結(jié)直腸癌中SCC-S2的表達(dá)及意義

趙婷婷　刑鵬　李繼光

·論著·

結(jié)直腸癌中SCC-S2的表達(dá)及意義

趙婷婷刑鵬李繼光

【摘要】目的SCC-S2是近期發(fā)現(xiàn)的一種在多種癌癥中過(guò)表達(dá)，并且與癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為關(guān)系密切的物質(zhì)。但是在結(jié)直腸癌中，SCC-S2的表達(dá)和生物學(xué)作用未見(jiàn)報(bào)道。本研究目的是探索SCC-S2在結(jié)直腸癌及其癌旁正常組織中的表達(dá)水平，探討SCC-S2與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系。方法本研究應(yīng)用免疫組化分析了SCC-S2在136例結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)情況，使用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果67例(49.26%)結(jié)直腸癌標(biāo)本SCC-S2過(guò)表達(dá)。SCC-S2的過(guò)表達(dá)與結(jié)直腸癌的TNM分期顯著相關(guān)(P<0.01)；與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P<0.05)；與細(xì)胞增殖指數(shù)顯著相關(guān)(P>0.01)。結(jié)論SCC-S2在結(jié)直腸癌中表達(dá)升高，并與結(jié)直腸癌侵襲和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。SCC-S2在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮著重要作用。

【關(guān)鍵詞】結(jié)直腸腫瘤；免疫組織化學(xué)；SCC-S2

作者單位：110000沈陽(yáng)，中國(guó)醫(yī)科大學(xué)腫瘤研究所

在發(fā)達(dá)國(guó)家，結(jié)直腸癌病死率已位居惡性腫瘤第一位[1]。目前，手術(shù)切除結(jié)合術(shù)后輔助放化療仍然是結(jié)直腸癌治愈的唯一途徑，但這種方法對(duì)于進(jìn)展期或者已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移的直結(jié)腸癌來(lái)說(shuō)并不理想。為了突破傳統(tǒng)治療方法的限制，使發(fā)生轉(zhuǎn)移的直結(jié)腸癌患者達(dá)到長(zhǎng)期生存，我們?nèi)孕枰l(fā)現(xiàn)新的治療策略。在這方面，基因治療已經(jīng)被證明能增加細(xì)胞毒性藥物在癌癥治療的效率。因此，探索能作為腫瘤標(biāo)記物預(yù)測(cè)直結(jié)腸癌進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)的靶基因是非常重要的。

SCC-S2(基因名TNFAIP8)最早是通過(guò)比較來(lái)源于同一患者的原發(fā)頭頸部鱗狀細(xì)胞癌(HNSCC)與相對(duì)應(yīng)的轉(zhuǎn)移的頭頸部鱗癌細(xì)胞系而發(fā)現(xiàn)的[2]。SCC-S2核酸序列結(jié)構(gòu)中開(kāi)放閱讀框架氨基末端包含著與調(diào)控細(xì)胞死亡蛋白FLIP(fas-associated death domain-like interleukin-1-β-converting enzyme-inhibitory protein)中死亡效應(yīng)結(jié)構(gòu)域II(death effector domain II，DEDII)高度同源的序列，其表達(dá)可誘導(dǎo)TNF-α和轉(zhuǎn)錄激活NF-κB，并在人體的多種腫瘤組織中都有表達(dá)[2-4]。有研究表明，SCC-S2在糖皮質(zhì)激素介導(dǎo)的胸腺細(xì)胞凋亡過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用[5]。Kumar等[6]認(rèn)為SCC-S2作為抗凋亡分子，其過(guò)表達(dá)可促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增生和遷移能力。Dong等提出SCC-S2在非小細(xì)胞癌中過(guò)表達(dá)，并與其惡性程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示SCC-S2是非小細(xì)胞癌的一個(gè)重要的癌基因[7]。

