精子冷凍技術(shù)及其對(duì)精子蛋白的影響

蔣旭平，王尚乾 綜述；張 煒 審校

(1.南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院泌尿外科，南京 210029；2.宜興市人民醫(yī)院泌尿外科，宜興 214200)

·綜 述·

精子冷凍技術(shù)及其對(duì)精子蛋白的影響

蔣旭平1,2，王尚乾1綜述；張 煒1審校

(1.南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院泌尿外科，南京 210029；2.宜興市人民醫(yī)院泌尿外科，宜興 214200)

精子低溫冷凍是保持精子無(wú)限期存活的一項(xiàng)技術(shù)，能夠幫助保存男性生育力。然而，冷凍和復(fù)蘇會(huì)對(duì)精子產(chǎn)生損傷并影響其功能。損傷的機(jī)制涉及物理和化學(xué)方面，比如冰晶形成、滲透壓改變、DNA破壞和氧化應(yīng)激等。在這些機(jī)制的研究中，很多都涉及精子蛋白的變化，本文就精子冷凍技術(shù)的發(fā)展及冷凍對(duì)精子蛋白的影響作一綜述。

精子；冷凍；冷凍損傷；機(jī)制；蛋白

低溫冷凍是指將生物組織或細(xì)胞等有機(jī)物質(zhì)置于-196 ℃或以下的溫度中，在此溫度下，所有生命活動(dòng)都會(huì)停止，包括一些導(dǎo)致細(xì)胞死亡的生物化學(xué)活動(dòng)。人類精子冷凍已有70多年的歷史，被廣泛應(yīng)用于人類輔助生殖技術(shù)，為一些因各種原因不能生育的患者提供了保存生育力的機(jī)會(huì)，如需要接受化療和放療的癌癥患者、生殖器有缺陷的患者、少精弱精的患者等。但是冷凍復(fù)蘇過(guò)程會(huì)對(duì)精子結(jié)構(gòu)、功能造成不可逆轉(zhuǎn)的損傷，世界各地的研究機(jī)構(gòu)一直致力于精子損傷機(jī)制的研究并探索改進(jìn)精子冷凍保存技術(shù)的方法。本文將介紹精子冷凍技術(shù)的發(fā)展并從蛋白質(zhì)方面闡述冷凍損傷機(jī)制研究的最新進(jìn)展。

1 精子冷凍技術(shù)

使細(xì)胞保持在“假死狀態(tài)”的保存技術(shù)的出現(xiàn)對(duì)生殖醫(yī)學(xué)是一個(gè)重大事件。在過(guò)去的70年，隨著輔助生殖技術(shù)的發(fā)展，配子、睪丸組織、胚胎和卵巢組織的低溫生物學(xué)也逐漸發(fā)展。精子低溫冷藏的首次嘗試見(jiàn)于1776年學(xué)者報(bào)道的精子可以冷藏于雪中[1]。BUNGE等[2]于1953年發(fā)現(xiàn)甘油可以保護(hù)精子對(duì)抗冷凍損傷使其可以凍存在-78 ℃的干冰中，并利用這些精子成功受孕3例，從此冷凍保護(hù)劑開(kāi)始受到人們的關(guān)注。后來(lái)SHERMAN[3]發(fā)現(xiàn)，-196 ℃的液氮可以使精子保存更長(zhǎng)久，并且保留了復(fù)蘇后精子尾部的運(yùn)動(dòng)功能。在此基礎(chǔ)上，各種凍存方法逐漸發(fā)展起來(lái)，常用的冷凍方法為快冷凍和慢冷凍。

1.1 快速冷凍法快速冷凍不需要借助昂貴的儀器，最常用的方法是在合適大小的冷凍容器中進(jìn)行“垂直冷凍”。精子樣品用保護(hù)劑稀釋后在37 ℃放置10 min，用真空泵吸引至300 μL或500 μL的吸管進(jìn)行懸浮。吸管密封后放置在氮?dú)庵? min，然后浸入-196 ℃的液氮保存。液氮表面到底部存在熱梯度，吸管置于液面以上15～20 cm，再緩慢降低到液面，產(chǎn)生大約20℃/min的冷凍速率。

