高效液相二極管陣列檢測法比較巴西肉桂CANELA與中國肉桂中桂皮醛的含量

李莉 馮孟鑫 馬愷悅 王佳宇 侯文珍 趙百孝 劉春生 馬長華

·巴西草藥研究專題·

高效液相二極管陣列檢測法比較巴西肉桂CANELA與中國肉桂中桂皮醛的含量

李莉 馮孟鑫 馬愷悅 王佳宇 侯文珍 趙百孝 劉春生 馬長華

目的 比較巴西肉桂CANELA與中國肉桂中桂皮醛的含量差異,為肉桂藥材的新品種選育及品質(zhì)評價提供科學(xué)依據(jù)和方法。方法 采用高效液相二極管陣列檢測法分別測定6批巴西肉桂CANELA與中國肉桂中桂皮醛的含量。結(jié)果 6批巴西肉桂CANELA及中國肉桂中桂皮醛的平均含量分別為18.3%和5.27%,均明顯高于2010年版《中華人民共和國藥典》(一部)規(guī)定的1.5%。結(jié)論 以桂皮醛為指標(biāo)進行評價,巴西肉桂CANELA品質(zhì)優(yōu)于中國肉桂。本研究為確定巴西肉桂CANELA化學(xué)成分與藥用價值奠定了基礎(chǔ),也可為肉桂藥材品種的資源普查、新品種選育、品質(zhì)評價等提供科學(xué)參考。

巴西肉桂CANELA; 中國肉桂; 桂皮醛; 高效液相二極管陣列檢測法

肉桂Cinnamomum zeylanicum Bl.又名玉桂、玉樹、大桂等,為樟科植物肉桂的干燥樹皮,是一種常見的藥食同源的傳統(tǒng)中藥,已有兩千年的歷史,在國內(nèi)主要分布在廣西、廣東等地,國外主要分布于越南、印度、巴西、斯里蘭卡、印尼等國[1]。其藥用價值高,具有補火助陽、引火歸源、散寒止痛、活血通經(jīng)等功效,食用一般作為家庭烹調(diào)調(diào)味用品。產(chǎn)自巴西的草藥CANELA葡萄牙語意為肉桂,常用作香料和調(diào)味品,與中國肉桂食用的用途類似,但其藥用價值與中國肉桂相比如何迄今未見報道。

肉桂提取的揮發(fā)油中桂皮醛(Cinnamaldehyde)占總提取物52.92%～61.20%,是肉桂的主要活性成分,具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗菌、抗病毒等多種藥理作用,且毒副作用低[2-6]。2010年版《中華人民共和國藥典》(一部)將桂皮醛作為肉桂質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分,其含量的高低直接影響到肉桂的功效。本文采用高效液相—二極管陣列檢測法(highperformance liquid chromatography-diode array detection,HPLC-DAD)在290 nm下分別測定巴西肉桂CANELA與中國肉桂中桂皮醛的含量,通過比較兩者的差異,為巴西肉桂CANELA的化學(xué)成分與藥用價值研究奠定基礎(chǔ),同時為肉桂藥用品質(zhì)評價、品種資源普查、質(zhì)量控制提供參考依據(jù)[7-12]。

1 材料

1.1 材料

藥材:巴西肉桂CANELA 6批,購于巴西草藥市場,樣品的憑證標(biāo)本保存于北京中醫(yī)藥大學(xué)大學(xué)標(biāo)本室;中國肉桂6批(購自北京市花家地南里同仁堂藥店),經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)劉春生教授鑒定均為樟科植物錫蘭肉桂Cinnamomum zeylanicum Bl.的干燥樹皮。

1.2 試劑

桂皮醛(中國藥品生物制品鑒定所,批號: 110710-201217)、乙腈(色譜純,Fisher)、甲醇(色譜純,Fisher),娃哈哈純凈水。

1.3 儀器

Waters Breeze高效液相色譜儀(美國Waters公司),水浴鍋,粉碎機(型號:FW-100,北京中興偉業(yè)儀器有限公司),電子天平sartorius AG BS110S(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司),Waters Sunfire C18色譜柱(150 mm×4.6 mm,5μm)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Waters Sunfire C18色譜柱(150 mm× 4.6 mm,5μm);流動相:乙腈-水(35∶75);檢測波長:290 nm;流速:1 mL/min;進樣量:10μL;柱溫:30℃。

