動(dòng)物模型在經(jīng)方研究中的應(yīng)用

高譽(yù)珊 劉 妙 張淑靜 鄭豐杰 許 紅 王 謙 吳 瑩 李宇航

(北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京，100029)

中醫(yī)動(dòng)物模型的建立與研究是連接中醫(yī)基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用的橋梁與紐帶，是深化中醫(yī)基礎(chǔ)認(rèn)識(shí)的方法，同時(shí)也是中藥藥物作用機(jī)制深入研究的手段。動(dòng)物模型是運(yùn)用病因病機(jī)理論和臟象學(xué)說(shuō)，把人類(lèi)疾病的某些特征在動(dòng)物身上加以模擬復(fù)制而成，是中醫(yī)學(xué)人體證候的具體再現(xiàn)。經(jīng)過(guò)50多年的努力，中醫(yī)證候的動(dòng)物模型研究通過(guò)不斷的發(fā)展和完善日漸成熟，已從簡(jiǎn)單的證候模擬發(fā)展到更加注重體現(xiàn)中醫(yī)病因病機(jī)實(shí)質(zhì)的造模手段。研究思路和造模手段有3類(lèi):一類(lèi)是采用物理、化學(xué)、自然衰老、基因改變等方法，模擬中醫(yī)認(rèn)識(shí)的致病因素，如外傷、寒凝、肝郁、氣虛等，制成的相應(yīng)動(dòng)物模型，此類(lèi)屬病因模型;二類(lèi)是多采用手術(shù)方法，模擬西醫(yī)病理機(jī)制，如血管阻塞、內(nèi)皮損傷、微循環(huán)障礙和腸梗阻等，制成的相應(yīng)動(dòng)物模型，此類(lèi)屬病理或病理生理模型;三類(lèi)是采用物理、化學(xué)、手術(shù)等方法，模擬中醫(yī)臨床表現(xiàn)，此類(lèi)屬癥狀類(lèi)模型。

我團(tuán)隊(duì)將動(dòng)物模型應(yīng)用到中醫(yī)基礎(chǔ)研究中，且獲得了一些經(jīng)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)室用于經(jīng)方現(xiàn)代研究的動(dòng)物模型10余種，例如:大鼠COPD模型、小鼠哮喘模型、便秘模型、胃炎模型、胃電節(jié)律失常模型、腦出血模型、寒熱證模型、帕金森氏病模型、癲癇模型等?，F(xiàn)例舉五種，從造模方法、體會(huì)及經(jīng)方研究等方面介紹如下。

1 慢性阻塞性肺疾病模型

1.1 造模方法 慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstructive Pulmonary Disease，COPD)是一種具有氣流受限特征的疾病，氣流受限不完全可逆，呈進(jìn)行性發(fā)展，與肺部對(duì)香煙煙霧等有害氣體或有害顆粒的異常炎癥反應(yīng)有關(guān)。其病理學(xué)改變存在于中央氣道、外周氣道、肺實(shí)質(zhì)和肺的血管系統(tǒng)。肺組織、氣管、支氣管上皮炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，典型的肺實(shí)質(zhì)破壞表現(xiàn)為小葉中央型肺氣腫，涉及呼吸性細(xì)支氣管的擴(kuò)張和破壞［1］。

目前常用的COPD動(dòng)物模型制作方法有采用熏香煙加氣管注內(nèi)毒素和單純熏煙法復(fù)制大鼠COPD模型［2］。單純熏香煙法是每天單純熏5%香煙0.5 h/d，共3個(gè)月;熏香煙加氣管注內(nèi)毒素法是在熏煙的基礎(chǔ)上分別于第1天、第14天經(jīng)氣管注入內(nèi)毒素。兩種方法的病理結(jié)果與臨床COPD患者病理結(jié)果相符，但癥狀稍輕。我們?cè)谶^(guò)往的研究中，多數(shù)采用了熏煙加氣管注內(nèi)毒素的方法，來(lái)進(jìn)行臟腑表里相關(guān)理論的研究。