另外一種快速凍存方法為玻璃化，將組織直接浸入液氮中，可達(dá)到10萬(wàn)℃/min的降溫速度。標(biāo)準(zhǔn)的玻璃化使用高濃度的滲透性保護(hù)劑，會(huì)對(duì)精子產(chǎn)生致命損傷，所以只應(yīng)用于卵子和胚胎。但是，ISACHENKO等[4]對(duì)上游法提取的精子進(jìn)行玻璃化凍存而不使用保護(hù)劑，其效果優(yōu)于傳統(tǒng)的凍存法，并且避免了保護(hù)劑對(duì)精子產(chǎn)生毒性作用和滲透性休克。

1.2 慢速冷凍法慢凍存由BEHRMAN等[5]提出。它使用自動(dòng)化設(shè)備以一定的速率將細(xì)胞從室溫降低到保存溫度。樣品用保護(hù)劑稀釋后以0.5～1 ℃/min的速率從室溫降低到5 ℃，然后以1～10 ℃/min降到-80 ℃，最后浸入液氮中[6]，降溫過(guò)快或過(guò)慢都容易導(dǎo)致結(jié)冰。

1.3 其他冷凍方法有研究發(fā)現(xiàn)，將精子注射入人透明帶空腔進(jìn)行凍存，相比于傳統(tǒng)的方法，有更高的精子復(fù)蘇率，而不影響精子的功能[7]。而全精液的凍存能更好地對(duì)抗冷凍損傷，可以提高復(fù)蘇后精子的運(yùn)動(dòng)能力和DNA完整性[8-9]，這可能是由于精液中含有大量的抗氧化劑，對(duì)精子起到保護(hù)作用。

1.4 精子復(fù)蘇精子的復(fù)蘇一般有以下幾種方案：①吸管置于室溫10 min再置于37 ℃ 10 min；②吸管置于室溫下復(fù)溫15 min；③吸管置于37 ℃恒溫槽內(nèi)復(fù)溫10 min[1]。也有在①法的基礎(chǔ)上添加含有10%人血清白蛋白的復(fù)蘇培養(yǎng)液，相比其他方法可能有更好的臨床應(yīng)用價(jià)值[10]。

2 凍存保護(hù)劑

凍存保護(hù)劑內(nèi)含有各種化合物，可以使細(xì)胞外環(huán)境在凝固點(diǎn)以下時(shí)仍保持液態(tài)，從而減少損傷。一般均含以下成分：甘油，防止熱休克損傷；糖，供能并優(yōu)化滲透壓和氫離子濃度；卵黃，提高質(zhì)膜流動(dòng)性，提供結(jié)構(gòu)和功能上的保護(hù)，并通過(guò)其脂蛋白成分保護(hù)精子完整性；抗生素，對(duì)抗可能出現(xiàn)的病原體。盡管各種保護(hù)劑的成分不同，但都高度溶于水，并且有劑量相關(guān)的毒性[11-12]。它們通過(guò)靜電相互作用直接影響質(zhì)膜，降低溶液的凝固點(diǎn)，調(diào)整細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境，減少冰晶形成。

2.1 滲透性保護(hù)劑包括甘油、DMSO(二甲基亞砜)和PROF(丙二醇)等。這些親水物質(zhì)分子量小于400，很容易跨過(guò)質(zhì)膜，形成滲透壓梯度使水分轉(zhuǎn)運(yùn)出細(xì)胞。甘油最早也最常用于精子的保存[13]，它作用于質(zhì)膜結(jié)構(gòu)，影響脂質(zhì)雙分子層的滲透性和穩(wěn)定性，還影響表面蛋白和細(xì)胞代謝。但單獨(dú)應(yīng)用甘油會(huì)影響質(zhì)膜、細(xì)胞骨架和線粒體膜電位,并引起脂質(zhì)過(guò)氧化[14]。其他物質(zhì)如DMSO和PROH因?qū)佑袚p傷而應(yīng)用的比較少。

