香椿葉中黃酮成分提取工藝技術(shù)研究

杜惠蓉，王輝

香椿別名虎目樹、山椿。其嫩芽香椿頭含有極豐富的營養(yǎng)，是我國久已成習(xí)的菜肴，并具有食療作用，主治外感風(fēng)寒、風(fēng)濕痹痛、胃痛、痢疾等［1-2］。經(jīng)現(xiàn)代科學(xué)研究表明，香椿樹嫩葉中富含具有廣泛生物活性和重要藥用價值的黃酮類化合物，其提取物具有抗氧化、抗菌、抗癌等藥理作用［3-6］。而香椿老葉的相關(guān)研究還不是很多，我們對香椿老葉中黃酮提取工藝進(jìn)行研究，為香椿老葉黃酮成分的相關(guān)研究奠定理論基礎(chǔ)。

1 實驗部分

1.1 試劑與儀器

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品;香椿秋后老葉;乙醇、甲醇均為分析純;超純水。

UV2550 紫外分光光度計。

1.2 香椿老葉黃酮的提取

香椿老葉去梗后30 ℃干燥至恒重，粉碎后放入干燥器備用。準(zhǔn)確稱取2.50 g 香椿樹葉粉末，置于燒瓶中，加入提取溶劑，加熱回流(溫度75 ℃)提取，過濾，濾液用石油醚萃取2 ～3 次(每次15 mL 左右)。合并萃取液，用甲醇定容至100 mL，搖勻。用移液管準(zhǔn)確移取2 mL 于25 mL 容量瓶，測其吸光度。

1.3 檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve

精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品20.0 mg，用30%乙醇溶解，并定容至100 mL，制備蘆丁標(biāo)準(zhǔn)貯備液(0.2 mg/mL)。準(zhǔn)確移取0，1. 0，2. 0，4. 0，6. 0，8.0，10.0 mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液至7 支25 mL 容量瓶中，加入30%乙醇至體積1/2，加入0.7 mL 質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%的亞硝酸鈉溶液，搖勻后放置5 min。分別加入0.7 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%的硝酸鋁溶液，搖勻后放置5 min。加入1 mol/L 的氫氧化鈉溶液5 mL 并用30%的乙醇定容至刻度，放置10 min。以未添加蘆丁儲備液的溶液為空白。在510 nm 測定吸光度值，以吸光度Y 為縱坐標(biāo)，黃酮濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2 結(jié)果與討論

2.1 單因素提取優(yōu)化實驗

2.1.1 提取時間的影響 稱取2.50 g 香椿樹葉粉末，按照料液比1∶20 g/mL 加入70%甲醇溶液，水浴加熱回流提取，提取時間對提取量的影響見圖2。

圖2 回流時間的影響Fig.2 Influence of reflux time

由圖2 可知，回流1 h 時，吸光度達(dá)到最大，黃酮提取量最高。回流時間＞1 h 時，吸光度有所下降。這主要是提取時間延長，造成黃酮成分破壞，且提取的其他雜質(zhì)含量增加，降低了黃酮成分在提取液中的溶解度。

2.1.2 提取溶劑甲醇濃度的影響 稱取2.50 g 香椿樹葉粉末，按照料液比1∶20(g/mL)加入甲醇溶液，分別水浴加熱回流提取1 h，甲醇濃度對提取量的影響見圖3。

圖3 甲醇濃度的影響Fig.3 Influence of methanol concentration

由圖3 可知，隨甲醇濃度增大，黃酮提取量增加，但整體差別不是很大，其中以80%甲醇提取效果最好。這主要是由于相似相溶，醇的濃度增加，必然使大極性的黃酮化合物溶解度增加，但是隨著甲醇濃度增加，醇溶性的其他化合物也會大量溶出，造成黃酮成分的溶解度降低。

2.1.3 提取料液比的影響 稱取2.50 g 香椿樹葉粉末，加入70%甲醇溶液，水浴加熱回流提取1 h，料液比對提取量的影響見圖4。

圖4 料液比的影響Fig.4 Influence of material liquid ratio

由圖4 可知，隨著料液比的增加，黃酮提取量增加，但是料液比＞1∶30(g/mL)后，黃酮提取效果變化不大，這時黃酮成分基本溶出完全。

2.2 正交實驗

根據(jù)單因素實驗結(jié)果進(jìn)行正交實驗，因素與水平見表1，結(jié)果見表2。

表1 因素與水平Table 1 Factors and levels

表2 正交實驗結(jié)果Table 2 Results of orthogonal experiments

由表2 可知，香椿葉中黃酮提取的3 個因素影響大小順序為C ＞A ＞B。最佳工藝為A2B3C3，甲醇濃度70%，料液比1∶30(g/mL)回流2 h。

鑒于單因素實驗回流時間延長對于黃酮的影響和提取時間的極差很小，確定最佳提取工藝為:甲醇濃度70%，料液比1∶30(g/mL)，回流提取1 h。經(jīng)在最佳工藝條件下提取驗證，黃酮提取率為6.67%，香椿葉中黃酮提取基本完全。

3 結(jié)論

甲醇回流提取香椿葉中黃酮成分的最佳提取工藝條件為甲醇濃度70%，料液比1∶30(g/mL)回流提取1 h。在此條件下，黃酮提取率為6.67%。

［1］ 郝繼偉.淺談虎目葉的資源價值與利用［J］.江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2003(5):102-103.

［2］ 李曙軒.中國農(nóng)業(yè)百科全書-蔬菜卷［M］.北京:農(nóng)業(yè)出版社，1990.

［3］ 張仲平，牛超，孫英.虎目葉黃酮類成分的分離與鑒定［J］.中藥材，2001，24(10):725-726.

［4］ 田迪英，楊榮華.虎目葉的抗菌作用研究［J］.食品工業(yè)科技，2002，23(11):21-22.

［5］ 張京芳，王冬梅，周麗，等. 虎目葉抗氧化物提取工藝優(yōu)化與抗氧化活性分析［J］. 農(nóng)業(yè)機(jī)械學(xué)報，2007，38(8):97-100.

［6］ 曹瑋國，劉志勤，邵云.黃酮類化合物藥理作用的研究進(jìn)展［J］.西北植物學(xué)報，2003，23(12):2241-2247.