生脈散傳統(tǒng)飲片湯劑與配方顆粒湯劑5-羥甲基糠醛(5-HMF)含量比較

魏 梅 鄧淙友 梁志毅 張德雄

(廣東一方制藥有限公司,佛山,528244)

生脈散傳統(tǒng)飲片湯劑與配方顆粒湯劑5-羥甲基糠醛(5-HMF)含量比較

魏 梅 鄧淙友 梁志毅 張德雄

(廣東一方制藥有限公司,佛山,528244)

目的:通過HPLC法測(cè)定并比較生脈散傳統(tǒng)飲片湯劑及配方顆粒湯劑中5-羥甲基糠醛含量。方法:采用高效液相色譜法。Diamonsil C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流動(dòng)相:甲醇-水(10∶90);檢測(cè)波長(zhǎng):280 nm,柱溫:30 ℃;流速:1 mL/min。結(jié)果:不同生脈散傳統(tǒng)飲片湯劑中5-羥甲基糠醛含量為7.56～19.48 mg/劑;不同配方顆粒組成的湯劑中5-羥甲基糠醛含量為7.26～23.22 mg/劑。麥冬,五味子飲片均含有5-羥甲基糠醛,配伍對(duì)其并無增溶作用,但加熱可增加配方顆粒湯劑中5-羥甲基糠醛的含量。結(jié)論:生脈散配方顆粒湯劑與傳統(tǒng)飲片湯劑的色譜圖基本一致,但同批藥材制成的配方顆粒湯劑中5-羥甲基糠醛含量高于傳統(tǒng)飲片湯劑。

生脈散;配方顆粒;高效液相;5-羥甲基糠醛

中藥配方顆粒是以優(yōu)質(zhì)中藥材為原料,采用現(xiàn)代高新技術(shù)提取、濃縮、制粒而成,具有服用少、可直接沖服、使用及攜帶方便等優(yōu)點(diǎn),近年來在臨床使用逐漸增多[1]。生脈散最早出自金代醫(yī)家張?jiān)刂夺t(yī)學(xué)啟源》[2],其以傳統(tǒng)飲片湯劑應(yīng)用于臨床已有700余年,方簡(jiǎn)而力宏、經(jīng)久不衰。人參、麥冬、五味子共奏益氣生津,斂陰止汗之功效[3]?，F(xiàn)代藥理研究表明,生脈散中的5-羥甲基糠醛成分具有抗氧化、保護(hù)肝組織、改善血液微循環(huán)等生物活性[4-5],其可能是“益氣生脈”的物質(zhì)基礎(chǔ)。

因此,本實(shí)驗(yàn)在已完成的傳統(tǒng)飲片湯劑與中藥配方顆粒湯劑特征圖譜研究的基礎(chǔ)上,進(jìn)行傳統(tǒng)飲片湯劑與中藥配方顆粒湯劑中5-羥甲基糠醛的對(duì)比研究,以探討中藥配方顆粒在中藥復(fù)方配伍中應(yīng)用的可行性,為中藥配方顆粒能否替代傳統(tǒng)飲片湯劑提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Waters2695型高效液相色譜儀,996二極管陣列檢測(cè)器(Waters公司);XP 26型百萬分之一電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司);BS110S型萬分之一電子天平(北京賽多利斯天平有限公司)、KQ-500DE型超聲波清洗機(jī)(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 材料 人參配方顆粒(批號(hào):1307280、310118T、402117L、401208T);麥冬配方顆粒(批號(hào):1307109、309230T、401075T、403173T);五味子配方顆粒(批號(hào):1305801、309382T、312269T、403362T)均由廣東一方制藥有限公司提供。5-羥甲基糠醛(批號(hào):1001200655,西格瑪奧德里奇(上海)貿(mào)易有限公司)。人參(批號(hào):Y1211021、Y1311085)為五加科植物人參PanaxginsengC.A.Mey.的根。麥冬(批號(hào):YL130129)為百合科植物麥冬Ophiopogonjaponicas(L.)Ker-Gawl.的塊根。五味子(批號(hào):Y1311066、Y1303069)為木蘭科植物五味子Schisandrachinensis(Turcz.)Baill.的成熟果實(shí),藥材均經(jīng)廣東一方制藥有限公司質(zhì)量檢驗(yàn)中心鑒定。甲醇為色譜純,其他化學(xué)試劑均為國產(chǎn)分析純。其中編號(hào)為P1～P4的配方顆粒湯劑與編號(hào)為S1～S4的傳統(tǒng)飲片湯劑分別來源于同批藥材,見表1-2。

表1 配方顆粒湯劑對(duì)應(yīng)藥材來源

表2 傳統(tǒng)飲片湯劑對(duì)應(yīng)藥材來源

2 方法與結(jié)果

2.1 處方及湯劑制備[6]

2.1.1 處方組成及劑量 人參10 g、麥冬30 g、五味子15 g,共55 g。

2.1.2 單味傳統(tǒng)飲片湯劑制備 藥材剪碎或用銅盅敲碎，按處方量稱取三味飲片,分別加10倍水煎煮1.5 h,濾過,分別定容至500 mL,得人參、麥冬、五味子飲片湯劑,備用。

