稀有抗核抗體與免疫性疾病的相關(guān)性研究*

張馨月 綜述，孫艷麗 審校

(濰坊醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗系/山東省臨床檢驗診斷學(xué)高校重點實驗室納米醫(yī)學(xué)技術(shù)研究所，山東濰坊 261053)

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稀有抗核抗體與免疫性疾病的相關(guān)性研究*

張馨月 綜述，孫艷麗△審校

(濰坊醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗系/山東省臨床檢驗診斷學(xué)高校重點實驗室納米醫(yī)學(xué)技術(shù)研究所，山東濰坊 261053)

抗核抗體；自身免疫性疾病；自身抗體；腫瘤

稀有抗核抗體(ANA)指在用間接免疫熒光法(IIF)檢測陽性的患者中流行率低于1%的ANA，這一定義首次由比利時魯汶大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗學(xué)系的Vermeersch和Bossuyt[1]教授提出，他們收集了1998～2011年魯汶大學(xué)醫(yī)院首次進行ANA檢測為陽性的9 268例患者信息，將不同類型ANA與疾病之間的關(guān)系進行分析，將流行率低于1%的ANA命名為稀有ANA。有研究發(fā)現(xiàn)，只有少量稀有ANA，如抗多核點抗體(MND)、抗核膜抗體與自身免疫性疾病之間具有相關(guān)性，其余稀有ANA與自身免疫性疾病的診斷并無很好的臨床相關(guān)性，它們多與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，尤其是細胞周期相關(guān)的ANA。

1 檢測方法

稀有ANA與普通ANA的檢測方法相同，以人喉癌上皮細胞HEp-2細胞為基礎(chǔ)的IIF是目前應(yīng)用最為廣泛的ANA篩選技術(shù)[2]。與傳統(tǒng)的小鼠器官冷凍切片法相比較，HEp-2細胞法具有細胞均一性好、細胞核大、細胞有絲分裂發(fā)生率(10%～15%的細胞處于有絲分裂期)高的特點。因而該法更易標(biāo)準(zhǔn)化、更適合細胞核和細胞質(zhì)中多種復(fù)雜的自身抗體檢測，也提高了細胞周期相關(guān)抗體檢測的靈敏度。然而，以HEp-2細胞為基礎(chǔ)的IIF也有不足之處，如檢測抗Jo-1抗體的假陰性率偏高。近幾年來，酶免疫測定法和熒光磁珠法已逐漸取代了IIF，它們具有簡便、快速、自動化程度高的優(yōu)點，而且多重磁珠法可同時檢測多種自身抗體[3-4]。然而，這兩種測定方法的靈敏度不如IIF，原因可能是由于這些方法中應(yīng)用的抗原數(shù)量有限[5]。因此，IIF仍是目前ANA檢測的常規(guī)篩選方法。

2 類 型

根據(jù)抗體來源，稀有ANA類型主要包括三大類：稀有細胞周期相關(guān)自身抗體、稀有細胞核相關(guān)自身抗體、稀有細胞質(zhì)相關(guān)自身抗體。其中稀有細胞周期相關(guān)自身抗體包括抗核有絲分裂器蛋白1(NuMA1)抗體、抗驅(qū)動蛋白HsEg5抗體、抗著絲粒蛋白F(CENP-F)抗體、抗中間體抗體、抗增殖細胞核抗原(PCNA)抗體；稀有細胞核相關(guān)自身抗體包括MND和抗中心?？贵w；稀有細胞質(zhì)相關(guān)自身抗體包括抗高爾基體抗體。

2.1 稀有細胞周期相關(guān)自身抗體 細胞周期是指使一個細胞復(fù)制并分裂成為2個完全相同的子細胞的過程，分為間期和分裂期。在間期，細胞生長并且DNA進行復(fù)制，因此，間期一般分為3個階段：G1期、S期、G2期，其中DNA復(fù)制及PCNA的生成主要在S期。在分裂期，紡錘體、中心體、動粒三者在細胞核分離過程中發(fā)揮了重要作用。目前，針對紡錘體、中心體、動粒、PCNA、中間體的自身抗體均可以在患者血清中被檢測到，但其流行率低于1%，因而屬于稀有抗核抗體的范疇[6]。