2.2 非滲透性保護(hù)劑包括蔗糖、果糖、葡聚糖等。這些大分子物質(zhì)分子量大于1 000，增加細(xì)胞外溶質(zhì)濃度，產(chǎn)生滲透壓使水分在結(jié)冰前轉(zhuǎn)移到細(xì)胞外。

2.3 凍存添加劑在保護(hù)劑內(nèi)加入某些添加劑會(huì)對(duì)精子產(chǎn)生更好的保護(hù)作用。槲皮素是一種主要的食物黃酮，能夠增加精子的動(dòng)力、活力和DNA完整性[15]，神經(jīng)節(jié)糖苷膠粒也具有相似的效果[16]。TEST-蛋黃緩沖液可以降低凍存產(chǎn)生的精子形態(tài)改變和染色體損傷，也可以作為一種良好的保護(hù)劑[17]。而對(duì)于無(wú)活力的精子，激肽釋放酶和咖啡因具有很好的保護(hù)作用，因此很適合少精癥的患者[18]。

3 凍融對(duì)精子蛋白的影響

凍存會(huì)對(duì)精子的質(zhì)膜、頂體、DNA完整性及其動(dòng)力、活力等產(chǎn)生影響[8, 19-22]，這可能是由于凍存期間的冷休克、滲透壓改變和細(xì)胞內(nèi)冰晶形成所致[23-24]。蛋白質(zhì)是細(xì)胞功能的最終執(zhí)行者，對(duì)蛋白質(zhì)的研究可以更好地揭示冷凍損傷的原理，并且為提高凍存后精子生育力尋找新的方法。冷凍復(fù)蘇對(duì)精子蛋白的影響參見(jiàn)表1。

3.1 凋亡通路凍存的各個(gè)過(guò)程都會(huì)對(duì)精子產(chǎn)生損傷。有研究者對(duì)牛精子進(jìn)行凍存，在凍存前的稀釋階段，就發(fā)現(xiàn)有線粒體膜電位降低，這可能是由于促凋亡因子Bax從線粒體的釋放。線粒體膜電位的降低導(dǎo)致凋亡誘導(dǎo)因子AIF和細(xì)胞色素C的釋放，繼而導(dǎo)致caspase(半胱天冬酶)激活[25]，這就是“似凋亡”假說(shuō)，這在其他動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中也得到證實(shí)[26-28]。Caspase 3是凋亡通路中最重要的蛋白，是一種凋亡指示物，在凍融后的人類精子中Caspase3活性升高，伴隨DNA碎片的增加和DNA氧化水平的升高[15]。但其他研究發(fā)現(xiàn)，凍存并未使人類精子Caspase3活性增高，而增加了Caspase1、8、9的活性[29-30]，還有研究報(bào)道凍存會(huì)導(dǎo)致4種caspase酶的活性均增高[31]。這種差異可能是由于實(shí)驗(yàn)方法、條件、人群的不同，但都證實(shí)了凋亡通路在凍存過(guò)程中的激活。凋亡通路是破壞DNA完整性的一個(gè)可能原因[32]，繼而導(dǎo)致細(xì)胞損傷甚至死亡。