1.2 體會(huì) 這種方法看似簡(jiǎn)單，但實(shí)際操作中有很多需要注意的方面。

1)環(huán)境影響:實(shí)驗(yàn)需要選擇在SPF環(huán)境下進(jìn)行，一是排除天氣變化等干擾原因，例如:春秋季節(jié)呼吸系統(tǒng)疾病高發(fā)，在注射完內(nèi)毒素及熏煙后，動(dòng)物精神及健康狀態(tài)較差，容易突發(fā)其他疾病，使研究結(jié)果受到影響;二是模型組動(dòng)物熏煙后皮毛會(huì)附著煙霧顆粒，在換氣不良的環(huán)境下長(zhǎng)時(shí)間共同飼養(yǎng)時(shí)會(huì)對(duì)未造模組產(chǎn)生影響，從而干擾試驗(yàn)結(jié)果。

2)熏煙方法:熏煙過(guò)程中，要通過(guò)計(jì)算熏煙箱內(nèi)的體積得出達(dá)到要求濃度所需的香煙數(shù)量，在注入香煙氣體后，實(shí)驗(yàn)箱內(nèi)氧氣含量有限，應(yīng)嚴(yán)格控制箱內(nèi)動(dòng)物數(shù)量并且密切觀(guān)察，防止出現(xiàn)動(dòng)物缺氧死亡的情況。

3)氣管內(nèi)注射內(nèi)毒素的方法有兩種:一種是經(jīng)口腔向氣管內(nèi)插入套管針，再注入內(nèi)毒素。這種方法操作簡(jiǎn)便，成功率高，對(duì)動(dòng)物不會(huì)產(chǎn)生實(shí)質(zhì)性損害，但對(duì)操作人員技術(shù)要求較高且無(wú)法控制藥液進(jìn)入氣管以后的分布情況。另一種方法是切開(kāi)皮膚，暴露氣管及支氣管，用注射器將等量?jī)?nèi)毒素分別注射入左肺和右肺。這種方法操作簡(jiǎn)單，劑量控制準(zhǔn)確，但傷口較大，護(hù)理不當(dāng)易發(fā)生感染影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。兩種方法各有千秋，但均可以達(dá)到利用內(nèi)毒素對(duì)器官進(jìn)行影響的目的。

4)麻醉藥物的選擇:在注射內(nèi)毒素時(shí)需要將動(dòng)物麻醉，此時(shí)不應(yīng)選用能促進(jìn)動(dòng)物唾液分泌的藥物。

5)造模護(hù)理:注射內(nèi)毒素時(shí)動(dòng)物處于麻醉狀態(tài)，注射后等待其蘇醒的時(shí)間是最重要的環(huán)節(jié)，也是死亡高發(fā)的環(huán)節(jié)，護(hù)理人員一定要細(xì)心觀(guān)察并及時(shí)清理分泌的唾液和從氣管返出的藥物，保持呼吸道通暢，若是氣溫較低的季節(jié)還應(yīng)注意動(dòng)物的保暖，直至動(dòng)物蘇醒。

1.3 經(jīng)方研究舉例 本團(tuán)隊(duì)曾采用大鼠COPD模型應(yīng)用于經(jīng)方大承氣湯衍化方宣白承氣湯的研究。通過(guò)用宣白承氣湯及加減方對(duì)COPD模型大鼠進(jìn)行治療發(fā)現(xiàn)，宣白承氣湯可降低COPD大鼠模型的外周血和肺泡灌洗液中以上細(xì)胞因子含量，減輕全身及局部的炎癥反應(yīng)［3］，改善COPD模型大鼠肺功能及血?dú)猓?］，此外，基于此動(dòng)物模型，我們還發(fā)現(xiàn)宣白承氣湯亦可降低MUC5ACmRNA水平及蛋白表達(dá)，增強(qiáng)AQP5 mRNA、AQP1、AQP3水平及蛋白表達(dá)，從而抑制氣道黏液高分泌［5-6］。

將COPD模型大鼠用于經(jīng)方桔梗湯及其加味的研究。加味桔梗湯對(duì)COPD模型大鼠進(jìn)行干預(yù)后發(fā)現(xiàn)，加味桔梗湯從肺治腸治療“肺病及腸”的效應(yīng)機(jī)制可能與調(diào)節(jié)肺腸組織中NKA、VIP的含量有關(guān)［7］;同時(shí)發(fā)現(xiàn)，清熱解毒藥物配伍桔梗，在COPD的治療過(guò)程中能夠發(fā)揮增效(引經(jīng))作用，增加甘草具有協(xié)同增效(引經(jīng))作用［8］，此外，基于此動(dòng)物模型，我們還發(fā)現(xiàn)桔梗引經(jīng)入肺的作用機(jī)制可能與其增加病理狀態(tài)下肺組織中VIP含量、改變TFF3mRNA基因表達(dá)有關(guān)［9-10］。