2.1.1 抗紡錘體自身抗體 紡錘體是由微管和微管相關(guān)蛋白組成的結(jié)構(gòu)，對2個中心體起連接作用。在紡錘體的結(jié)構(gòu)蛋白中，目前已知有兩種蛋白能在體內(nèi)誘導(dǎo)自身抗體的產(chǎn)生[7]：一種是NuMA1，又名親中心體蛋白，相對分子質(zhì)量為230×103，在間期廣泛分布于細胞核內(nèi)，而在分裂期作為紡錘體的重要成分參與細胞分裂；另一種是驅(qū)動蛋白HsEg5，又名NuMA2，是中心體微管的一種非常重要成分，參與了有絲分裂前期和中期中心體的分離，因而只存在于有絲分裂期[7]。用IIF檢測抗NuMA1抗體的結(jié)果顯示，在間期，該抗體在細胞核中呈現(xiàn)許多細小的斑點，在分裂期則呈現(xiàn)出中心粒著色。用IFF檢測抗HsEg5抗體結(jié)果顯示，整個紡錘體都著色較深，這僅見于分裂期[7]。

在臨床上，血清抗NuMA1抗體比抗HsEg5抗體更為常見[8]。Szalat等[7]研究發(fā)現(xiàn)，在ANA陽性患者中，抗NuMA1抗體與抗HsEg5抗體的流行率分別為0.26%和0.12%。多數(shù)研究認為這兩種抗體與自身性免疫性疾病，如干燥綜合征(SjS)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、混合性結(jié)締組織病(MCTD)的發(fā)生密切相關(guān)。Szalat等[7]研究發(fā)現(xiàn)，約67.5%的抗NuMA1抗體與抗HsEg5抗體為陽性的患者最后被確診為全身性自身免疫性疾病(SAID)[7]。然而，Vermeersch和Bossuyt[1]研究發(fā)現(xiàn)，66例抗NuMA1抗體為陽性的患者中，僅有11例為SAID患者，其中3例為SLE，1例為SjE，2例為MCTD，5例為類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)。由此可見，抗NuMA1抗體對SAID的陽性預(yù)測值為17%。他們的研究還發(fā)現(xiàn)，抗紡錘體自身抗體對自身性免疫性疾病的陽性預(yù)測值伴隨抗體效價的提高也逐漸提高：當(dāng)抗體效價大于或等于1∶320時，陽性預(yù)測值為26.0%；當(dāng)抗體效價大于或等于1∶640時，陽性預(yù)測值為31.0%[1]。此外，與抗紡錘體自身抗體比較相關(guān)的一類疾病是腫瘤，陽性預(yù)測值為7.6%[1]。由此可見，與抗紡錘體自身抗體最相關(guān)的疾病是SAID，特別是當(dāng)抗體效價大于或等于1∶640時；其次是腫瘤。

2.1.2 抗中心體抗體 中心體是細胞分裂間期和有絲分裂期主要的微管組織中心，每個中心體含有2個中心粒。在分裂間期，中心體完成復(fù)制；在有絲分裂期，2個中心體分離并移到紡錘體的兩極。構(gòu)成中心體的蛋白質(zhì)，如中心粒周蛋白(pericentrin)、中心體蛋白ninein、Cep250、中心粒外周物質(zhì)1、烯醇酶等均可誘導(dǎo)產(chǎn)生自身抗體[9]。

