肺炎支原體肺炎患兒血清中IL-9、IL-17 水平

何 軍，張 姝，許 琦，尹 科，張 捷，田洪倫，祝 靜，羅 潔

(貴州省第二人民醫(yī)院 檢驗科，貴州 貴陽 50004)

肺炎支原體(my-coplasma，pneumoniae，MP)感染小兒可引起肺炎支原體肺炎(mycoplasma pneumoniapneumonia，MPP)，在MPP 的發(fā)病過程中存在體液免疫、細胞免疫平衡紊亂，主要表現(xiàn)為T淋巴細胞免疫功能低下和B 淋巴細胞異常活化［1－2］。白細胞介素作為由多種細胞產(chǎn)生并作用于多種細胞的一類細胞因子，具有調(diào)節(jié)固有免疫和適應性免疫的作用，參與免疫細胞分化發(fā)育、介導炎癥反應等。本研究通過檢測支原體肺炎患兒血清中白細胞介素-9(IL-9)、白細胞介素-17(IL-17)水平來了解肺炎支原體感染對機體免疫功能的影響。

1 對象與方法

1.1 對象

收集2013 年8 月～12 月兒科門診初診因發(fā)熱咳嗽、血液肺炎支原體抗體陽性的肺炎患兒60例納入實驗組，其中男35 例，女25 例，年齡(6±2.8)歲。所有病例均符合《實用兒科學》中肺炎支原體肺炎診斷標準，排除哮喘、并發(fā)癥及免疫缺陷疾病患兒;入選患兒半年內(nèi)無免疫制劑使用史。對照組20 例，均為健康查體兒童，男12 例，女8 例，年齡(5±3.1)歲。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P ＞0.05)。

1.2 主要試劑和儀器

MYCO Ⅱ肺炎支原體抗體診斷試劑盒(被動凝集法)為日本富士瑞必歐株式會社生產(chǎn)，試劑批號WP40418;IL-9、IL-17 試劑為上海瓦蘭生物科技有限公司生產(chǎn)，批號分別為WK-E10253 及WKE10092。北京普朗(DNM-9602)酶標儀。

1.3 方法及檢驗指標

血樣本為采集清晨空腹靜脈血3 mL 于真空無抗凝采血管，經(jīng)37 ℃水浴30 min，3 000 r/min 離心15 min，取血清1.5 mL 于EP 管，－80 ℃冰箱保存待測。肺炎支原體抗體IgM 檢測:按1∶80、1∶60、1∶320作倍比稀釋，以≥1∶80 稀釋倍數(shù)滴度為肺炎支原體抗體陽性;根據(jù)最終稀釋倍數(shù)分1∶80 倍、1∶160倍及≥1∶320 倍組，用ELISA 法檢測每組血清IL-9、IL-17 水平，以門診正常健康體檢者血清樣本為對照。

1.4 統(tǒng)計學方法

用SPSS 17.0 統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)。計量數(shù)據(jù)以均數(shù)加減標準差)表示，組間比較用方差分析，LSD 法。以P ＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

肺炎支原體抗體陽性1∶80 倍和1∶160 倍患兒的IL-9 水平較正常對照降低(P ＜0.05);肺炎支原體抗體陽性從1∶80 倍組、1∶160 倍組及≥1∶320倍組逐漸升高，1∶80 倍組與≥1∶320 倍組比較有統(tǒng)計學意義(P ＜0.05);IL-17 水平，肺炎支原體抗體陽性各滴度組較正常對照降低(P ＜0.05)，且組間變化不大(P ＞0.05)。見表1。

表1 各肺炎支原體抗體滴度組與對照組IL-9、IL-17 水平，(ng/L)Tab.1 Serum level of IL-9 and IL-17 in the different groups

表1 各肺炎支原體抗體滴度組與對照組IL-9、IL-17 水平，(ng/L)Tab.1 Serum level of IL-9 and IL-17 in the different groups

與正常對照比較，(1)P ＜0.05;與≥1∶320 比較，(2)P ＜0.05

細胞因子1∶80肺1炎∶1支60原 體抗體≥滴1∶度320正常對照IL-9 14.82±5.11(1)(2)16.37±6.0(1)18.94±5.86 21.09±4.23 IL-17 4.88±2.90(1) 4.71±2.38(1) 5.77±1.94(1)8.58±1.37