COPD在中醫(yī)學(xué)中歸屬于咳嗽、上氣、喘證和肺脹的范疇。因此，基于本動(dòng)物模型，還可用于多種可治療咳嗽、上氣、喘證和肺脹的經(jīng)方的實(shí)驗(yàn)研究，如小青龍湯、越婢加半夏湯、承氣湯等等。

2 卵清蛋白致敏支氣管哮喘小鼠模型

2.1 造模方法 支氣管哮喘，是一種以氣道高反應(yīng)性可變的氣流阻塞為特征的氣道炎癥性疾病，其發(fā)病機(jī)制與氣道慢性炎癥變態(tài)反應(yīng)氣道高反應(yīng)以及氣道重構(gòu)等相關(guān)。

目前常用的造模方法是采用OVA致敏激發(fā)法制備小鼠哮喘模型:即在第1天和第13天，腹腔注射OVA氫氧化鋁凝膠混懸液致敏，第15～21天，置于霧化箱中霧化吸入OVA激發(fā)。

2.2 體會(huì) 操作過(guò)程中同樣需要注意幾點(diǎn):

1)環(huán)境影響:同COPD模型一樣，處理過(guò)的小鼠身上會(huì)沾染致敏煙霧，對(duì)不需要進(jìn)行造模處理的組別會(huì)產(chǎn)生較大影響，需要進(jìn)行一定距離的隔離處理并進(jìn)行充足的換氣排風(fēng)。

2)需要時(shí)刻觀(guān)察動(dòng)物情況，防止缺氧致動(dòng)物批量死亡的情況發(fā)生。

3)腹腔注射致敏藥物時(shí)務(wù)必選用氫氧化鋁凝膠制劑進(jìn)行配置，氫氧化鋁粉末制劑不能達(dá)到良好的致敏效果。

4)不同組動(dòng)物同時(shí)進(jìn)行處理時(shí)要進(jìn)行有效、全面的分隔，在激發(fā)過(guò)程中，動(dòng)物情緒焦躁，會(huì)產(chǎn)生竄跑、跳躍的行為，若不進(jìn)行全面的隔離會(huì)混淆組別。

2.3 經(jīng)方研究舉例 本團(tuán)隊(duì)曾采用哮喘模型小鼠用于經(jīng)方大承氣湯的研究。通過(guò)用大承氣湯對(duì)支氣管哮喘小鼠進(jìn)行干預(yù)，發(fā)現(xiàn)大承氣湯通過(guò)通腑降氣，調(diào)暢肺腸臟腑氣機(jī)，改善肺氣的宣發(fā)肅降，可在一定程度上改善小鼠模型肺部的癥狀及病理變化［11］，明顯減輕哮喘模型小鼠肺部炎癥，這一效應(yīng)的發(fā)生可能與肺、腸神經(jīng)肽NKA、TFF3及VIP的變化密切相關(guān)［12］。

哮喘，在中醫(yī)學(xué)中歸屬于哮證、喘證范疇。目前，對(duì)于哮喘的研究一直是呼吸系統(tǒng)疾病研究中的一個(gè)熱點(diǎn)，而中醫(yī)藥在治療哮喘方面也起到了重要作用?；谏鲜鱿∈竽Ｐ?，還可用于多種可治療哮喘的經(jīng)方的實(shí)驗(yàn)研究，如射干麻黃湯、小青龍湯、桂枝加厚樸杏子湯、麻杏石甘湯等等。

3 大鼠直腸半結(jié)扎模型

3.1 造模方法 在臟腑表里相關(guān)理論的研究中，我們還常用大鼠直腸半結(jié)扎模型對(duì)動(dòng)物進(jìn)行一定干預(yù)，來(lái)研究對(duì)肺部的影響。大鼠直腸半結(jié)扎模型是指通過(guò)外部手段，造成大鼠直腸半狹窄，造成腸道不通的疾病動(dòng)物模型。

