb表達(dá)定位于細(xì)胞核，胞質(zhì)著色無意義，Rb表達(dá)陽(yáng)性率治療組治療前為74.60%與治療后88.89%相比，差異明顯(χ2=4.308，P=0.038)，表達(dá)強(qiáng)度明顯上調(diào)(U=2.543，P=0.012)；對(duì)照組治療前后Rb表達(dá)陽(yáng)性率無明顯變化，分別為74.58%和76.27%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2= 0.046，P>0.05)，表達(dá)強(qiáng)度亦變化不明顯(U=0.319，P>0.05)。C-erbB-2表達(dá)定位于胞膜，治療組治療前后陽(yáng)性率分別是34.92%、12.70%，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P<0.05，提示C-erbB-2表達(dá)在治療后表達(dá)下調(diào)，表達(dá)強(qiáng)度也明顯下降(U=3.032，P<0.05)。對(duì)照組陽(yáng)性率及表達(dá)強(qiáng)度治療前后無明顯差異(P>0.05)。治療后與對(duì)照組相比，治療組Rb表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.05)，C-erbB-2表達(dá)明顯減弱(P<0.05)。

表2 治療前后Rb表達(dá)強(qiáng)度變化 例

注：治療前治療組與對(duì)照組相比U=0.237，P=0.692；治療后治療組與對(duì)照組相比U=2.201，P=0.03。

表3 治療前后C-erbB-2表達(dá)強(qiáng)度變化 例

注：治療前治療組與對(duì)照組相比U=0.159，P=0.874；治療后治療組與對(duì)照組相比U=-2.527，P=0.013。

2.3 藥物不良反應(yīng) 治療期間治療組、對(duì)照組均無明顯不適，不影響繼續(xù)治療。服藥前后，兩組患者心電圖、血尿常規(guī)及肝腎功能均無異常。

3 討論

胃癌是環(huán)境因素與遺傳因素共同作用的結(jié)果，胃黏膜在癌變之前，存在較長(zhǎng)期的癌前病變。本研究結(jié)果表明，胃復(fù)春聯(lián)合維甲酸能有效改善胃癌前病變病理表現(xiàn)，有效率優(yōu)于對(duì)照組，提示聯(lián)合應(yīng)用胃復(fù)春聯(lián)合維甲酸對(duì)胃癌癌前病變有較好的治療作用。研究還發(fā)現(xiàn)治療后胃黏膜腸化生鏡檢及病理均無明顯改變，建議病人長(zhǎng)期隨訪，原因需進(jìn)一步探討。

細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)。Rb基因是最早發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，位于G1/S調(diào)控點(diǎn)的中心，低磷酸化的Rb蛋白與轉(zhuǎn)錄因子E-2F結(jié)合成復(fù)合物，使E-2F失去轉(zhuǎn)錄激活功能，調(diào)控細(xì)胞分裂增殖。Rb基因突變見于約一半以上人類腫瘤[6]，轉(zhuǎn)錄因子E-2F的活性明顯增強(qiáng)，導(dǎo)致細(xì)胞分裂增殖活躍，促使腫瘤的發(fā)生[7]。Rb在胃癌癌前病變中的表達(dá)率為74.60%。胃復(fù)春、維甲酸治療后，抑癌基因Rb表達(dá)較前增加。原癌基因C-erbB-2是細(xì)胞基因組的正常成分，其表達(dá)產(chǎn)物具有酪氨酸蛋白激酶活性，調(diào)控細(xì)胞增殖及分化，正常情況下處于失活狀態(tài)，可因點(diǎn)突變、獲得啟動(dòng)子增強(qiáng)子、基因擴(kuò)增與重排等被活化, 表現(xiàn)為基因的擴(kuò)增和產(chǎn)物的高表達(dá),具有致癌變活性。研究發(fā)現(xiàn)，在胃癌前病變中，C-erbB-2呈高表達(dá)[9-11]，本研究結(jié)果示，中、重度異型增生C-erbB-2表達(dá)明顯增加，與文獻(xiàn)報(bào)道一致，提示C-erbB-2活性增加參與了胃癌癌變過程，經(jīng)胃復(fù)春合并維甲酸治療表達(dá)明顯下降。提示該兩種藥物能降低基因C-erbB-2的表達(dá)。

