溶血3 項試驗對于新生兒溶血病的診斷價值分析

冉柏林，李洪兵

在新生兒溶血病(HDN)的病因中，以母嬰血型不合引起的較為常見， 大部分是ABO 溶血病和Rh溶血病[1-2]。新生兒溶血病可導(dǎo)致患兒出現(xiàn)重度貧血、高膽紅素血癥及膽紅素腦病，如不及時診治，可導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥，嚴重患者可引起死亡[3]。 特別是由于ABO 血型抗原廣泛存在于自然界，母體雖未曾輸血或妊娠，但血清中可能已有IgG 抗體，故第一胎即可發(fā)病。新生兒ABO 溶血的確診需經(jīng)血型血清學(xué)檢查，證實母子ABO 血型不合，直接抗球蛋白試驗陽性或/和釋放抗體陽性[4-7]。本研究采用微柱凝膠抗球蛋白試驗(MGCT)檢測母嬰血型不合新生兒母親的IgG 血型抗體效價，同時進行溶血病3 項試驗，即游離抗體試驗、抗體釋放試驗和直接抗人球蛋白試驗來分析其對于產(chǎn)后新生兒溶血病的診斷價值，現(xiàn)報告如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 以2012 年7 月～2014 年8 月我院收治的母嬰血型不合的高膽紅素新生兒604 例及其母親604 例為研究對象。新生兒母親納入標準：單胎妊娠分娩；妊娠＞12 w；血型為O 型，新生兒父親為非O 型血；知情同意本研究且簽署知情同意書。 母嬰血型不合的高膽紅素新生兒納入標準：研究期間無死亡；符合母嬰血型不合的高膽紅素的診斷標準[7]；無先天性心血管疾病。 新生兒患兒中，男304例，女300 例；出生體重（2733.34±600.29）g；第1 胎504 例，第2 胎80 例，第3 胎20 例。 新生兒母親的平均年齡（25.09±4.29）歲；平均產(chǎn)次（2.09±1.11）次。

1.2 血型鑒定及直抗試驗 采用MGCT 法，實驗前將微柱凝膠卡取出，觀察有無干膠及氣泡，放置室溫中平衡15 min，離心2 min 備用。在新生兒母親血型鑒定中，取血型正反檢測卡1 張，在1～6 孔內(nèi)加入新生兒母親1%紅細胞懸液50 μl；7、8 孔先加入A、B 標準紅細胞各50 μl， 再加入新生兒母親血清50 μl，1500 r/min 離心8～10 min， 在顯微鏡下觀察判定結(jié)果。 在患兒血型鑒定中，取新生兒溶血病檢測卡1 張， 將患兒的紅細胞用生理鹽水配成1%的紅細胞懸液， 加入1～6 孔中，7、8 孔先加入A、B標準紅細胞各50 μl，1500 r/min 離心8～10 min，在顯微鏡下觀察判定結(jié)果。

1.3 游離抗體和抗體釋放試驗 選擇新生兒的EDTA-K2 抗凝血3～5 ml，低溫離心分離血漿，用生理鹽水洗滌紅細胞4 次，取0.5 ml 洗滌后的紅細胞置于干凈的EP 管中，取A 放散液400 μl 與B 放散液(大連Takara 公司)100 μl 混合均勻，加入0.5 ml的患兒洗滌紅細胞中， 室溫放置1 min；1500 r/min離心4 min 后， 將酸放散液轉(zhuǎn)移至另一只干凈的試管中， 加入紫紅色的中和液調(diào)至肉粉色，1500 r/min離心4 min 取上清液。 取新生兒溶血病檢測卡，1～3管分別加入50 μl 新生兒血清，4～6 管 分別加入50 μl 新生兒紅細胞放散液，將1%A 型紅細胞懸液分別加至1～4 號管中，1%B 型紅細胞懸液加入2～5號管中，1%O 型紅細胞懸液加入3～6 號管中；37 ℃孵育15 min，離心5 min，肉眼判定結(jié)果。

陽性判斷標準：紅細胞凝集塊位于微柱表面或凝膠中。 3 項試驗中≥2 項陽性或放散試驗陽性即可確診溶血??；放散陰性而直抗試驗或游離試驗陽性為可疑；3 項均為陰性即可排除溶血病。