常用操作方法為:無(wú)菌操作下打開(kāi)腹腔暴露直腸，以10號(hào)線(xiàn)經(jīng)腹壁在距肛門(mén)約1.5cm處從直腸下方繞過(guò)，將絲線(xiàn)兩端經(jīng)腹壁引出至腹壁切口兩側(cè)，在引出的絲線(xiàn)內(nèi)套入直徑為0.3cm的無(wú)菌鋼管后打結(jié)，退出鋼管，使直腸適度狹窄并懸吊于腹壁，關(guān)閉腹腔。

3.2 體會(huì) 大鼠直腸半結(jié)扎模型在造模過(guò)程中同時(shí)需要注意幾點(diǎn):

1)麻藥的選擇:麻藥不能選擇對(duì)腹膜有刺激的藥物，例如水合氯醛。水合氯醛會(huì)對(duì)動(dòng)物腹膜造成刺激，導(dǎo)致在實(shí)驗(yàn)后期動(dòng)物腸脹氣，肚大如鼓，有些傷口愈合不好的動(dòng)物甚至?xí)q破。

2)無(wú)菌操作下暴露直腸難度較大，因?yàn)橹蹦c位于腹后壁，暴露直腸勢(shì)必造成污染，因此，可以在不改變腹部臟器原有位置的情況下，靠手感將干凈的手指深入腹腔內(nèi)將線(xiàn)從直腸后穿出，并輕輕將直腸稍稍拉出，最大限度減少手術(shù)對(duì)動(dòng)物其他器官的影響。

3)術(shù)后護(hù)理:術(shù)后護(hù)理是所有動(dòng)物手術(shù)造模后非常重要的一項(xiàng)，為了減少感染，在關(guān)閉腹腔時(shí)可滴入適當(dāng)?shù)目股?縫合時(shí)也要盡量針距適當(dāng)，縫合平整，促進(jìn)愈合;勤換干凈的墊料，給予充足的食物和水分防止相互撕咬。

4)拆線(xiàn)時(shí)，采用外科拆線(xiàn)法，用碘酒將暴露在外的縫合線(xiàn)消毒，將縫合線(xiàn)稍稍拉出腹腔后剪斷，從另一端拉出。

3.3 經(jīng)方研究舉例 本團(tuán)隊(duì)曾將直腸半結(jié)扎大鼠模型用于經(jīng)方大承氣湯的研究。通過(guò)用大承氣湯對(duì)直腸半結(jié)扎模型大鼠進(jìn)行干預(yù)，發(fā)現(xiàn)經(jīng)大承氣湯干預(yù)后，大腸及肺臟病理改變減輕，肺泡灌洗液中淋巴細(xì)胞數(shù)量減少［13］，基于此動(dòng)物模型，我們還發(fā)現(xiàn)，大承氣湯干預(yù)可明顯減輕直腸半結(jié)扎模型大鼠的肺部炎癥，這一效應(yīng)的產(chǎn)生與肺組織中VIP、TFF3、NKA含量的變化密切相關(guān)［14］。

直腸半結(jié)扎動(dòng)物模型的臨床癥狀變化類(lèi)似于中醫(yī)便秘一證，主要引起腸道不通的疾病。基于此模型引起的癥狀改變，還可以將其用于承氣湯類(lèi)方、麻子仁丸、蜜煎導(dǎo)、土瓜根、大豬膽汁等方的研究。

4 胃潰瘍大鼠模型

4.1 造模方法 胃潰瘍是一種臨床常見(jiàn)的具有反復(fù)發(fā)作傾向的消化系統(tǒng)疾病，臨床多以上腹部疼痛或不適，腹脹、反酸、惡心、嘔吐等為特征。相關(guān)研究眾多，因此制造改模型的手法也非常多，有應(yīng)激性胃潰瘍模型、乙醇致大鼠胃潰瘍模型、幽門(mén)結(jié)扎型胃潰瘍模型、藥物誘發(fā)型胃潰瘍模型、和冰醋酸致慢性胃潰瘍模型，其中以冰醋酸致慢性胃潰瘍模型以其操作方法的簡(jiǎn)便，易于復(fù)制，潰瘍面明顯且病理結(jié)構(gòu)與人胃潰瘍極為相似而被廣泛使用。

