支氣管灌洗液P16基因啟動(dòng)子甲基化在非小細(xì)胞肺癌診斷中的應(yīng)用

崔超，張軍，李淼，石錦軍，吳萬(wàn)鵬，谷俊東

(1天津醫(yī)科大學(xué)研究生院，天津 300070；2天津市海河醫(yī)院；3天津市人民醫(yī)院)

支氣管灌洗液P16基因啟動(dòng)子甲基化在非小細(xì)胞肺癌診斷中的應(yīng)用

崔超1,2，張軍2，李淼2，石錦軍2，吳萬(wàn)鵬2，谷俊東3

(1天津醫(yī)科大學(xué)研究生院，天津 300070；2天津市海河醫(yī)院；3天津市人民醫(yī)院)

摘要：目的觀察支氣管灌洗液P16基因啟動(dòng)子甲基化在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法 檢索Pubmed、Medline、CNKI、維普及萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)，收集公開(kāi)發(fā)表的關(guān)于支氣管灌洗液P16基因啟動(dòng)子甲基化用于NSCLC診斷的相關(guān)研究。采用STATA11.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)診斷試驗(yàn)的敏感性、特異性、陽(yáng)性似然比、陰性似然比及ROC曲線下面積進(jìn)行Meta分析。結(jié)果 共納入10項(xiàng)研究。支氣管灌洗液P16基因啟動(dòng)子甲基化診斷NSCLC的敏感性為0.61(95%CI:0.57～0.65)，特異性為0.81(95%CI:0.78～0.85)，陽(yáng)性似然比為5.71(95%CI:2.56～12.73)、陰性似然比為0.47(95%CI:0.40～0.57)、診斷ROC曲線下面積為0.72(95%CI:0.68～0.76)。結(jié)論 支氣管灌洗液P16基因啟動(dòng)子甲基化診斷肺癌的敏感性和特異性均較高，可作為NSCLC微創(chuàng)診斷方法。

關(guān)鍵詞：肺腫瘤；非小細(xì)胞肺癌；P16基因；甲基化

近年來(lái)，肺癌表觀遺傳學(xué)成為肺癌領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者肺癌組織標(biāo)本及支氣管灌洗液中存在多基因啟動(dòng)子的甲基化改變，并有望成為肺癌無(wú)創(chuàng)診斷方法。P16基因是一種細(xì)胞周期相關(guān)基因，直接參與細(xì)胞周期的調(diào)控，負(fù)調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖及分裂，在人類(lèi)50%腫瘤細(xì)胞株發(fā)現(xiàn)有純合子缺失，突變。有學(xué)者認(rèn)為P16是比p53更重要的一種新型抗癌基因。已有研究[1]顯示，在NSCLC患者腫瘤組織和其他體液(包括支氣管灌洗液)中可以檢測(cè)到P16基因啟動(dòng)子的甲基化改變并可作為診斷NSCLC的方法。因此，本研究采用Meta分析的方法觀察支氣管灌洗液中P16基因啟動(dòng)子甲基化在NSCLC診斷的中臨床應(yīng)用價(jià)值。

1資料與方法

1.1文獻(xiàn)檢索方法英文檢索關(guān)鍵詞為“P16/INK4A”、“l(fā)ung cancer”、“l(fā)ung carcinoma”、“methylation”，中文檢索關(guān)鍵詞為“肺癌”、“非小細(xì)胞肺癌”、“肺腫瘤”、“P16基因”、“甲基化”。檢索Pubmed、Medline、CNKI、維普及萬(wàn)方等數(shù)據(jù)庫(kù)，檢索時(shí)間為1996年～2014年8月。收集公開(kāi)發(fā)表的關(guān)于支氣管灌洗液P16基因啟動(dòng)子甲基化用于NSCLC診斷的研究。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)納入標(biāo)準(zhǔn)：研究對(duì)象為病理學(xué)確診的NSCLC患者；甲基化檢查方法為甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)；原始研究提供P16基因啟動(dòng)子甲基化頻率。排除標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)病理學(xué)診斷的NSCLC患者或小細(xì)胞肺癌患者；甲基化檢查方法不可靠；重復(fù)發(fā)表的文獻(xiàn)或數(shù)據(jù)；原始研究中未提供P16基因啟動(dòng)子甲基化發(fā)生的頻率。

1.3數(shù)據(jù)提取采用雙人平行摘錄方法，由兩位研究者獨(dú)立閱讀所獲文獻(xiàn)題目和摘要，在排除明顯不符合納入標(biāo)準(zhǔn)的試驗(yàn)后，對(duì)可能符合納入標(biāo)準(zhǔn)的試驗(yàn)閱讀全文以最終確定是否符合納入標(biāo)準(zhǔn)。兩位評(píng)價(jià)者交叉核對(duì)納入試驗(yàn)的結(jié)果，對(duì)有分歧而難以確定是否納入的試驗(yàn)通過(guò)討論或由第三位評(píng)價(jià)者決定其是否納入。提取內(nèi)容包括：①一般資料：題目、作者姓名、發(fā)表日期、文獻(xiàn)來(lái)源；②研究特征：研究對(duì)象的一般情況、各組患者的基線可比性、診斷實(shí)驗(yàn)方法、診斷金標(biāo)準(zhǔn)；③結(jié)局指標(biāo)：納入診斷試驗(yàn)的敏感性、特異性、真陽(yáng)性、假陽(yáng)性、假陰性和真陰性。