在臨床上，抗中心體抗體比較少見。在Vermeersch和Bossuyt[1]收集到的9 268例ANA陽性患者中，抗中心體抗體陽性患者僅有6例，其流行率小于0.1%。目前，該抗體已在SjS、SLE、硬皮病、雷諾綜合征(RaS)、病毒和支原體感染患者體內(nèi)被發(fā)現(xiàn)。Mack等對21例抗中心體抗體為陽性的患者進行了分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有7例為自身免疫性疾病患者，有5例為病毒感染或感染后共濟失調(diào)患者。由此可見，該抗體對自身免疫性疾病和感染性疾病的陽性預(yù)測值分別為33.0%和24.0%。在Vermeersch和Bossuyt[1]收集到的6例抗中心體抗體為陽性的患者中，有3例抗體效價為1∶320，其中1例為SLE合并RaS患者，1例為疑似MCTD合并RaS患者，該抗體對SAID的陽性預(yù)測值為33%；另有3例抗體效價為1∶80，均為非自身免疫性疾病患者[1]。由此可見，效價大于或等于1∶320的抗中心體抗體可能與SAID之間具有一定的相關(guān)性。

2.1.3 抗CENP-F抗體 在有絲分裂期，紡錘體通過動粒黏附到著絲粒上。1980年，Tan等在1例SLE患者體內(nèi)首次發(fā)現(xiàn)了抗著絲?？贵w，迄今已發(fā)現(xiàn)了10余種抗著絲粒自身抗體[9]。這些自身抗體主要包括4大類：抗CENP抗體、抗染色體域蛋白抗體、抗拓撲異構(gòu)酶II抗體和其他抗特征不典型蛋白的抗體。到目前為止，已被確認的抗CENP抗體有10多種。根據(jù)抗體是存在于整個細胞周期還是只存在于細胞周期中的某一點，現(xiàn)有的抗CENP抗體又可分為兩大類[9]：第一類是存在于整個細胞周期內(nèi)的抗CENP抗體，主要包括抗CENP-A、抗CENP-B、抗CENP-C這3種抗體，這些抗體與硬皮病的發(fā)生密切相關(guān)；第二類是指存在于細胞周期中某一點的抗CENP抗體，包括抗CENP-E抗體、抗CENP-F抗體等。其中，抗CENP-F抗體比較特別，它定位于紡錘體中間區(qū)及細胞間橋上，一般不與其他抗著絲粒抗體同時出現(xiàn)，在分裂間期末或有絲分裂后期才清晰可見，參與整個有絲分裂過程，在有絲分裂完成后會被降解掉[10]。Welner等[10]證實，約50%抗CENP-F抗體為陽性的患者為腫瘤患者，因此它可能可以作為腫瘤的一種標(biāo)志物。在Vermeersch和Bossuyt[1]收集到的22例抗CENP-F抗體為陽性的患者中，僅有3例為惡性腫瘤患者，1例為急性髓性白血病骨髓移植后發(fā)生移植物抗宿主病患者，抗CENP-F抗體對腫瘤的陽性預(yù)測值為18.0%。由此可見，抗CENP-F抗體與腫瘤之間具有較高的相關(guān)性。

2.1.4 抗中間體抗體 中間體又稱Flemming體，于1891年由德國生物學(xué)家華爾瑟·弗萊明發(fā)現(xiàn)。它形成于細胞分裂的終末階段，是細胞質(zhì)分裂過程中斷裂發(fā)生的位點，能在有絲分裂后期復(fù)制的基因組分離后將細胞內(nèi)容物分配到2個子細胞中[11]。中間體中含有大量微管蛋白及其他蛋白，可誘導(dǎo)自身抗體產(chǎn)生[12]?？怪虚g體蛋白抗體比較少見，有研究發(fā)現(xiàn)，抗中間體蛋白抗體與SjS、RaS及腫瘤之間具有相關(guān)性。在Vermeersch和Bossuyt[1]收集到的12例抗中間體抗體為陽性的患者中，有5例為癌癥患者，其中2例的抗體效價大于1∶640。以上結(jié)果表明，抗中間體抗體與腫瘤之間具有較高的相關(guān)性。