盡管SCC-S2與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，但其對(duì)人直結(jié)腸癌的作用尚未明確。該研究旨在闡明SCC-S2在直結(jié)腸癌中的表達(dá)情況及其與臨床病理特點(diǎn)的關(guān)系，為今后直結(jié)腸癌治療提供新的靶點(diǎn)。

資料與方法

一、一般資料

收集2006年至2008年中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院136例原發(fā)性結(jié)腸癌手術(shù)切除標(biāo)本。所有患者術(shù)前均未行放、化療。組織學(xué)分類和分化程度根據(jù)WHO分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定。所有136例結(jié)腸癌患者根據(jù)WHO組織學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn)劃分：Ⅰ級(jí)31例，Ⅱ級(jí)49例，Ⅲ級(jí)44例，Ⅳ級(jí)12例。臨床分期根據(jù)第七版直結(jié)腸癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)劃分。

二、方法

采用免疫組化SP法進(jìn)行染色，按SP試劑盒(福州邁新公司)方法操作。外科切除標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林固定、石蠟包埋。將石蠟組織塊4μm厚切片，經(jīng)二甲苯脫蠟，再于梯度酒精水化。經(jīng)PBS漂洗后，在0.01M檸檬酸鹽緩沖液(PH 6.0)里高壓2分鐘進(jìn)行抗原修復(fù)。然后在PBS中冷卻至室溫。PBS漂洗，加入一滴內(nèi)源性過(guò)氧化物酶阻斷劑，室溫下放置10min。PBS漂洗，用含10%山羊血清的PBS液室溫下封閉20min。加兔SCC-S2的多克隆抗體(1：200，Abcam公司，美國(guó))和Ki-67鼠單克隆抗體(1：500稀釋，Abcam，美國(guó))4℃過(guò)夜。經(jīng)PBS沖洗后加二抗在室溫下孵育10min，PBS沖洗后加鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化酶1滴，室溫靜置10 min，然后行DAB染色3~10 min，蘇木素染色3~5 min，1%鹽酸乙醇脫色3sec，梯度脫水脫乙醇后用中性樹(shù)膠封片，固定后于顯微鏡下觀察結(jié)果。實(shí)驗(yàn)中，用兔IG作為陰性對(duì)照。

兩位病理專家隨機(jī)雙盲觀察染色結(jié)果，于顯微鏡下隨機(jī)取5個(gè)不同的視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，計(jì)算陽(yáng)性染色細(xì)胞所占得比例。按細(xì)胞質(zhì)著色的百分比分為0-4個(gè)級(jí)別：0級(jí)為無(wú)染色；1級(jí)為1~25%；2級(jí)為26~50%；3級(jí)為51~75%；4級(jí)為≥76%。同時(shí)判定染色強(qiáng)度：0級(jí)為無(wú)染色；1級(jí)為中度染色；2級(jí)為強(qiáng)染色。著色細(xì)胞數(shù)得分乘以著色強(qiáng)度得分為SCC-S2得分。計(jì)算統(tǒng)計(jì)結(jié)果，<4分為陰性，≥4分為陽(yáng)性。

Ki-67免疫組化染色結(jié)果基于陽(yáng)性染色細(xì)胞比例，陽(yáng)性染色細(xì)胞比例≥40%為Ki-67陽(yáng)性表達(dá)，<40%為Ki-67陰性表達(dá)。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)　　果

采用免疫組化SP法檢測(cè)SCC-S2蛋白在136例結(jié)腸癌及其癌旁正常結(jié)腸組織中的表達(dá)。SCC-S2在正常結(jié)腸組織中均未著色，表現(xiàn)為陰性。136例結(jié)腸癌組織中SCC-S2陽(yáng)性率為49.26%(67例)，陽(yáng)性信號(hào)主要定位于腫瘤細(xì)胞的胞質(zhì)中(圖1)。

對(duì)臨床病理因素進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，SCC-S2陽(yáng)性與患者年齡、性別、分化、腫瘤位置、T分期無(wú)明顯相關(guān)(P>0.05)，但與TNM分期(P<0.01)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P<0.05)及Ki-67表達(dá)(P<0.01)明顯相關(guān)(表1)。與SCC-S2陰性表達(dá)患者相比，SCC-S2陽(yáng)性表達(dá)的患者，其TNM分期更晚，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Ki-67陽(yáng)性的概率明顯增加。