1.4 直接抗人球蛋白試驗 取篩檢細胞50 μl，分別置于抗球蛋白檢測卡(上海生工公司)1～3 號孔內(nèi)，每孔加入50 μl 新生兒母親血清， 室溫孵育5 min，1500 r/min 離心5 min，肉眼觀察紅細胞留在微柱上端或分布在凝膠中為陽性。 在新生兒母親IgG 抗體效價的檢測中， 取新生兒母親血清200 μl， 加入2-Me 應(yīng)用液200 μl，37 ℃水浴30 min。 取8 只滅菌試管，通過倍比稀釋，使IgG 抗體效價依次為1:16、1:32、1:64、1:128、1:256、1:512、1:1024、1:2048，將第3～8管已稀釋樣本50 μl 移至己標記的抗人球蛋白試劑卡中，再分別加入50 μl 患兒父親1%紅細胞懸液。室溫孵育15 min，卡式離心機離心5 min(1500 r/min。依據(jù)試劑盒（上海生工公司）判斷標準[3]判定結(jié)果，ABO系統(tǒng)抗體效價＞1:64 為陽性；Rh 系統(tǒng)抗體效價≥1:32 為陽性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 選擇SPSS14.00 軟件進行分析，計數(shù)資料的比較采用χ2分析，相關(guān)性分析采用Pearson 直線相關(guān)分析，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 母親IgG 血型抗體效價與新生兒溶血病的關(guān)系 IgG 血型抗體效價陽性新生兒母親487 例，陽性率為80.6%； 新生兒溶血病的患病率為40.6%(245/604)，其中A 型溶血病的患病率為41.7%，B 型溶血病的患病率為39.8%， 對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P ＞0.05，表1)。

表1 A型與B型血新生兒溶血病的患病率對比（例)

2.2 溶血3 項試驗檢測結(jié)果 在245 例新生兒溶血病患兒中，溶血3 項試驗陽性率在A 型與B 型血型之間均無統(tǒng)計學(xué)差異(P ＞0.05，表2)。

2.3 母親IgG 血型抗體效價與新生兒溶血病的關(guān)系 Pearson 直線相關(guān)分析結(jié)果顯示， 母親IgG 血型抗體效價與新生兒溶血病的患病率呈正相關(guān)(r =0.972，P ＜0.05，表3)。

表2 新生兒溶血病患兒溶血3項試驗檢測結(jié)果

表3 新生兒母親lgG血型抗體效價與新生兒溶血病的關(guān)系

3 討論

新生兒溶血病是母嬰血型不合而產(chǎn)生同族血型的免疫性溶血，是新生兒病理性黃疸常見原因之一[8]，其主要發(fā)生在O 型血母親，而血型為A 型或B型的新生兒中[9]。 研究顯示，O 型血母親在孕前常已受其他原因的刺激使機體產(chǎn)生IgG 抗A、抗B 抗體，懷孕后這類抗體通過胎盤進入胎兒體內(nèi)可引起溶血[10]。 新生兒溶血病臨床表現(xiàn)的輕重程度與母體相應(yīng)抗體的量、抗體和胎兒紅細胞的結(jié)合程度以及胎兒、新生兒的代償能力有關(guān)。 近年來，由于溶血3 項檢查及靜脈注射免疫球蛋白的應(yīng)用，新生兒溶血病多能早期診斷，及時治療，減少了膽紅素腦病和死亡病例的發(fā)生。 溶血3 項試驗是早期診斷新生兒溶血的金標準， 新生兒早檢測溶血檢測3 項試驗，并結(jié)合檢測結(jié)果做出正確診斷和及時治療，可以避免病情進一步發(fā)展[11]。在新生兒溶血3 項試驗檢測中，直接抗人球蛋白試驗陽性說明患兒體內(nèi)的紅細胞可能被抗體致敏[12]；游離抗體試驗是檢測新生兒血清中是否存在與其紅細胞不配合的ABO 以外的抗體和(或)IgG 抗A(B)抗體，主要提示病情的嚴重程度；抗體釋放試驗的敏感性最高，多為100.0%[2]。

新生兒溶血可發(fā)生在胎兒期和新生兒早期。 在胎兒期溶血形成的膽紅素能迅速被母體肝臟代謝。而出生后由于溶血繼續(xù)存在，可導(dǎo)致新生兒高膽紅素血癥[13]。近年來，孕婦IgG 血型抗體效價檢測已成為產(chǎn)前檢查的常規(guī)項目[14]。文獻報道，當母體血清中IgG 抗A(B)抗體效價＞1:64 時，有可能使新生兒發(fā)生溶血；如果IgG 抗A(B)抗體效價≥1:128 時，提示新生兒可能受到損害；如果IgG 抗A(B)抗體效價≥1:512 時，則新生兒必然受到損害，必須進行臨床預(yù)防性治療[15]。本研究結(jié)果顯示，母親IgG 血型抗體效價陽性(≥1:64)率為80.6%，新生兒溶血病的患病率為40.6%；Pearson 直線相關(guān)分析顯示，IgG 血型抗體效價與溶血病的患病率呈正相關(guān)(P ＜0.05)。 證實當母親IgG 抗體效價顯著升高時， 新生兒溶血病患病率將顯著增加，臨床應(yīng)采取相應(yīng)的預(yù)防措施，并做好積極治療方案準備。

總之，溶血3 項試驗檢測對新生兒溶血病具有很好的預(yù)測及早期診斷效果，應(yīng)作為臨床產(chǎn)前檢查的常規(guī)項目之一； 對于IgG 血型抗體效價陽性的產(chǎn)婦，應(yīng)做好新生兒溶血病的積極治療方案準備。

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