2.1.5 抗PCNA抗體 PCNA是一種相對分子質(zhì)量為34×103的蛋白質(zhì)，存在于細胞核內(nèi)，為DNA聚合酶δ的輔助因子，在DNA復(fù)制及DNA修復(fù)過程中發(fā)揮了重要作用[13]。1978年，Miyachi等在SLE患者體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了抗PCNA抗體，它在30%～60%處于S期的細胞中呈現(xiàn)明顯的由細到粗的斑點型核染色。雖然在乙型肝炎和丙型肝炎患者體內(nèi)也發(fā)現(xiàn)了抗PCNA抗體，它仍被認為是SLE診斷中最特異的自身抗體[13]。據(jù)報道，1.1%～6.0%的SLE患者體內(nèi)存在抗PCNA抗體[13]。在Vermeersch和Bossuyt[1]收集到的28例抗PCNA抗體為陽性的患者中，僅有1例為伴腎小球腎炎的SLE患者，6例為自身免疫性甲狀腺炎患者，抗PCNA抗體對SLE的陽性預(yù)測值僅為3.6%。另有研究發(fā)現(xiàn)，抗PCNA抗體與狼瘡性腎炎的發(fā)生率更相關(guān)[14-15]。由此可見，抗PCNA抗體并不是SAID的特異性抗體，其與狼瘡性腎炎的發(fā)生具有一定相關(guān)性。

2.2 稀有核相關(guān)抗體

2.2.1 抗MND抗體 抗MND抗體染色的特點是在除核仁及染色體以外的細胞核其他區(qū)域中有3～20個大小不等的小圓點，主要有抗Sp100和抗PML兩種抗體[16]。20世紀80年代，大量研究認為，抗MND抗體與原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)之間具有很高的相關(guān)性，后來的研究證實該抗體不是PBC的特異性抗體，在其他自身免疫性疾病中也發(fā)現(xiàn)了該抗體[17]。在Vermeersch和Bossuyt[1]收集到的17例抗MND抗體為陽性的患者中，有8例患者抗體效價小于或等于1∶320，其中僅有1例為SLE患者，無PBC患者；有9例患者的抗體效價大于或等于1∶640，僅有2例為PBC患者，1例為MCTD患者，1例為自身免疫性肝炎患者，1例為自身免疫性甲狀腺炎患者，效價大于或等于1∶640的抗MND抗體對PBC的陽性預(yù)測值為22.0%。以上結(jié)果表明，高效價(≥1∶640)的抗MND抗體與自身免疫性疾病尤其是PBC之間具有較高的相關(guān)性。

2.2.2 抗核膜抗體 核膜由內(nèi)膜、外膜、核孔復(fù)合物及核纖層組成。外膜與粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相連通，內(nèi)膜與核纖層相連接。核纖層是由核纖層蛋白A、B1、B2、C構(gòu)成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。核孔是貫穿于核膜的結(jié)構(gòu)，包括100多種蛋白，可調(diào)節(jié)水溶性分子的跨核膜運輸。目前發(fā)現(xiàn)的抗核孔抗體主要有抗gp210糖蛋白和抗p62核孔蛋白兩種抗體[18]。

1983年，抗核膜抗體在硬皮病患者中首次被發(fā)現(xiàn)，該抗體為抗核纖層蛋白A和C的多克隆抗體，其類型為光滑環(huán)樣核。1988年，在多發(fā)性肌炎患者體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了第2種類型的抗核膜抗體，該抗體為抗核孔抗體，其類型為點狀環(huán)形核。接下來，其他抗核膜蛋白被相繼發(fā)現(xiàn)。用IIF進行抗核孔抗體染色結(jié)果顯示，在分裂間期，核膜呈現(xiàn)顆粒狀染色；在有絲分裂期，核膜呈現(xiàn)均質(zhì)性染色。

