新型坤凈栓原味藥中有效組分的測定

劉 杰，任 娜 ，吳 倫，田振坤

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 中醫(yī)藥研究院，哈爾濱 150040)

新型坤凈栓原味藥中有效組分的測定

劉 杰，任 娜 ，吳 倫，田振坤

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 中醫(yī)藥研究院，哈爾濱 150040)

建立測定中藥復(fù)方藥新型坤凈栓原味藥柴胡和火絨草中各組分量的測定方法.采用高效液相色譜法.色譜柱為Hypersils C18(250 nm×4.6 nm)，流動(dòng)相為甲醇-水(梯度洗脫)，流速為1.0 mL/min，檢測波長分別為：210 nm和320 nm，柱溫為25 ℃.柴胡皂苷a：y=161.27x+85.83，R2=0.999 2；柴胡皂苷d：y=450.89x-254.78，R2=0.999 1；咖啡酸：y=4 333.9x-357 880，R2=0.999 7；其質(zhì)量濃度分別在2.0～20.0 μg，1.0～10.0 μg線性范圍內(nèi)與各自峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系；精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性試驗(yàn)的RSD值分別為1.30%，1.22%，1.87%；平均加樣回收率分別為98.30%，98.37%，97.65%，RSD值分別為2.39%，2.02%，3.42%(n=5).該方法簡便、靈敏、準(zhǔn)確，可為新型坤凈栓的質(zhì)量控制提供依據(jù).

高效液相；柴胡；火絨草；測定

新型坤凈栓是在收載于中華人民共和國衛(wèi)生部《藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑中坤凈栓[1]的基礎(chǔ)上改劑型而成的新藥，由柴胡、火絨草和呋喃唑酮組成.具有清熱燥濕，去腐生肌之功效，臨床上常用于治療濕熱帶下、宮頸糜爛、宮頸炎等.方中柴胡主要的活性成分為柴胡皂苷，其中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的活性較強(qiáng)，具有較強(qiáng)的保肝、抗炎、降低膽固醇等藥理活性[2]；火絨草是我國西北東北等地的民間常用中草藥，其有效成分為咖啡酸、原兒茶醛和香草酸等，具有抗炎癥反應(yīng)的作用[3].呋喃唑酮為硝基類的抗菌藥，有較好的抗菌作用，療效確切.以往的研究中[4]對坤凈栓中的指標(biāo)性成分柴胡皂苷a進(jìn)行過質(zhì)量評價(jià)，結(jié)果重復(fù)性良好，本文采用高效液相色譜法對新型坤凈栓中的柴胡皂苷a、柴胡皂苷d和咖啡酸進(jìn)行測定，取得了滿意的結(jié)果.本操作簡便，重復(fù)性好，可用于新型坤凈栓的質(zhì)量控制.

1 儀器與試藥

1.1 儀器

1260型高效液相色譜儀(安捷倫科技)；MS205DU型電子天平(梅特勒-托利多上海有限公司).

1.2 試藥

柴胡皂苷a對照品(中國藥品生物制品檢定：生產(chǎn)批號：110778-200402)，柴胡皂苷d對照品(中國藥品生物制品檢定：生產(chǎn)批號：110777-200303)，咖啡酸對照品(中國食品藥品檢定研究院：生產(chǎn)批號：110885-200102)，甲醇為色譜甲醇，水為去離子水，其余試劑均為分析純.

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

色譜柱：Hypersils C18柱；檢測波長：210 nm，320 nm；柱溫：室溫； 流速：1.0 mL/min；流動(dòng)相：甲醇-水(梯度洗脫)，見表1

表1 柴胡皂苷a,d，咖啡酸的色譜條件[5-6]

標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)間/min甲醇/%水/%柴胡皂苷a3050～10050～0柴胡皂苷d5025～9075～10咖啡酸3010～10090～0

2.2 溶劑的配置

2.2.1對照品溶液的制備

精密稱量柴胡皂苷a和柴胡皂苷d對照品各5.0 mg，置5 mL容量瓶中，加甲醇并稀釋至刻度配制成每1mL含柴胡皂苷a和柴胡皂苷d 1.0mg的對照品溶液，搖勻，過0.22 μL微孔膜，作為儲(chǔ)備液.精密稱取咖啡酸對照品5.0 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇并稀釋至刻度配置成每1 mL含咖啡酸0.5 mg的對照品溶液，搖勻，過0.22 μL微孔膜，作為儲(chǔ)備液.