本團(tuán)隊(duì)使用經(jīng)過(guò)改良的Okabe法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)造模。具體方法為:將動(dòng)物禁食48 h，麻醉后，固定于手術(shù)臺(tái)上，剃毛，消毒，鋪巾，于劍突下腹中線(xiàn)稍左分層切開(kāi)腹壁，將胃引出，用內(nèi)徑3 mm的玻璃管按在幽門(mén)無(wú)血管處，將蘸有純乙酸0.1 mL的細(xì)棉扦插入管內(nèi)與胃黏膜接觸，留滯1.5 min后撤掉，擦凈殘留酸液，以大網(wǎng)膜包裹，送入腹腔，關(guān)腹。術(shù)后第3天，禁食12 h，用食管喂以5%NaHCO32 mL，15 min后用胃管注入幽門(mén)螺旋菌菌液1.5 mL(103cfu/mL)，30 min后喂食，3 d1 次，共3 次［15］。

4.2 體會(huì) 大鼠胃潰瘍模型在造模時(shí)需要注意以下幾點(diǎn):

1)務(wù)必重視無(wú)菌操作，因?yàn)閷⑽覆恳龅倪^(guò)程中極易受到污染，使復(fù)原后的腹腔內(nèi)形成大面積的粘連，影響潰瘍面的觀(guān)察及取材。

2)可在實(shí)驗(yàn)前根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)室的情況及不同操作者的手法進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，找出適合本實(shí)驗(yàn)組的實(shí)驗(yàn)方法，若藥量過(guò)大或接觸時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致胃穿孔，若接觸不夠或藥量不夠則不能成功的造出潰瘍面。

3)選好手術(shù)通道，盡量選擇離操作區(qū)域較近的位置打開(kāi)手術(shù)通道，使腹腔內(nèi)容物位移盡量減小，一是復(fù)位簡(jiǎn)單，減少手術(shù)造成的損傷，二是減少手術(shù)過(guò)程中的污染。

4)選擇手術(shù)通道時(shí)盡量避開(kāi)血管，務(wù)必最大量減少出血，對(duì)防止腹腔內(nèi)粘連有很大的作用，即使出血也在關(guān)腹前將血跡擦拭干凈。

5)除此種方法之外，也有操作者將乙酸打入漿膜下近肌層，禁食48 h后胃部基本排空，胃壁本十分薄，將藥物準(zhǔn)確打入指定位置操作難度比較大。

4.3 經(jīng)方研究舉例 本團(tuán)隊(duì)曾將胃潰瘍大鼠模型應(yīng)用于經(jīng)方半夏瀉心湯的研究。通過(guò)半夏瀉心湯對(duì)胃潰瘍大鼠進(jìn)行干預(yù)，發(fā)現(xiàn)半夏瀉心湯具有促進(jìn)潰瘍愈合、降低愈合后潰瘍復(fù)發(fā)的治療作用?；诖藙?dòng)物模型，我們進(jìn)一步對(duì)半夏瀉心湯進(jìn)行拆方分析，發(fā)現(xiàn)本方甘補(bǔ)組藥物在促進(jìn)潰瘍愈合、降低愈合后潰瘍復(fù)發(fā)方面起主要作用，而全方組則療效最佳［16］。本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果對(duì)指導(dǎo)臨床治療消化性潰瘍中醫(yī)用藥以及新藥開(kāi)發(fā)等，都具有一定的參考價(jià)值。

胃潰瘍?cè)谥嗅t(yī)學(xué)中歸屬于“胃脘痛”“嘈雜”“泛酸”等病的范疇。因此，基于本動(dòng)物模型，還可用于多種可治療“胃脘痛”“嘈雜”“泛酸”等癥的相關(guān)經(jīng)方的實(shí)驗(yàn)研究，如瀉心湯類(lèi)方、小建中湯、理中湯、旋覆代赭湯、小陷胸湯等。