2.1.3 生脈散傳統(tǒng)飲片湯劑制備 藥材剪碎或用銅盅敲碎,按處方比例稱取以上三味飲片,加10倍水煎煮1.5 h,濾過,定容至500 mL,備用。

2.1.4 生脈散配方顆粒湯劑制備 稱取與藥材相當(dāng)量的三味配方顆粒,混合,加入90～100 ℃的水400 mL,攪拌溶解,冷卻后加水定容至500 mL,備用。

2.1.5 生脈散配方顆粒缺味湯劑制備 稱取與藥材相當(dāng)量的二味配方顆粒,混合,加入90～100 ℃的水400 mL,攪拌溶解,冷卻后加水定容至500 mL,分別制得缺人參、麥冬、五味子的生脈散配方顆粒缺味湯劑,備用。

2.2 HPLC法測(cè)定5-羥甲基糠醛含量

2.2.1 色譜條件[7-10]色譜柱 Diamonsil C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流動(dòng)相:甲醇-水(10∶90);柱溫:30 ℃;流速:1 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm;進(jìn)樣量:5 μL。對(duì)照品、供試品圖譜見圖1～圖3。

圖1 5-羥甲基糠醛對(duì)照品HPLC圖譜

圖2 生脈散傳統(tǒng)飲片湯劑S1的HPLC圖譜

圖3 生脈散配方顆粒湯劑P1的HPLC圖

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備[11-12]精密稱定5-羥甲基糠醛對(duì)照品2.324 mg,置150 mL量瓶中,加甲醇溶解,并稀釋至刻度,搖勻,制成濃度為15.49 μg/mL的5-羥甲基糠醛對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 將上述4種湯劑搖勻,濾過,取續(xù)濾液,用0.45 μm微孔濾膜濾過,即得。

2.2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取5-羥甲基糠醛對(duì)照品溶液2、4、8、16及20 μL,按上述色譜條件測(cè)定,記錄峰面積,以峰面積Y對(duì)進(jìn)樣量X(ng)進(jìn)行回歸分析,得5-羥甲基糠醛回歸方程:Y=0.000 1X+4.883 5,r=0.999 9。結(jié)果表明,5-羥甲基糠醛在31.0～309.9 ng范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取5-羥甲基糠醛對(duì)照品溶液,按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次,記錄色譜圖,5-羥甲基糠醛峰面積RSD值為0.86%,結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性考察 吸取同一供試品溶液(傳統(tǒng)飲片湯劑S1),分別在0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣,記錄色譜圖,5-羥甲基糠醛峰面積RSD值為1.59%，結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 分別取湯劑(傳統(tǒng)飲片湯劑S1)6份,按2.2.2項(xiàng)下方法操作,平行制備6份供試品溶液,按上述色譜條件測(cè)定峰面積,計(jì)算每劑中的5-羥甲基糠醛平均含量為7.56 mg,RSD為2.07%。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密吸取已知含量湯劑(傳統(tǒng)飲片湯劑S1)6份,每份5 mL,分別精密加入濃度為15.496 μg/mL的5-羥甲基糠醛對(duì)照品溶液5 mL,按2.2.3項(xiàng)下方法操作,計(jì)算其平均回收率。結(jié)果5-羥甲基糠醛的平均回收率為98.40%,RSD為2.56%,見表3。

表3傳統(tǒng)飲片湯劑S1中5-羥甲基糠醛加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2.9 樣品測(cè)定:按上述色譜條件分別測(cè)定飲片、生脈散配方顆粒缺味湯劑、傳統(tǒng)飲片湯劑及配方顆粒湯劑中5-羥甲基糠醛含量,并考察加熱時(shí)間對(duì)5-羥甲基糠醛含量的影響,結(jié)果見表4至表8。

表4 飲片、飲片湯劑與配方顆粒湯劑中 5-羥甲基糠醛含量測(cè)定結(jié)果

表5 生脈散配方顆粒缺味湯劑中 5-羥甲基糠醛含量測(cè)定結(jié)果

表6 生脈散傳統(tǒng)飲片湯劑與配方顆粒湯劑 中5-羥甲基糠醛含量測(cè)定結(jié)果

表7 10批生脈散配方顆粒湯劑5-羥甲基糠醛含量測(cè)定結(jié)果

表8 加熱對(duì)生脈散配方顆粒湯劑5-羥甲基糠醛含量的影響

3 結(jié)論

本試驗(yàn)通過DAD檢測(cè)器在200～370 nm波長(zhǎng)掃描,發(fā)現(xiàn)5-羥甲基糠醛在280 nm處有最大吸收,故選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm。在摸索色譜條件時(shí),比較甲醇-水不同濃度的溶液溶劑系統(tǒng),最終確定流動(dòng)相為甲醇-水(10∶90),得到的色譜峰峰形尖銳,分離度高,且基線穩(wěn)定。