3.2 氧化應(yīng)激氧化應(yīng)激也是冷凍損傷的一個(gè)重要因素。在凍存和復(fù)蘇過(guò)程中，精子線粒體會(huì)產(chǎn)生過(guò)量的ROS，對(duì)細(xì)胞成分產(chǎn)生損傷[33]，包括質(zhì)膜和線粒體等。質(zhì)膜損傷的標(biāo)志是不飽和脂肪酸的過(guò)氧化程度，由于SOD(超氧化物歧化酶)活性降低，氧自由基增多，脂質(zhì)過(guò)氧化水平在凍存后增高[34]。谷胱甘肽和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶能夠消除氧自由基，其含量的高低可作為新鮮精子對(duì)抗凍融損傷能力的標(biāo)志[35]。凍融會(huì)降低精子中谷胱甘肽的含量，而在凍存液中添加谷胱甘肽可以降低精子半胱氨酸自由殘基含量(核蛋白間二硫鍵的標(biāo)識(shí)物)，保護(hù)核蛋白完整性[36]，但只有在復(fù)蘇過(guò)程中添加谷胱甘肽能起到保護(hù)精子的作用，在凍存過(guò)程中添加卻不能，提示谷胱甘肽是在復(fù)蘇階段保護(hù)精子的生育力[37]。HSP90(熱休克蛋白90)在精子凍存后表達(dá)量也會(huì)下降[38-39]，它在應(yīng)激抵抗、蛋白折疊、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等方面發(fā)揮重要作用，可以保護(hù)細(xì)胞免受ROS的損傷[40]，而且會(huì)激活NOS(一氧化氮合酶)，增加精子的活力[41]。凍存前后的精液中均未能檢測(cè)到HSP90，推測(cè)其下降的機(jī)制可能是由于蛋白降解[38]，而不是向質(zhì)膜外的流失。

3.3 獲能樣現(xiàn)象我們的研究發(fā)現(xiàn)一些與能量代謝、精子動(dòng)力、活力等有關(guān)的蛋白在凍融后含量下降，如ACO2、TEKT1、CYB5R2等，同時(shí)很多蛋白如ENO1(α烯醇化酶)、PKM2(M2型丙酮酸激酶)等在凍融后含量增加，伴隨增高的磷酸化水平，說(shuō)明在凍融過(guò)程中某些蛋白會(huì)發(fā)生蛋白磷酸化，從而影響頂體完整性和獲能反應(yīng)[42]，蛋白磷酸化在動(dòng)物精子凍存的實(shí)驗(yàn)中也被證實(shí)[43-44]。磷酸化可能是由于質(zhì)膜的改變，引起了蛋白構(gòu)象的變化[45]，或者是由于促進(jìn)了鈣離子內(nèi)流[46]。含巰基蛋白在凍融后的公牛精子中發(fā)生定位的改變和表達(dá)量的增加[47]，巰基表達(dá)的增加與精子獲能密切相關(guān)，由此推測(cè)凍融可能使精子發(fā)生獲能樣現(xiàn)象，影響了精子質(zhì)量，而不是真正的獲能[48]。與獲能有關(guān)的BSP(牛精漿蛋白)在公牛精子凍存后[49]，以及位于精子頂體的酪氨酸相關(guān)蛋白TyrP32在豬精子的復(fù)蘇階段[50]，出現(xiàn)表達(dá)量的增加，都為獲能樣現(xiàn)象提供了證據(jù)。

3.4 對(duì)質(zhì)膜的影響質(zhì)膜損傷不僅表現(xiàn)為脂質(zhì)過(guò)氧化，還表現(xiàn)為質(zhì)膜結(jié)構(gòu)和流動(dòng)性的改變。質(zhì)膜結(jié)構(gòu)和流動(dòng)性改變會(huì)對(duì)膜上很多蛋白產(chǎn)生影響[51]，包括一些胞膜窖連接蛋白，如葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白是細(xì)胞膜上的跨膜糖蛋白，介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)外的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)，維持細(xì)胞能量。凍存會(huì)改變豬精子內(nèi)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-3的定位并降低其含量，導(dǎo)致精子質(zhì)量的下降[52]。

P34H和P25b是人和牛的同源蛋白，表達(dá)于質(zhì)膜表面，可以作為精子生育力的指標(biāo)，凍融導(dǎo)致了人精子P34H的下降[53]和牛精子P25b的下降[54]，降低精子的質(zhì)量。另一種精子生育力的標(biāo)志是發(fā)生頂體反應(yīng)的能力，凍存會(huì)使精子表面的孕激素受體構(gòu)型發(fā)生改變和密度降低[55]，并且降低精子頂體酶的活性[56-57]，減少孕激素刺激下的頂體反應(yīng)，導(dǎo)致其生育力降低。