2.2 溶液制備

對照品溶液的制備:取桂皮醛對照品適量,精密稱定,加甲醇制成每1 mL含10μg的溶液,即得。

供試品溶液的制備:取本品粉末(過三號篩)約0.5 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇25 mL,稱定重量,超聲處理(功率 350 W,頻率35 kHz)10分鐘,放置過夜,同法超聲處理一次,再稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過。精密量取續(xù)濾液1 mL,置25 mL量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,即得。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性考察 采用2.2項下方法制備對照品溶液及巴西肉桂CANELA和中國肉桂的供試品溶液,分別精密吸取對照品及各供試品溶液10μL,按2.1項下色譜條件進樣分析,以考察待測成分相互間是否有干擾、其他成分是否對待測成分有干擾。各色譜圖見圖1。如圖所示,測定方法專屬性量好,待測成分與其它成分分離度大于1.5,即其他成分對待測成分測定無干擾。

2.3.2 線性關(guān)系考察 分別精密吸取2.2項下所制備對照品溶液1μL、3μL、5μL、10μL、15μL、20μL,按2.1項下色譜條件進行測定并記錄峰面積。以進樣量x為橫坐標(biāo),峰面積y為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并進行線性回歸,得到回歸方程y=3.11 ×1012x-3.08×105,R2=1,線性范圍為0.1014～4.056μg。結(jié)果表明在0.1014～4.056μg進樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.3 精密度實驗 精密吸取按2.2項下所制備對照品溶液10μL,按2.1項下色譜條件連續(xù)進樣6次,記錄峰面積并計算其RSD值為0.20%。結(jié)果表明本方法精密度良好。

2.3.4 穩(wěn)定性實驗 精密稱定中國肉桂約0.1 g,按2.2項下方法制備中國肉桂樣品供試品溶液一份,分別于室溫放置0小時、2小時、4小時、6小時、8小時、10小時,按2.1項下色譜條件進樣分析,記錄峰面積并計算其RSD值為2.00%。結(jié)果表明本方法穩(wěn)定性良好。

2.3.5 重復(fù)性實驗 精密稱定中國肉桂樣品6份,每份約1 g,按2.2項下方法制備供試品溶液,按2.1項下色譜條件進樣分析,記錄峰面積并計算其RSD值為1.60%,結(jié)果表明本方法重復(fù)性良好。

2.3.6 加樣回收率實驗 取6份中國肉桂樣品,每份約0.05 g,精密稱定,分別精密加入一定量的桂皮醛標(biāo)準(zhǔn)溶液,按2.2項下方法制備供試品溶液,按2.1項下色譜條件進樣分析,記錄峰面積,計算回收率與RSD。所得桂皮醛的平均回收率為105.84%,計算其RSD為2.00%。表明該方法準(zhǔn)確度良好。結(jié)果見表1。

2.4 含量測定

分別稱取6個批次的巴西肉桂CANELA和中國肉桂樣品約0.5 g,精密稱定,按2.2項下方法制備供試品溶液,按2.1項下色譜條件進樣分析,記錄峰面積,計算各待測成分含量與RSD。每個批次平行測定3次。結(jié)果見表2。

如表所示,巴西肉桂CANELA、中國肉桂中桂皮醛的含量分別為18.3%、5.27%,巴西肉桂CANELA中桂皮醛的含量約為中國肉桂的3.5倍。

3 討論

肉桂作為藥食同源的傳統(tǒng)中藥,在印度、巴西、老撾、越南等地也作為食用香料廣泛應(yīng)用,是古老香料之一,為家庭烹調(diào)佳品。近年來還被用于提取揮發(fā)油用作芳香療法的精油,其市場擁有廣闊前景。在國外巴西肉桂CANELA被廣泛用作辛香料和調(diào)味品,但其藥用價值相關(guān)研究未見報道。本研究從其化學(xué)成分與含量角度對巴西肉桂和中國肉桂品質(zhì)進行比較,以期為藥用肉桂的資源擴大及巴西肉桂的進一步研究提供依據(jù)。