5 大鼠胃電節(jié)律失常模型

5.1 造模方法 胃電節(jié)律失常十分常見(jiàn)，它與胃功能性疾病密切相關(guān)，是發(fā)生胃運(yùn)動(dòng)功能障礙的一個(gè)重要原因。在實(shí)驗(yàn)研究方面，多為動(dòng)物體內(nèi)注入各種激素制劑或藥物(如甲啡肽、亮啡肽、PGE2、腎上腺素)誘發(fā)胃電節(jié)律失常［17］，這種造模方法與臨床常見(jiàn)病因有差異，張氏［18］不規(guī)則飼喂大鼠胃電節(jié)律失常模型從病因角度講與臨床更為接近。

模型組以不規(guī)則喂養(yǎng)方法飼養(yǎng)4周，即動(dòng)物逢單日正常進(jìn)食、雙日禁食，以打亂正常的飲食節(jié)律，自由飲水，水中加人鹽酸(每升水加10 mol/L鹽酸10 mL)以破壞胃內(nèi)酸堿環(huán)境，制備大鼠胃電節(jié)律失常模型，2周后胃竇部漿膜下埋置銀絲電極，7 d后記錄胃電慢波。

5.2 體會(huì) 大鼠胃電節(jié)律失常模型在造模時(shí)需要注意以下幾點(diǎn):

1)在大鼠清醒狀態(tài)下檢測(cè)胃電波時(shí)，應(yīng)盡量多人看管或?qū)⒋笫箢^部固定，也可制作一些小配件防止大鼠回頭啃咬電極。

2)埋入電極手術(shù)時(shí)盡量避免使用對(duì)腹膜具有刺激的麻藥。

3)埋入電極時(shí)需要注意的是，一避免出血，二在關(guān)閉腹腔時(shí)盡量將出血擦干凈，能有效避免腹腔內(nèi)器官粘連。

4)關(guān)閉腹腔前可加入適當(dāng)抗生素防止感染。

5)埋入電極時(shí)注意無(wú)菌操作，防止胃部出現(xiàn)不必要的感染繼而引發(fā)糜爛。

5.3 經(jīng)方研究舉例 本團(tuán)隊(duì)曾將胃電節(jié)律失常大鼠模型應(yīng)用于經(jīng)方半夏瀉心湯的研究。通過(guò)觀(guān)察半夏瀉心湯及其拆方對(duì)胃電節(jié)律失常大鼠進(jìn)行干預(yù)，發(fā)現(xiàn)半夏瀉心湯具有糾正胃電節(jié)律失常［19］、調(diào)節(jié)胃肌間神經(jīng)叢c-kit陽(yáng)性ICC含量的作用［20］，同時(shí)發(fā)現(xiàn)，半夏瀉心湯治療心下痞證(調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng))的作用機(jī)制可能與其調(diào)節(jié) SCF、c-kit基因表達(dá)有關(guān)［21-22］。

胃電節(jié)律失常與胃功能型疾病密切相關(guān)，是胃運(yùn)動(dòng)功能障礙的一個(gè)重要原因。雖然胃電節(jié)律失常大鼠模型不屬于中醫(yī)“證”的模型，但其臨床特征與心下痞的臨床表現(xiàn)相似，都以胃脘部滿(mǎn)悶不舒、惡心和(或)嘔吐、上腹飽脹感、食欲減退為特點(diǎn)。故此模型還可用于消化不良相關(guān)疾病的經(jīng)方研究，如小陷胸湯、枳術(shù)丸、茯苓甘草湯、桂枝加芍藥湯、旋覆代赭湯、吳茱萸湯等等。

綜上所述，除了以上幾種常用的造模方法，我們還涉及很多動(dòng)物模型的研究，被用于經(jīng)方及其他中醫(yī)中藥的研究中，中醫(yī)動(dòng)物模型的研究是一個(gè)長(zhǎng)期的系統(tǒng)工程，需要隨著時(shí)代疾病譜的變化而不斷完善，將能夠反映人類(lèi)疾病的動(dòng)物模型，應(yīng)用到經(jīng)方研究中，揭示經(jīng)方治療常見(jiàn)病、疑難病的現(xiàn)代生物學(xué)機(jī)制，為人類(lèi)健康做出貢獻(xiàn)。

［1］中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)慢性阻塞性肺疾病學(xué)組.慢性阻塞性肺疾病診治指南(2007年修訂版)［J］.中華內(nèi)科雜志，2007，46(3):254-2611.

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