3 討論

MP 是一種介于病毒和細菌之間的最小原核生物，無細胞壁，能自行繁殖，主要經(jīng)呼吸道傳染，MP 感染兒童機體后，血行播散釋放毒物造成機體細胞損傷，MP 抗原還可刺激B 細胞產(chǎn)生免疫復合物而致機體免疫損傷而引起機體免疫功能變化。

IL-9 由CD4+T 細胞產(chǎn)生的新型Th9 細胞分泌，調(diào)節(jié)T 細胞和B 細胞參與應答，有學者認為IL-9 可作為Th17 的衍生因子對炎性疾病有促進作用［3］。Th17 細胞是近年發(fā)現(xiàn)的細胞亞群，IL-23 是維持Th17 存活的重要因子，Th17 能否能擴增和存活受IL-23 的影響［4］，Th17 主要分泌的IL-17 可發(fā)揮抗細菌、抗真菌、抗寄生蟲等作用［5］，在抗感染免疫中的作用越來越受到重視［6］。本研究結(jié)果顯示，在肺炎支原體肺炎患兒肺炎支原體抗體不同滴度組，血清IL-9、IL-17 水平較正常對照低，提示肺炎支原體感染可能導致機體血清IL-9 和IL-17水平降低。IL-9 和IL-17 同是前炎癥因子，在感染炎癥時二者本應表現(xiàn)升高，但在肺炎支原體肺炎患兒反而較正常對照組降低，IL-17 降低與王冬梅等［7］報道存在差異，也與國外學者利用小鼠動物模型，研究的結(jié)果存在差異［8］，這是否與入組研究對象的采集時間、排除標準及研究方法等有關(guān)，尚需進一步研究。本研究發(fā)現(xiàn)IL-9 水平在肺炎支原體抗體高滴度時較低滴度時增高，作為前炎癥因子，可能隨肺炎支原體感染機體強度有關(guān)。本研究顯示的IL-9 升高，IL-17 變化不大，可能在肺炎支原體肺炎患兒中IL-9 無關(guān)Th17 細胞分化［9］，但此機制尚需進一步驗證。

IL-9、IL-17 在肺炎支原體肺炎患兒血清中水平改變明顯，肺炎支原體肺炎患兒感染肺炎支原體時機體IL-9、IL-17 水平降低，隨著肺炎支原體抗體稀釋滴度倍數(shù)陽性增大，IL-9 水平逐漸升高。證明肺炎支原體感染患兒，機體IL-17 可能未參與機體免疫清除肺炎支原體的作用，而IL-9 隨感染程度加深，逐漸發(fā)揮免疫清除肺炎支原體的作用，為進一步認識肺炎支原體感染對兒童機體免疫功能的影響提供了理論依據(jù)。

［1］王娟，段全紀，張迎春.地塞米松對支原體肺炎肺外并發(fā)癥患兒免疫指標的影響［J］.貴陽醫(yī)學院學報，2012(1):60－63.

［2］郭彥斌，尚莉麗，桂金貴，等.肺炎支原體肺炎患兒機體免疫功能變化［J］.安徽醫(yī)學，2014(7):913－915.

［3］Elizabeth C.Nowak，Casey T，et al.IL-9 as a mediator of Th17-driven inflammatory disease［J］.Exp.Med，2009:1653－1660.

［4］Betteli E，Carrier Y，Gao W，et al.Reciprocal developmental pathways for the generation of pathogenic effector Th17 and regulatory T cells［J］.Nature，2006(3):235－238.

［5］張玉俠.效應分子IL-17 的抗感染作用［J］.國際免疫學雜志，2009(3):241－244.

［6］Curtis MM，Way SS.Interleukin-17 in host defense against bacterial，mycobacterial and fungal pathogens［J］.Immunology，2009(2):177－185.

［7］王冬梅，姜采榮，王茹，等.肺炎支原體肺炎患兒血清中白介素-23/白介素-17 的表達［J］.臨床兒科雜志，2013(10):933－936.

［8］Satoshi K，Takako O，Hideo O，et al.Role IL-17A and IL-10 in the antigen induced inflammation model by Mycoplasma pneumonia［J］.BMC Microbiology，2014(14):156.

［9］Wassim E，Elizabeth M，Radshaw B，et al.IL-9 induces differentiation of Th17 cells and enhances function of FoxP3+ natural regulatory T cells［J］.PNAS，2009:12885－12890.