2.2.2供試品溶液的制備

取3份北柴胡和火絨草供試品各5 g，80%乙醇提取3次，每次30 min，合并提取液，回收后配置成1 mg/mL的樣品溶液，過0.22 μL的微孔膜，待用.

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍

精密吸取柴胡皂苷a對照品溶液(質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL)，2、4、6、8、10、12、16、20 μL，按上述色譜條件注入色譜儀，測定峰面積.以峰面積(A)為縱坐標(biāo)，柴胡皂苷a質(zhì)量m(μg)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：y=161.27x+85.83，R2=0.999 2.結(jié)果表明，柴胡皂苷a在2.0～20 μL內(nèi)線性關(guān)系良好.

精密吸取柴胡皂苷d對照品溶液(質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL)，2、4、6、8、10、12、14、16、20 μL，按上述色譜條件注入色譜儀，測定峰面積.以峰面積(A)為縱坐標(biāo)，柴胡皂苷d質(zhì)量m(μg)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：y=450.89x-254.78，R2=0.999 1.結(jié)果表明，柴胡皂苷d在2.0～20 μL內(nèi)線性關(guān)系良好.

精密吸取咖啡酸對照品溶液(質(zhì)量濃度為0.5mg/mL)，2、4、6、8、10、12、16、20 μL，按上述色譜條件注入色譜儀，測定峰面積.以峰面積(A)為縱坐標(biāo)，咖啡酸質(zhì)量 (μg)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：y=4 333.9x-357 880，R2=0.999 7.結(jié)果表明，咖啡酸在1.0～10 μg內(nèi)線性關(guān)系良好.

2.4 精密度實(shí)驗(yàn)

分別精密吸取同一濃度的各對照品10 μL，按照上述色譜條件重復(fù)測定6次，柴胡皂苷a、d和咖啡酸的峰面積積分平均值分別為2 006.761、5 206.247、30 049 538，RSD值分別為1.30%，1.22%，1.87%，表明本方法精密度良好.

2.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

分別精密吸取同一供試品溶液6份，按上述色譜條件注入色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10 μL，柴胡皂苷a、d和咖啡酸的峰面積積分平均值分別為1 422.696，3 433.177，2 409 947.17；RSD值分別為0.55%，1.08%，1.87%，結(jié)果表明重現(xiàn)性良好.

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

在上述色譜條件下，制備供試品溶液完成后，立刻精密吸取10 μL測定，記錄峰面積，以后在2、4、8、12、24 h各測定1次，記錄峰面積，柴胡皂苷a、d和咖啡酸峰面積的RSD值分別為0.55%，1.08%，1.07%，結(jié)果可見供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好.

2.7 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

稱取已知含量的樣品1 mL，分別精密加入對照品溶液1 mL，按上述色譜條件各進(jìn)樣3次，結(jié)果見表2.

表2 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

平均回收率/%RSD/%柴胡皂苷a柴胡皂苷d咖啡酸柴胡皂苷a柴胡皂苷d咖啡酸98．3098．3797．62．392．023．42

2.8 樣品測定

取上述2.2.2中配置的供試品溶液，按上述色譜條件注入色譜儀，記錄峰面積，計(jì)算其中柴胡皂苷a、d和咖啡酸的百分含量.經(jīng)計(jì)算，原味藥柴胡中柴胡皂苷a和d分別為0.75%和1.72%；原味藥火絨草中咖啡酸為0.36%.