另外，在質(zhì)膜損傷的早期階段，PS(磷脂酰絲氨酸)會(huì)從膜內(nèi)轉(zhuǎn)移到膜外，這個(gè)外顯化現(xiàn)象可用Ca依賴性磷脂結(jié)合蛋白annexin V進(jìn)行評(píng)價(jià)[58-59]， 有學(xué)者利用annexin V聯(lián)合PI(碘化丙啶)染色檢測(cè)凍存過(guò)程中精子的PS外顯化，發(fā)現(xiàn)這種方法可以很好的預(yù)測(cè)精子凍存結(jié)果[60]。

3.5 DNA和線粒體損傷在凍融后精子活力較低的不耐凍組中，半胱氨酸自由殘基的含量高于耐凍組，而兩組間的ROS水平?jīng)]有明顯差別，說(shuō)明凍存通過(guò)ROS以外的機(jī)制破壞了精子核蛋白結(jié)構(gòu)的完整性，影響精子活性[61]。同樣的，F(xiàn)LORES等[62]發(fā)現(xiàn)凍存增高了豬精子中半胱氨酸自由殘基的含量，同時(shí)組蛋白H1-DNA聚合體也增加，并且從精子頭部的末端蔓延到了頭端，證實(shí)了凍存對(duì)DNA核蛋白的影響。

Mfn2(線粒體融合蛋白-2)和肌動(dòng)蛋白是線粒體功能的主要調(diào)節(jié)因素，在豬精子的冷凍過(guò)程中，Mfn2表達(dá)增加，并從精子中段的頂端擴(kuò)增到整個(gè)中段，而肌動(dòng)蛋白表達(dá)下降，位置也發(fā)生改變，這兩個(gè)蛋白表達(dá)和定位的改變會(huì)引起線粒體體積的變化，影響線粒體功能[63]。肌動(dòng)蛋白的改變還可能影響肌動(dòng)蛋白-核周膜的相互作用，導(dǎo)致染色質(zhì)核凝聚，最終影響精子的生育力[64]。

3.6 對(duì)其他蛋白的影響在細(xì)胞骨架方面，我們發(fā)現(xiàn)vimentin(中間絲蛋白)在凍融后會(huì)降低，它是細(xì)胞骨架成分之一，它的減少破壞了頂體的完整性[42]。而另外一種細(xì)胞骨架成分α微管蛋白會(huì)隨著凍存時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，其增加的原因可能是凍融過(guò)程中一些含微管蛋白結(jié)構(gòu)的破壞、抗微管蛋白識(shí)別位點(diǎn)的改變和鈣離子內(nèi)流后的解聚合作用[53]。

蛋白質(zhì)組學(xué)分析在精子凍融的研究中得到了廣泛的應(yīng)用[65]。LI等對(duì)凍融前后的鯉魚(yú)精子進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)比較分析，發(fā)現(xiàn)凍融對(duì)14個(gè)蛋白位點(diǎn)產(chǎn)生了明顯影響，如α-SNAP(N-乙基馬來(lái)酰亞胺敏感性融合蛋白附件蛋白α)、SAHH(S-腺苷高半胱氨酸水解酶)、轉(zhuǎn)鐵蛋白C和F等，這些蛋白與精子運(yùn)動(dòng)、能量代謝、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和氧化應(yīng)激等有關(guān)[66]。ZILLI等[67]對(duì)凍融前后的海鱸魚(yú)精子進(jìn)行分析，也得到了很多差異位點(diǎn)，凍融使一些蛋白降解，導(dǎo)致精子的活力和致孕率降低。