注：a圖為SCC-S2在腫瘤組織中免疫組織化學(xué)染色陰性表達(dá)圖像；b圖為SCC-S2在腫瘤組織中免疫組織化學(xué)染色陽(yáng)性表達(dá)圖像圖1　SCC-S2在腫瘤組織中免疫組織化學(xué)染色表達(dá)圖像

討　　論

目前，SCC-S2已經(jīng)被證實(shí)在人的多種腫瘤組織存在過(guò)表達(dá)，并且其與腫瘤的增生和侵襲密切相關(guān)。該蛋白自首次發(fā)現(xiàn)以來(lái)，已相繼被研究發(fā)現(xiàn)在卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌等組織惡性腫瘤高表達(dá)。然而SCC-S2在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其與臨床病理因素的關(guān)系未見(jiàn)報(bào)道。

在本研究中，我們選擇了136例手術(shù)切除的結(jié)腸癌患者，對(duì)SCC-S2的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系進(jìn)行探討，發(fā)現(xiàn)SCC-S2在癌旁的正常結(jié)腸組織中均為陰性，而在結(jié)腸癌中SCC-S2陽(yáng)性率為49.26%，提示SCC-S2可能與直結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。進(jìn)而，我們分析了SCC-S2的表達(dá)與臨床病理資料的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)SCC-S2的表達(dá)上調(diào)與結(jié)腸癌的TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及Ki-67表達(dá)明顯相關(guān)。這些結(jié)果與SCC-S2在其他腫瘤中的表達(dá)情況相一致，說(shuō)明SCC-S2在結(jié)腸癌的增殖和侵襲中也發(fā)揮著重要作用。這個(gè)結(jié)果也提示了SCC-S2可能是治療直結(jié)腸癌的一個(gè)新的靶點(diǎn)。

表1　SCC-S2的表達(dá)與結(jié)腸癌的臨床病理因素關(guān)系情況表

參考文獻(xiàn)

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(本文編輯：馬天翼)

趙婷婷，刑鵬，李繼光.結(jié)直腸癌中SCC-S2的表達(dá)及意義[J/CD].中華結(jié)直腸疾病電子雜志，2015，4(1)：54-57.

Expression and the significance of SCC-S2 in colorectal cancer

ZHAOTing-ting，XINGPeng，LIJi-guang

.TumorResearchInstituteofChinaMedicalUniversity，Shenyang110013，China.

Correspondingauthor：LIJi-guang，Email：13898829926@163.com.

【Abstract】ObjectiveSCC-S2 was recently reported to be overexpressed in various cancers and associated with the malignant behavior of cancer cells.However，the expression of SCCS2 and its biological roles in colorectal cancers have not been reported.The aim of this study is to investigate the expression and clinical significance of SCC-S2 in colorectal cancers.MethodsThe expression pattern of SCC-S2 in 136 colorectal cancer tissues was analyzed by immunohistochemistry.The statistic analysis was performed by SPSS 18.0.ResultsSCC-S2 was overexpressed in 67(49.26 %)of 136 colon cancer specimens.There was a significant association between SCC-S2 overexpression and TNM stage(P<0.01)，lymph node metastasis(P<0.05)，and proliferation index(P<0.01).ConclusionsSCC-S2 is overexpressed in colorectal cancers and contributes to invasion and lymph node metastasis.SCC-S2 may play an important role as tumor-promoting factor in colorectal cancer.

【Key words】Colorectal neoplasms；Immunohistochemistry；SCC-S2

(收稿日期：2015-01-15)

通訊作者：李繼光，Email：13898829926@163.com

基金項(xiàng)目:國(guó)家自然科學(xué)基金(81272718)

DOI：10.3877/cma.j.issn.2095-3224.2015.01.12