FLT3-ITD突變急性髓系白血病的臨床及免疫表型特征分析

劉延方，朱穎超，張秋堂，李 濤，馬 杰，謝新生，孫 慧，孫 玲，萬鼎銘

1)鄭州大學第一附屬醫(yī)院血液內(nèi)科 鄭州 450052 2) 鄭州大學第一附屬醫(yī)院血液病研究室 鄭州 450052

FLT3-ITD突變急性髓系白血病的臨床及免疫表型特征分析

劉延方1)△，朱穎超1)，張秋堂2)，李 濤2)，馬 杰1)，謝新生1)，孫 慧1)，孫 玲1)，萬鼎銘1)

1)鄭州大學第一附屬醫(yī)院血液內(nèi)科 鄭州 450052 2) 鄭州大學第一附屬醫(yī)院血液病研究室 鄭州 450052

△男，1962年5月生，博士，教授，主任醫(yī)師，研究方向：血液病的基礎與臨床，E-mail：liuyf371@163.com

FLT3-ITD突變；急性髓系白血?。幻庖弑硇?/p>

人FLT3(fms-like tyrosine kinase 3)基因是Ⅲ型受體酪氨酸激酶 (receptor tyrosine kinase, RTK) 家族成員之一。在正常人骨髓中，F(xiàn)LT3基因的表達僅限于CD34+干/祖細胞，其與多種胞漿蛋白作用介導一系列細胞內(nèi)信號傳導，促進細胞的增殖與分化[1]。FLT3內(nèi)部串聯(lián)重復(internal tandem duplication, ITD)突變是FLT3基因常見的一種突變類型，具有FLT3-ITD突變(FLT3-ITDm+)的急性髓系白血病(AML)患者臨床治療反應差，預后不良[2]，但對其免疫表型特征報道的較少。該研究回顧性分析了43例FLT3-ITDm+與109例無FLT3-ITD突變(FLT3-ITDm-)的AML患者的臨床與免疫表型特征，報道如下。

1 對象與方法

1.1 病例來源 收集2013年5月到2014年3月鄭州大學第一附屬醫(yī)院收治的FLT3-ITDm+AML患者43例及同期于該院診斷及治療的FLT3-ITDm-AML患者109例。排除確診為急性早幼粒細胞白血病、急性混合細胞白血病及實驗室檢查資料不完整的患者。AML診斷和療效標準參照WHO[3]和張之南主編的《血液病診斷及療效標準》[4]。

1.2 免疫表型分析 采用4色多參數(shù)流式細胞儀進行免疫表型分析，共檢測了CD2、CD3、CD7、CD4、CD8、CD10、CD19、CD20、CD79a、CD16、CD56、CD13、CD33、CD14、CD64、CD15、CD117、CD11b、cMPO、CD34、CD38、HLA-DR、cCD3等23個抗原。以CD45/SSC設門分析白血病細胞免疫表型，計算抗原的表達比例。

1.3 基因突變檢測 采用PCR擴增產(chǎn)物聯(lián)合基因測序法檢測FLT3基因的ITD突變[5]。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 17.0進行數(shù)據(jù)分析。兩組性別構(gòu)成的比較采用χ2檢驗；年齡及血紅蛋白(Hb)呈正態(tài)分布，兩組間的比較應用兩獨立樣本t檢驗。白細胞計數(shù)(WBC)、血小板計數(shù)(PLT)、骨髓原始細胞比例及抗原表達比例等指標不符合正態(tài)分布，數(shù)據(jù)以[M(P25～P75)]表示，兩組間的比較應用秩和檢驗。檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 FLT3-ITDm+與FLT3-ITDm-AML患者臨床特征的比較 見表1。與FLT3-ITDm-AML患者相比，F(xiàn)LT3-ITDm+AML患者WBC、骨髓原始細胞比例顯著增高，兩組在發(fā)病年齡、性別構(gòu)成、Hb及PLT方面差異無統(tǒng)計學意義。

2.2 FLT3-ITDm+與FLT3-ITDm-AML患者白血病細胞免疫表型的比較 見表2。FLT3-ITDm+與FLT3-ITDm-AML患者共有5個白血病細胞抗原表達的差異存在統(tǒng)計學意義。其中在FLT3-ITDm+AML患者中表達顯著高于FLT3-ITDm-AML患者的抗原包括髓系抗原CD33、CD11b和淋系抗原CD7；在FLT3-ITDm+AML患者中表達顯著低于FLT3-ITDm-AML患者的抗原包括髓系抗原CD15和干/祖細胞抗原CD34。

表1 FLT3-ITDm+與FLT3-ITDm-AML患者臨床特征的比較

表2 FLT3-ITDm+與FLT3-ITDm- AML患者免疫表型的比較 %

3 討論

FLT3-ITD突變是FLT3基因最常見的一種突變類型，國內(nèi)報道15.9%～20.8%的成人AML患者存在FLT3-ITD突變[6-7]，低于國外報道(25%～31%)[2，8]，提示可能存在種族差異。由于FLT3-ITD突變引發(fā)RTK持續(xù)激活，使細胞發(fā)生自發(fā)性、非受體依賴性的增殖，導致AML患者外周血WBC增高[9]。該組資料亦顯示FLT3-ITDm+患者就診時外周血WBC顯著高于FLT3-ITDm-患者，提示FLT3-ITD突變可能參與了白血病細胞的增殖分化或者抑制了白血病細胞的凋亡，其具體機制需要進一步研究。臨床資料[10-12]表明，F(xiàn)LT3-ITD突變是AML患者重要的預后影響因素。