有學(xué)者利用二維電泳對(duì)凍融后的高復(fù)蘇率和低復(fù)蘇率的人類精子進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)比較分析，發(fā)現(xiàn)了與冷凍損傷有關(guān)的22個(gè)精子和精漿蛋白，其中與能量代謝有關(guān)的蛋白包括精子中的膽固醇26-羥化酶，精漿中的6-磷酸果糖-2-激酶等，與精子成熟相關(guān)的蛋白有精子細(xì)胞中的Ras相關(guān)蛋白和精漿中的Rho2樣蛋白等，這些蛋白是如何影響精子對(duì)低溫的耐受能力，尚需進(jìn)一步研究[68]。VILAGRAN等[69]根據(jù)復(fù)蘇后活力將凍融前的精子分組并進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)與精子獲能有關(guān)的ACRBP(頂體素結(jié)合蛋白)、與能量代謝有關(guān)的TPI(磷酸丙糖異構(gòu)酶)在耐凍組和不耐凍組中表達(dá)差異最大，可以作為預(yù)測(cè)豬精子抗凍能力的標(biāo)志。而HSP90AA1對(duì)豬精子也有同樣的預(yù)測(cè)作用[70]。

4 小 結(jié)

精子冷凍是人類輔助生殖技術(shù)中很重要的一種方法，但是它對(duì)精子產(chǎn)生的損傷影響了其臨床應(yīng)用效果，為了推動(dòng)精子冷凍技術(shù)的發(fā)展，闡明冷凍損傷的機(jī)制是個(gè)迫切的問(wèn)題。在將來(lái)，我們需要進(jìn)行更深入的研究，探索損傷的機(jī)制，改善凍存方法，研究新的保護(hù)劑，從而推動(dòng)人類輔助生殖技術(shù)的發(fā)展。

表1 冷凍復(fù)蘇對(duì)精子蛋白的影響

影響分類名稱物種凍存后變化功能凋亡通路Bax人類、小牛升高促凋亡因子半胱天冬酶(Caspase)人類、豬、犬、馬升高與細(xì)胞凋亡密切相關(guān),并參與細(xì)胞生長(zhǎng)、分化調(diào)節(jié)

續(xù)表1 冷凍復(fù)蘇對(duì)精子蛋白的影響

分類名稱物種凍存后變化功能氧化應(yīng)激超氧化物歧化酶(SOD)人類降低消除新陳代謝過(guò)程中產(chǎn)生的有害物質(zhì)谷胱甘肽(GSH)人類、豬降低清除自由基、抗氧化、抗衰老熱休克蛋白90(HSP90)人類、豬降低對(duì)抗熱應(yīng)激,防止蛋白聚集,調(diào)節(jié)細(xì)胞死亡轉(zhuǎn)鐵蛋白C、F鯉魚(yú)升高對(duì)抗氧化應(yīng)激獲能樣現(xiàn)象α烯醇化酶(ENO1)人類升高參與糖酵解,與精子成熟和獲能時(shí)的轉(zhuǎn)錄后修飾有關(guān)M2型丙酮酸激酶(PKM2)人類升高參與糖酵解、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白修飾含巰基蛋白公牛表達(dá)升高,定位改變與精子獲能有關(guān)牛精漿蛋白(BSP)公牛升高與精子獲能、頂體反應(yīng)有關(guān)酪氨酸相關(guān)蛋白TyrP32豬升高與精子獲能、頂體反應(yīng)有關(guān)對(duì)質(zhì)膜影響葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(GLUT)豬表達(dá)降低,定位改變介導(dǎo)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn),維持細(xì)胞能量精子表面蛋白P34H人類降低精子生育力的標(biāo)志物精子表面蛋白P25B牛降低精子生育力的標(biāo)志物孕激素受體犬表達(dá)降低,構(gòu)型改變作為精子生育力激活劑的受體磷脂酰絲氨酸(PS)人類、羊、豬向膜外轉(zhuǎn)移質(zhì)膜早期損傷的標(biāo)志物DNA和線粒體損傷半胱氨酸自由殘基豬升高核蛋白二硫鍵完整性的標(biāo)志物組蛋白H1-DNA聚合體豬升高組蛋白-DNA結(jié)構(gòu)的標(biāo)志物線粒體融合蛋白-2(Mfn2)豬升高調(diào)控線粒體功能,與細(xì)胞凋亡有關(guān)肌動(dòng)蛋白豬表達(dá)降低,定位改變調(diào)控線粒體功能,維持細(xì)胞結(jié)構(gòu),參與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)結(jié)構(gòu)蛋白波形蛋白(vimentin)人類降低構(gòu)成細(xì)胞骨架α微管蛋白(α-tubulin)人類升高構(gòu)成細(xì)胞骨架,參與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、胞內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白113人類低冷凍復(fù)蘇率組明顯升高構(gòu)成細(xì)胞骨架,與DNA穩(wěn)定性有關(guān)鋅指蛋白879人類低冷凍復(fù)蘇率組明顯降低構(gòu)成細(xì)胞骨架,參與基因表達(dá)調(diào)控、細(xì)胞分化能量代謝順烏頭酸酶2(ACO2)人類降低參與三羧酸循環(huán)CYB5R2人類降低參與調(diào)解氧化還原反應(yīng)膽固醇-26-羥化酶人類低冷凍復(fù)蘇率組明顯降低參與能量代謝過(guò)程溶質(zhì)載體家族12(SLC12)、ATP結(jié)合盒亞家族D1人類精漿低冷凍復(fù)蘇率組明顯降低參與能量代謝過(guò)程6-磷酸果糖-2-激酶(PFK-2)人類精漿低冷凍復(fù)蘇率組明顯降低參與糖酵解S-腺苷高半胱氨酸水解酶(SAHH)鯉魚(yú)降低參與細(xì)胞代謝過(guò)程