有研究發(fā)現(xiàn)，抗核纖層蛋白B1和B2抗體存在于SLE、SjS、RA、風(fēng)濕性多肌病、抗磷脂綜合征、病毒感染及自身免疫性甲狀腺炎等多類疾病中，因而特異性較差[19]?？筭p210抗體、抗內(nèi)核膜蛋白核纖層蛋白B受體和核纖層相關(guān)多肽抗體主要存在于PBC患者中，在其他疾病如痛風(fēng)和骨關(guān)節(jié)炎中也存在[20-21]。在Vermeersch和Bossuyt[1]收集到的44例抗核膜抗體為陽性的患者中，9例為自身免疫性肝病患者，陽性預(yù)測值為41.0%，其中6例為PBC患者，2例為自身免疫性肝炎，1例為自身免疫性膽道炎；10例抗體效價大于或等于1∶640的患者中，4例為自身免疫性肝病患者，3例為PBC患者，1例為自身免疫性肝炎患者，對自身免疫性肝病的陽性預(yù)測值為80.0%；在34例抗體效價處于1∶80～1∶320的患者中，有6例患者患有自身免疫性肝病，陽性預(yù)測值為18.0%。由此可見，不管是高效價還是低效價的抗核膜抗體與自身免疫性肝病尤其是PBC之間均有相關(guān)性。

2.3 抗高爾基體抗體 高爾基體在蛋白和脂質(zhì)的加工與包裝過程中扮演了重要角色?？垢郀柣w抗體于1892年由Rodriguez在1例伴淋巴瘤的干燥綜合征患者體內(nèi)首次被發(fā)現(xiàn)。在臨床上比較少見，在ANA陽性患者中的流行率為0.11%～0.37%[22]。IIF染色的特點為在靠近核的一側(cè)呈明顯不規(guī)則的斑點型染色。

抗高爾基體抗體類型多樣，目前已知的有抗高爾基體蛋白抗體、抗高爾基蛋白95、97、160、210、245抗體、抗甜菜堿同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶抗體[22]。有研究發(fā)現(xiàn)，抗高爾基體抗體的流行率與高爾基體抗原的相對分子質(zhì)量之間呈正相關(guān)，如抗高爾基體蛋白抗體在抗高爾基體抗體為陽性患者中的流行率最高，約為50%[23]。

抗高爾基體抗體可在SjS、SLE、RA、混合性結(jié)締組織病等自身免疫性疾病患者血清中被檢出[24]。在病毒感染的患者體內(nèi)有時也可檢出短暫性低滴度的抗高爾基體抗體，而持續(xù)性高滴度的高爾基體抗體一般被認為是無癥狀SAID的早期標(biāo)志。在Vermeersch和Bossuyt[1]收集到的34例抗高爾基體抗體為陽性的患者中，僅有5例為SAID患者，陽性預(yù)測值為15.0%；10例抗體效價大于或等于1∶640的患者中，僅有1例為SjS患者，陽性預(yù)測值為10.0%。由此可見，抗高爾基體抗體不是自身免疫性疾病的特異性診斷指標(biāo)。

3 展 望

稀有ANA種類多樣，其對自身免疫性疾病的診斷也具有重要價值，如高滴度的抗MND抗體及抗核膜抗體與自身免疫性肝病之間具有一定的相關(guān)性，但與其他自身免疫性疾病之間相關(guān)性不高；高效價的抗NuMA-1抗體和抗著絲點抗體對自身免疫性疾病的陽性預(yù)測值大于20.0%。與稀有ANA最相關(guān)的非自身免疫性疾病是腫瘤，其次是病毒感染和移植。然而，迄今為止，這些稀有ANA在疾病診斷及治療中的臨床價值還不清楚，還有待進一步研究。

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山東省高等學(xué)?？萍加媱澷Y助項目(J14LK14)；濰坊醫(yī)學(xué)院2013年科技創(chuàng)新重點基金資助項目(K1301004)。

△通訊作者，E-mail:sunyzbx@163.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.23.063

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1672-9455(2015)23-3595-04

2015-04-19

2015-07-28)