胃復(fù)春(SFDA)被國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)用于治療胃癌前病變，組成包括三七、香茶菜、紅參、枳殼等多味中藥，多味中藥互相協(xié)同，有行氣活血、 清熱解毒、 散瘀消腫、抑菌消炎來改善病變血循環(huán)、促進(jìn)黏膜再生、恢復(fù)正常功能的功效，其健脾補(bǔ)血成分尚能增強(qiáng)單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)吞噬功能，提高機(jī)體免疫功能、清除自由基，發(fā)揮標(biāo)本兼治的作用[12]。維甲酸是腫瘤細(xì)胞的誘導(dǎo)分化劑，借助于維甲酸受體調(diào)控基因的表達(dá)，改變腫瘤細(xì)胞表型及分化，同時(shí)調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡基因，如P53、Bcl-2基因的表達(dá)，誘導(dǎo)細(xì)胞在G1/S節(jié)點(diǎn)前凋亡，滅活某些癌基因和細(xì)胞因子的表達(dá)[13]。胃復(fù)春聯(lián)合維甲酸用于治療胃癌前病變，把傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的扶正祛邪與西醫(yī)治療的針對(duì)性強(qiáng)、起效快、療效確切相結(jié)合，具有雙向調(diào)節(jié)和多靶點(diǎn)作用的特點(diǎn)，為腫瘤的化學(xué)預(yù)防開辟了新途徑。

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Weifuchun Tablets Combination with Retinoic Acid in Treatment of Gastric Precancerous Lesions and its Effect on Expression ofRbGene andC-erbB-2 Gene

SU Xiu-li,JIN Jian-jun,XING Lu-qi

(First Affiliated Hospital, Henan University of Science and Technology,Luoyang 471003,China)

ObjectiveTo investigate the effect of the Weifuchun tablets with combination Retinoic Acid tablet on gastric precancerous lesions and its regulative effect on the expression of theRbgene and theC-erbB-2 gene.MethodsOne hundred and twenty-two patients with gastroscopy and pathology confirmed dysplasia(DYS) with or without intestinal metaplasia(IM)were classified randomly into treatment group and control group .The treatment group consisting of 63 patients was treated with a Weifuchun tablets，Retinoic Acid tablet,Omeprazole tablet and Sucralfate tablet.The other 59 patients were treated with Sucralfate tablet and Omeprazole tablet as control.RbandC-erbB-2 protein were detected by the immunohistochemical method before and after the treatment.ResultsCompared with the control group 37.29% of effective power, the treatment group 68.25% was significantly improved after three months of treatment(P<0.05). The abnormal expression of the Rb Gene and the C-erbB-2 Gene was found in both groups and effectly regulated by Weifuchun tablets and Retinoic Acid tablet.ConclusionThe combination of Weifuchun tablets and Retinoic Acid tablet was effective in treating gastric dysplasia and intestinal metaplasia.It could reduce the risk of carcinogenesis of gastric precancerous lesions by reversing the gastric mucosa lesions and regulating the expression of tumor suppressor genesRb, oncogeneC-erbB-2. The combination of Weifuchun tablets and Retinoic Acid tablet could effectly be used in the treatment of precancerous lesions.

Weifuchun tablets；Retinoic Acid tablet；precancerous lesions of gastric carcinoma；tumor suppressor genesRb；oncogeneC-erbB-2

2015-01-20

河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院，河南洛陽(yáng) 471003

蘇秀麗(1972-)，女，河南扶溝人，主治醫(yī)師，從事消化內(nèi)科臨床工作。

金建軍，男，教授，主任醫(yī)師，E-mail：jinjjhn@yahoo.cn

R735.2

A

1672-688X(2015)02-0090-04