續(xù)表1 冷凍復(fù)蘇對(duì)精子蛋白的影響

分類名稱物種凍存后變化功能精子成熟Rho2樣蛋白、Krueppel樣因子10(KLF10)、FERM域蛋白8、GMP合成酶、鳥(niǎo)嘌呤結(jié)合蛋白G人類精漿低冷凍復(fù)蘇率組明顯升高與精子成熟有關(guān)細(xì)胞周期調(diào)控蛋白1(CDK1)人類精子和精漿低冷凍復(fù)蘇率組明顯升高調(diào)控細(xì)胞周期RAF原癌基因絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶人類低冷凍復(fù)蘇率組明顯降低參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),調(diào)控細(xì)胞生命活動(dòng)Ras相關(guān)蛋白人類低冷凍復(fù)蘇率組明顯降低參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),調(diào)節(jié)細(xì)胞分化、增殖、凋亡精子運(yùn)動(dòng)肌鈣蛋白人類精漿低冷凍復(fù)蘇率組明顯升高參與精子運(yùn)動(dòng)肌球蛋白輕鏈人類精漿低冷凍復(fù)蘇率組明顯降低構(gòu)成肌球蛋白酶催化超分子復(fù)合體,參與精子運(yùn)動(dòng)TEKT1人類降低參與構(gòu)成微管絲切蛋白2(cofilin2)鯉魚(yú)降低參與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)其他頂體酶人類降低與頂體反應(yīng)有關(guān)N-乙基馬來(lái)酰亞胺敏感性融合蛋白附件蛋白α(α-SNAP)鯉魚(yú)降低與囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)、頂體反應(yīng)有關(guān)膜聯(lián)蛋白A4(AnnexinA4)鯉魚(yú)降低參與質(zhì)膜運(yùn)輸及質(zhì)膜構(gòu)成

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(編輯 王 瑋)

2014-12-05

2015-01-29

張煒，教授，主任醫(yī)師，博士生導(dǎo)師.E-mail: zhangwei@medmail.com.cn

蔣旭平(1990-)，男(漢族)，碩士研究生在讀.研究方向：男科學(xué)與泌尿系統(tǒng)先天畸形.E-mail: medical_jxp@163.com

R321.1

A

10.3969/j.issn.1009-8291.2015-04-021