3 討 論

新型坤凈栓是以便捷、科學(xué)和創(chuàng)新為出發(fā)點(diǎn)，解決了陰道栓劑基質(zhì)遇高溫易軟化的缺點(diǎn)，增加了藥物與腔道黏膜褶皺的充分接觸，利于藥物的吸收，可用于各種婦科陰道疾病的治療.本研究采用高效液相色譜法對新型坤凈栓原味藥柴胡和火絨草中的活性成分柴胡皂苷a、柴胡皂苷d和咖啡酸進(jìn)行了量的測定，并且柴胡中柴胡皂苷a、d百分含量的總和高于0.30%[7]，取得了較滿意的結(jié)果.實(shí)驗(yàn)方法易于操作，重復(fù)性良好，可用于新型坤凈栓的質(zhì)量控制.

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部. 藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑[M]. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 1998. 166-168.

[2] 陳亞雙, 孫世偉. 柴胡的化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J]. 黑龍江醫(yī)藥, 2014, 27(3): 630-633.

[3] 伍儀行, 王建國, 謝家聲, 等. 火絨草的研究進(jìn)展[J]. 中草藥, 2000, 31(1): 64-66.

[4] 王 巍, 張 亮. 坤凈栓提取工藝及基質(zhì)篩選研究[J]. 黑龍江中醫(yī)藥, 2009(2): 52-53.

[5] LI X Q, GAO Q T, CHEN X H,etal. High performance liquid chromatographic assay of saikosaponins from radix Bupleuri in China [J]. Biol Pharm Bull, 2005, 28(9): 1736-1742.

[6] KWON H J, SIM H J, LEE S I,etal. Analysis of saikosaponins in Bupleuri Radix and Caihu-shugan-san using reversed-phase HPLC with pulsed amperometric detection [J]. J Sep Sci, 2011, 34(6): 651-658.

[7] 中華人民共和國藥典(一部)[M]. 北京: 中國醫(yī)藥科技出版社, 2010. 263-264.

Content determination of effective component of natural medicine in new KunJing suppository

LIU Jie, REN Na, WU Lun, TIAN Zhen-kun

(Reasearch Institute of Traditional Chinese Medicine, Heilongjiang University of Chinese Medicine, Harbin 150040, China)

To develop a method for content determination of natural medicine radix bupleuri and edelweiss in Chinese herbal compound new KunJing suppository. In this paper, the content were analyzed using high-performance liquid chromatography (HPLC) analysis. Chromatographic analysis was performed on a Hypersils C18column (250 nm×4.6 mm); the mobile phase was methanol and water with a constant flow rate of 1.0 mL/min. Peaks were detected at 210 nm and 320nm of UV detection. Column temperature was 25 ℃. Saikosaponin a:y=161.27x+85.83,R2=0.999 2; Saikosaponin d:y=450.89x-254.78,R2=0.999 1; Caffeic acid:y=4 333.9x-357 880,R2=0.999 7. The mass concentrations were in the range of 2.0～20.0 μg and 1.0～10.0 μg, respectively, and have a good linear relation with their peak area integral. TheRSDvalues of precision, reproducibility, stability were 1.30%, 1.22% and 1.87%, respectively. The average sample recovery rates were 2.39%, 2.02% and 3.42%, respectively. The established method was sensitive, simple,accurate applicable, and it provides the reference for the quality control of new KunJing suppository.

HPLC; radix bupleuri;edelweiss; content determination

2014-12-17.

黑龍江省教育廳科學(xué)技術(shù)研究面上項(xiàng)目(12541736)；黑龍江省教育廳科學(xué)技術(shù)研究面上項(xiàng)目(12541755)；黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)新藥研究基金項(xiàng)目(2013xy02)；黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)博士創(chuàng)新基金項(xiàng)目(2012bs02).

劉 杰(1985-)，女，博士，研究方向：中藥創(chuàng)新藥物研究.

田振坤(1955-)，男，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：中藥創(chuàng)新藥物研究.

R284

A

1672-0946(2015)06-0675-03