本研究通過采用HPLC-DAD法對肉桂中主要活性成分,即2010年版《中華人民共和國藥典》(一部)規(guī)定的指標(biāo)性成分桂皮醛進行含量測定。結(jié)果表明巴西肉桂CANELA、中國肉桂中均含桂皮醛,測得含量分別為18.3%和5.27%,均高于藥典所規(guī)定的1.5%,符合要求。且巴西肉桂CANELA中桂皮醛含量明顯高于中國肉桂,因此,可以考慮將巴西肉桂CANELA引進作為藥用肉桂替代品,用于提取桂皮醛等有效成分。本實驗為巴西肉桂CANELA化學(xué)成分研究與藥用價值研究奠定一定的基礎(chǔ),并為藥用肉桂的品質(zhì)鑒定、品種資源普查、新品種選育、質(zhì)量控制提供了參考和依據(jù)。

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Comparison of the contents of Cinnamaldehyde between Brazilian cinnamomum zeylanicum Bl.and Chinese cinnamomum zeylanicum Bl.by HPLC-DAD

LI Li,FENG Meng-xin,MA Kai-yue,et al.School ofChinese Materia Medica,Beijing University ofChinese Medicine,Beijing 100102,China

ZHAO Bai-xiao,E-mail:baixiao100@gmail.com;MA Chang-hua,E-mail:machuanghua60@sina.com.cn

Objective To compare the contents of Cinnamaldehyde between Brazilian CANELA. and Chinese Cinnamomum zeylanicum Bl.and provide the reference for the breeding of variety and quality control of Cinnamomum zeylanicum Bl..M ethods Take 6 Brazil CANELA.and 6 Chinese Cinnamomum zeylanicum Bl.as the research objects.The contents of Cinnamaldehyde in Brazil and Chinese Cinnamomum zeylanicum Bl. were determined by High Performance Liquid Chromatography. Chromatographic column:waters sunfire C18 chromatographic column(150 mm x 4.6 mm,5 microns); mobile phase:acetonitrile:water(35:75);detection wavelength:290 nm;flow rate:1 mL/min; injection volume:10μL;column temperature:30℃.Results The Cinnamaldehyde,which is the index component in Cinnamomum zeylanicum Bl.was found both in Brazil and Chinese sample.The contents of Cinnamaldehyde Brazilian CANELA..and Cinnamomum zeylanicum Bl.were 18.3% and 5.27%, respectively,They are greater than the stipulated 1.5%in the 2010 edition of Chinese pharmacopoeia. Conclusion The content of Cinnamaldehyde in Brazilian CANELA was significantly higher than the Chinese Cinnamomum zeylanicum Bl..The study provides the reference for the census of variety resources, breeding of new variety and quality control of Cinnamomum zeylanicum Bl..It also lays the foundation for the chemical composition and medicinal research of Cinnamomum zeylanicum Bl..

Brazilian CANELA.; Chinese Cinnamomum zeylanicum Bl.; Cinnamaldehyde; HPLC-DAD

R284

A

10.3969/j.issn.1674-1749.2015.11.002

2015-08-18)

(本文編輯:蒲曉田)

國家國際科技合作專項(2011DFA31370)

100102 北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院[李莉(碩士研究生)、馮孟鑫(碩士研究生)、馬愷悅(碩士研究生)、王佳宇(碩士研究生)、侯文珍(碩士研究生)、劉春生、馬長華)],針灸推拿學(xué)院(趙百孝)

作者介紹:李莉(1989-),女,2012級碩士研究生。研究方向:質(zhì)量控制。E-mail:316613715@qq.com

趙百孝(1963-),博士,教授,博士生導(dǎo)師。研究方向:針灸推拿。E-mail:baixiao100@gmail.com;馬長華(1960-),教授,碩士生導(dǎo)師。研究方向:藥品質(zhì)量控制。E-mail:machanghua60@sina.com