Munoz等[13]發(fā)現(xiàn)FLT3-ITDm+AML患者白血病細胞高表達CD13、CD33、CD11b、CD64和CD4，低表達CD34和CD117，提示FLT3-ITDm+AML患者白血病細胞免疫標志紊亂。該研究觀察到FLT3-ITDm+AML患者的白血病細胞高表達髓系抗原CD33、CD11b及淋系抗原CD7，低表達髓系標志CD15和干/祖細胞抗原CD34。文獻報道[2,14]淋系抗原CD7是FLT3-ITDm+AML細胞最常見的差異性表達抗原。FLT3基因在單核系細胞的分化發(fā)育過程中表達，并促進其增殖[10]。FLT3-ITD突變在伴單核細胞分化發(fā)育障礙的M5亞型中的表達顯著增高[15]。作者亦發(fā)現(xiàn)單核系抗原CD11b在FLT3-ITDm+AML患者中高表達，與Munoz等[13]研究結(jié)果一致。CD11b是AML預后不良的標志之一[16]，因此，F(xiàn)LT3-ITD突變與 AML患者白血病細胞高表達CD11b之間是否存在內(nèi)在的病理生理學關聯(lián)需要進一步研究。上述結(jié)果進一步表明FLT3-ITDm+AML白血病細胞具有與其他AML細胞不同的細胞表面抗原分化紊亂。

總之，研究FLT3-ITDm+AML患者的臨床及免疫表型特征有助于臨床醫(yī)生早期識別這些高危AML患者，并及時采取有效的誘導緩解及治療方案，提高誘導緩解率，為后續(xù)治療如造血干細胞移植等爭取時機，使患者受益。

[1]Gilliland DG,Griffin JD.The roles of FLT3 in hematopoiesis and leukemia[J].Blood,2002,100(5):1532

[2]Chauhan PS,Ihsan R,Singh LC,et al.Mutation of NPM1 and FLT3 genes in acute myeloid leukemia and their association with clinical and immunophenotypic features[J].Dis Markers,2013,35(5):581

[3]Vardiman JW,Harris NL,Brunning RD.The World Health Organization (WHO) classification of the myeloid neoplasms[J].Blood,2002,100(7):2292

[4]張之南,沈悌.血液病診斷及療效標準[M].3版.北京:科學出版社,2007:106

[5]崔麗娟,許飛,馬榮,等.PCR結(jié)合DNA測序技術檢測急性白血病FLT3與NPM1基因突變及其臨床意義[J].寧夏醫(yī)學雜志,2013,35(7):589

[6]中美聯(lián)合上海市白血病協(xié)作組.468例急性白血病患者FLT3基因突變及其預后價值分析[J].中華血液學雜志,2010,31(1):1

[7]徐媛媛,高麗,丁一,等.急性髓系白血病中FLT3-ITD基因突變的檢測及其臨床意義[J].中國實驗血液學雜志,2012,20(6):1312

[8]Al-Mawali A,Gillis D,Lewis I.Characteristics and prognosis of adult acute myeloid leukemia with internal tandem duplication in the FLT3 gene[J].Oman Med J,2013,28(6):432

[9]Meshinchi S,Appelbaum FR.Structural and functional alterations of FLT3 in acute myeloid leukemia[J].Clin Cancer Res,2009,15(13):4263

[10]Govedarovic N,Marjanovic G.Frequency and prognostic impact of FLT3/ITD mutation in patients with acute myeloid leukaemia[J].J BUON,2011,16(1):108

[11]Sallmyr A,Fan J,Datta K,et al.Internal tandem duplication of FLT3 (FLT3/ITD) induces increased ROS production, DNA damage, and misrepair: implications for poor prognosis in AML[J].Blood,2008,111(6):3173

[12]Park SH,Chi HS,Min SK,et al.Prognostic significance of the FLT3 ITD mutation in patients with normal-karyotype acute myeloid leukemia in relapse[J].Korean J Hematol,2011,46(2):88

[13]Munoz L,Aventín A,Villamor N,et al.Immunophenotypic findings in acute myeloid leukemia with FLT3 internal tandem duplication[J].Haematologica,2003,88(6):637

[14]Rausei-Mills V,Chang KL,Gaal KK,et al.Aberrant expression of CD7 in myeloblasts is highly associated with de novo acute myeloid leukemias with FLT3/ITD mutation[J].Am J Clin Pathol,2008,129(4):624

[15]Thiede C,Steudel C,Mohr B,et al.Analysis of FLT3-activating mutations in 979 patients with acute myelogenous leukemia: association with FAB subtypes and identification of subgroups with poor prognosis[J].Blood,2002,99(12):4326

[16]Chen MH,Atenafu E,Craddock KJ,et al.CD11b expression correlates with monosomal karyotype and predicts an extremely poor prognosis in cytogenetically unfavorable acute myeloid leukemia[J].Leuk Res,2013,37(2):122

(2014-29-26 收稿 責任編輯王 曼)

10.13705/j.issn.1671-6825.2015.03.037