1.4納入研究質(zhì)量評(píng)價(jià)按照“Cochrane手冊(cè)提供的診斷試驗(yàn)質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)”對(duì)每一篇入選文獻(xiàn)的質(zhì)量進(jìn)行量化評(píng)價(jià)。對(duì)于Cochrane手冊(cè)中的疾病譜系、選擇標(biāo)準(zhǔn)、診斷金標(biāo)準(zhǔn)、疾病進(jìn)展偏倚、部分參展偏倚等標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。對(duì)于每一條標(biāo)準(zhǔn)，如果入選文獻(xiàn)中明確滿(mǎn)足則為“Yes”；含糊不清則為“Unclear”；某條標(biāo)準(zhǔn)未提及則為“No”。對(duì)每一篇文獻(xiàn)的質(zhì)量評(píng)價(jià)采取雙人平行評(píng)價(jià)的方法。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用STATA11.0統(tǒng)計(jì)軟件。統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性采用Q統(tǒng)計(jì)量的I2檢驗(yàn)來(lái)分析，各研究間不存在明顯的異質(zhì)性(雙側(cè)P>0.05)，采用固定效應(yīng)模型合并數(shù)據(jù)；各研究間存在明顯的異質(zhì)性(P≤0.05)，采用隨機(jī)效應(yīng)模型合并數(shù)據(jù)。采用Begg法對(duì)發(fā)表偏倚進(jìn)行量化檢測(cè)。

2結(jié)果

2.1文獻(xiàn)檢索結(jié)果最終檢索并納入符合要求的文獻(xiàn)共10篇[2～11]，其中來(lái)自中國(guó)的研究7篇，來(lái)自日本、意大利和希臘的研究各1篇。所有納入的原始研究均提供了較為完整的數(shù)據(jù)資料。詳見(jiàn)表1。

2.2納入研究的質(zhì)量評(píng)價(jià)納入分析的10篇文獻(xiàn)質(zhì)量較高，所有納入研究的文獻(xiàn)均報(bào)道了納入疾病的病譜的代表性，9篇文獻(xiàn)報(bào)道了診斷試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)，只有4篇文獻(xiàn)未報(bào)道是否實(shí)施了盲法。

2.3支氣管灌洗液P16基因啟動(dòng)子甲基化診斷NSCLC的敏感性和特異性以病理學(xué)診斷為金標(biāo)準(zhǔn)，支氣管灌洗液P16基因啟動(dòng)子甲基化診斷NSCLC的敏感性為0.61(95%CI:0.57～0.65)，特異性為0.81(95%CI:0.78～0.85)，陽(yáng)性似然比為5.71(95%CI:2.56～12.73)、陰性似然比為0.47(95%CI:0.40～0.57)，詳見(jiàn)表2。支氣管灌洗液P16基因啟動(dòng)子甲基化診斷NSCLC的ROC曲線下面積為0.72(95%CI:0.68～0.76)。

2.4發(fā)表偏倚評(píng)價(jià)所有文獻(xiàn)不存在發(fā)表偏倚(t=0.69，P>0.05)。

3討論

肺癌是目前臨床上最為常見(jiàn)的呼吸系統(tǒng)惡性腫瘤，近年來(lái)隨著吸煙人數(shù)的增多，環(huán)境污染等因素的影響，我國(guó)肺癌發(fā)病率出現(xiàn)逐年升高的趨勢(shì)。新近的流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示，大約全球每年肺癌新發(fā)病例人數(shù)高達(dá)120萬(wàn)，死亡人數(shù)為100萬(wàn)[12]。肺癌從臨床病理學(xué)角度一般分為NSCLC和小細(xì)胞肺癌，其中NSCLC約占所有肺癌發(fā)病人數(shù)的80%。臨床流行病學(xué)資料顯示，約80%的NSCLC患者確診時(shí)已為晚期，大多發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，這些患者已無(wú)法接受根治性手術(shù)治療，預(yù)后較差[13]。因此，需早期篩查NSCLC高?；颊?。

研究[14]顯示，在NSCLC患者腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)了眾多基因啟動(dòng)子的甲基化改變，包括p16、MGMT、ECAD等，這些基因啟動(dòng)子的甲基化改變與其mRNA及相應(yīng)蛋白表達(dá)降低有一定的聯(lián)系。同時(shí)，這種抑癌基因啟動(dòng)子的甲基化改變?cè)诜悄[瘤患者組織標(biāo)本或體液中未能檢測(cè)到。這種現(xiàn)象提示抑癌基因啟動(dòng)子甲基化檢測(cè)有望成為NSCLC等實(shí)體腫瘤診斷的重要手段。近年來(lái)關(guān)于支氣管灌洗液中p16基因啟動(dòng)子甲基化的相關(guān)文獻(xiàn)較多，但其用于NSCLC臨床診斷價(jià)值各家報(bào)道并不一致。因此，本研究采用循證醫(yī)學(xué)的方法探討支氣管灌洗液中p16基因啟動(dòng)子甲基化用于NSCLC臨床診斷的應(yīng)用價(jià)值，已期為臨床醫(yī)務(wù)工作者提供一定的依據(jù)。本Meta分析結(jié)果顯示，支氣管灌洗液p16基因啟動(dòng)子甲基化診斷NSCLC的敏感性和特異性均較高，可作為肺癌微創(chuàng)診斷方法。

雖然本研究顯示p16基因啟動(dòng)子甲基化用于NSCLC診斷有良好應(yīng)用前景，但數(shù)據(jù)合并過(guò)程中存在較大的統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性，這種異質(zhì)性會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生一定的影響。因此，有條件的情況下應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行大規(guī)模的前瞻性診斷試驗(yàn)來(lái)進(jìn)一步評(píng)估。

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(收稿日期：2014-10-08)

通信作者：谷俊東

基金項(xiàng)目：天津市衛(wèi)生局科技基金項(xiàng)目(2012KZ040)。

中圖分類(lèi)號(hào)：R734.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號(hào)：1002-266X(2015)07-0036-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.07.013