從表4、表5可以看出,組成生脈散的3味飲片中,人參飲片不含有5-羥甲基糠醛,制成傳統(tǒng)飲片湯劑、配方顆粒湯劑也檢測(cè)不到5-羥甲基糠醛存在。而麥冬、五味子飲片都可檢測(cè)出5-羥甲基糠醛,制成傳統(tǒng)飲片湯劑與配方顆粒湯劑后含量有所增加,即配方顆粒湯劑>傳統(tǒng)飲片湯劑>飲片。另配方顆粒缺味湯劑藥對(duì)配伍,對(duì)5-羥甲基糠醛并無增溶作用,只是兩者各自傳統(tǒng)飲片湯劑原有量的疊加。從表6可以看出,生脈散傳統(tǒng)飲片湯劑與配方顆粒湯劑中均可檢測(cè)出此指標(biāo)成分,說明5-羥甲基糠醛并不是生脈散配伍共煎產(chǎn)生的新成分。由同一批藥材制得的生脈散傳統(tǒng)飲片湯劑與配方顆粒湯劑中,在相等劑量下,配方顆粒湯劑的含量要高于傳統(tǒng)湯劑,這可能與配方顆粒在濃縮與噴霧干燥過程中受熱有關(guān)[13-18]。從表7、表8可以看出,不同批次配方顆粒組成的生脈散配方顆粒湯劑中,5-羥甲基糠醛含量有一定差異,其可能是藥材來源、質(zhì)量不同所致。10批生脈散配方顆粒含量在7.26～23.22 mg/劑之間。隨著加熱時(shí)間的推移,配方顆粒湯劑中5-羥甲基糠醛含量會(huì)逐漸增多,說明加熱有可能使配方顆粒湯劑中其他物質(zhì)轉(zhuǎn)化為5-羥甲基糠醛[19]。

4 討論

傳統(tǒng)煎煮方法由于受到諸多不易規(guī)范統(tǒng)一的因素影響,如個(gè)人習(xí)慣、對(duì)火候的判斷、加水量多少等,皆可導(dǎo)致傳統(tǒng)飲片湯劑中有效成分的溶出含量變化較大[10]。而中藥配方顆粒采用同一工藝規(guī)程生產(chǎn),有效成分含量相對(duì)穩(wěn)定。在臨床應(yīng)用中,配方顆粒湯劑比傳統(tǒng)飲片湯劑更有利于穩(wěn)定地發(fā)揮療效。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),生脈散配方顆粒湯劑成分與傳統(tǒng)飲片湯劑并無區(qū)別,含量甚至優(yōu)于傳統(tǒng)飲片湯劑,說明從化學(xué)成分上中藥配方顆粒在替代傳統(tǒng)飲片湯劑中應(yīng)用可行。但中藥的成分相當(dāng)復(fù)雜,不能單以一個(gè)或幾個(gè)指標(biāo)成分的相當(dāng)或不相當(dāng)來進(jìn)行評(píng)價(jià)，研究配方顆粒在臨床上替代傳統(tǒng)飲片湯劑的可行性,還需進(jìn)行藥效學(xué)及臨床療效的對(duì)比研究來加以驗(yàn)證。

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(2014-11-06收稿 責(zé)任編輯：王明)

Comparison on Contents of 5-Hydroxymethyl-furfural(5-HMF) between Traditional Decoction and Granules of Shengmai San

Wei Mei, Deng Congyou, Liang Zhiyi, Zhang Dexiong

(GuangdongYifangPharmaceuticalCo.,Ltd.,Foshan528244,China)

Objective:To compare the contents of 5-HMF between traditional decoction and granules of Shengmai San by HPLC.Methods:A HPLC method was applied on a Diamonsil C18 column(4.6 mm×250 mm,5 μm) by an elution using MeOH-H2O(10:90) as the mobile phase. The detection wavelength was at 280nm. The column temperature was set up at 30℃ and the flow rate was 1 mL/min.Results:The contents of 5-HMF in the traditional decoction from different comprise were from 7.56 to 19.48 mg/dose. The contents of 5-HMF in the granules from different comprise were from 7.26 to 23.22 mg/dose. Lilyturf and Schisandra chinensis both contain 5-HMF, granules of Shengmai San with no solubilizaion of 5-HMF, but by heating can increase the content of 5-HMF.Conclusion:The HPLC chromatotograms are similar in the two forms of Shengmai San, but the contents of 5-HMF in granules prepared from the same batches of medicinal materials is higher than that of the traditional decoction.

Shengmai San; Granule;HPLC;5-HMF

廣東省中醫(yī)藥局建設(shè)中醫(yī)藥強(qiáng)省科研課題(編號(hào):20112084);廣東省教育部產(chǎn)學(xué)研結(jié)合項(xiàng)目(編號(hào):2012B091100183)

魏梅(1967—),女,碩士,副主任藥師,研究方向:中藥配方顆粒開發(fā)與質(zhì)量管理;Tel:(0757)85603332,E-mail:weimei67@126.com

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A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.01.027