游離二氧化硅對(duì)大鼠循環(huán)成纖維細(xì)胞mRNA 表達(dá)的實(shí)驗(yàn)

李舉

(四川科技職工大學(xué)職業(yè)安全健康與環(huán)保工程系 四川 成都 610101)

1.材料

8 ～13 周雄性Sprague - Dawley(SD)健康大鼠30 只，游離SiO2 標(biāo)準(zhǔn)品。

2.方法

檢測(cè)循環(huán)成纖維細(xì)胞總mRNA 純度和含量提取的RNA 2μl，滴加DEPC 水200 μl，用分光光度計(jì)測(cè)定260 納米(A260)及280 納米(A280)吸光度值，如果A260 與A280 的比值位于1.8 ～2.0，表示得到比較高的RNA 純度，此時(shí)的反應(yīng)模板合適。在260 納米的吸光度值等于1mRNA 含有40 μg/ml，mRNA 濃度(μg/μl)=260 納米吸光值×40 μg/ml ×稀釋倍數(shù)×0.001，mRNA 總含量(μg)=mRNA 濃度×總體積(μl)。

3.結(jié)果

不加上清為對(duì)照，和對(duì)照(OD 值等于0.397)比較，0 濃度組(OD 值是0.398)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05);20、40、60、80 μg/ml 濃度組(OD值分別是0.505、0.667、0.898、0.903)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)，0(OD 值是0.398)到80 μg/ml 濃度組(OD 值是0.903)表達(dá)逐漸增加;60 μg/ml(OD 值是0.898)和80 μg/ml 濃度組(OD 值是0.903)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。

4.討論

濃度不同的二氧化硅實(shí)驗(yàn)提示實(shí)驗(yàn)組cFB 對(duì)膠原Ⅰ、膠原Ⅲ、α 平滑肌肌動(dòng)蛋白mRNA 的表達(dá)高于對(duì)照組，隨著二氧化硅濃度增加而增加，暗示二氧化硅粉塵可以促進(jìn)cFB 對(duì)膠原Ⅰ、膠原Ⅲ、α 平滑肌肌動(dòng)蛋白mRNA 表達(dá)水平增加，0 濃度組和對(duì)照向接近，提示沒(méi)有經(jīng)二氧化硅刺激上清不能促進(jìn)cFB 對(duì)膠原Ⅰ、膠原Ⅲ、α 平滑肌肌動(dòng)蛋白mRNA 表達(dá)水平增加。Heppleston 等建立由巨噬細(xì)胞和FB 組成的矽肺模型實(shí)驗(yàn)。他們認(rèn)為二氧化硅粉塵作用于巨噬細(xì)胞能夠表達(dá)致成纖維細(xì)胞膠原合成因子［1］。在矽肺發(fā)病機(jī)理中徐勇認(rèn)為矽塵和人肺成纖維細(xì)胞共同培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞能夠吞噬矽塵，細(xì)胞內(nèi)白介素1 的mRNA 水平增加［2］，彭歡等用白介素1 刺激人外周血cFB 時(shí)發(fā)現(xiàn)白介素1 促進(jìn)cFB 增殖，促使分泌致炎因子，促進(jìn)遷移［3-5］。這和本實(shí)驗(yàn)有類似。60 μg/ml 與80 μg/ml 濃度組的mRNA相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示二氧化硅濃度增加時(shí)，接受刺激后cFB 對(duì)膠原Ⅰ、膠原Ⅲ、α 平滑肌肌動(dòng)蛋白的表達(dá)水平增加不太明顯，這是因?yàn)檩^高濃度的二氧化硅粉塵對(duì)cFB 有毒害作用［6］。

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