4種犬棘球絳蟲檢查方法對(duì)比觀察

胡廣衛(wèi)，蔡金山，馬睿麟，趙全邦，馬占全，李連芳，李　靜（青海省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，青海西寧810001）中圖分類號(hào)：S852.732　　文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B　　文章編號(hào)：0529- 6005（2015）10- 0043- 02

4種犬棘球絳蟲檢查方法對(duì)比觀察

胡廣衛(wèi)，蔡金山，馬睿麟，趙全邦，馬占全，李連芳，李靜
（青海省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，青海西寧810001）
中圖分類號(hào)：S852.73+2文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B文章編號(hào)：0529- 6005（2015）10- 0043- 02

棘球蚴?。‥chinococcosis）是由棘球?qū)伲‥chino?coccus）絳蟲的中絳期幼蟲—棘球蚴寄生于動(dòng)物和人的內(nèi)臟所致的一類嚴(yán)重危害人體健康和阻礙畜牧業(yè)發(fā)展的人畜共患寄生蟲病，又稱包蟲?。╤ydatid disease）。本病呈世界性分布，主要流行于歐洲、非洲北部、亞洲、南美洲和大洋洲，在我國(guó)主要見于新疆、寧夏、青海、西藏、甘肅、四川阿壩等放牧地區(qū)。棘球蚴病的終末宿主以犬科動(dòng)物為主，棘球絳蟲感染的診斷主要有糞便蟲卵檢查法、剖檢法、氫溴酸檳榔堿瀉下法、糞抗原ELI?SA法、糞便蟲體DNA檢查法[1]和血清抗體ELISA法等。幾種檢查方法中，目前使用較多的仍然為世界衛(wèi)生組織（WHO）和世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）推薦的作為檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的方法—常規(guī)的氫溴酸檳榔堿瀉下法和剖檢法，剖檢法最為直觀，也最為準(zhǔn)確。除剖檢法之外的另外幾種方法在臨床上也應(yīng)用較多，各有優(yōu)劣，但很少有人同時(shí)將幾種方法應(yīng)用同樣的試驗(yàn)動(dòng)物在一起進(jìn)行比較。本試驗(yàn)以剖檢法為標(biāo)準(zhǔn)，比較了糞便蟲卵檢查法、糞抗原ELISA法和氫溴酸檳榔堿瀉下法的陽(yáng)性檢出率，為今后的犬棘球絳蟲檢測(cè)工作提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料氫溴酸檳榔堿，購(gòu)自內(nèi)蒙古赤峰獸藥廠；蔗糖，犬糞細(xì)粒棘球絳蟲抗原ELISA檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自珠海海泰生物制劑有限公司；顯微鏡等。

1.2試驗(yàn)動(dòng)物28條犬，來(lái)自于青海省澤庫(kù)、貴南、互助、剛察、同德、海晏和興?？h，為牧羊犬和流浪犬。

1.3方法試驗(yàn)犬空腹后先進(jìn)行氫溴酸檳榔堿瀉下法進(jìn)行檢查，同時(shí)收集犬排出的糞便，然后進(jìn)行剖檢法檢查。收集的糞便標(biāo)記清楚后-20℃保存，先后在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行糞便蟲卵檢查和糞抗原ELISA法檢測(cè)。

進(jìn)行所有檢查時(shí)要求操作者以及助手穿防護(hù)服，戴口罩。操作過(guò)程中要避免被犬咬傷或抓傷，試驗(yàn)完畢后的廢棄物集中進(jìn)行無(wú)害化處理。

1.3.1氫溴酸檳榔堿瀉下法選擇比較安全的場(chǎng)地，將試驗(yàn)犬拴牢。給空腹12 h的犬灌服氫溴酸檳榔堿，40 min～60 min后，在被檢犬排出大量正常糞便后，會(huì)排出標(biāo)準(zhǔn)糞便（無(wú)內(nèi)容物的黏性液體），通過(guò)檢查標(biāo)準(zhǔn)糞樣中有無(wú)棘球絳蟲而進(jìn)行棘球絳蟲病的診斷。

糞便收集完后，將犬繼續(xù)固定12 h，排出的糞便深埋。所有地面上糞便清除干凈，扔入廢坑，撒入石灰，并用土埋實(shí)，以免小孩或犬將坑內(nèi)廢棄物弄出造成污染。凡被犬糞接觸過(guò)的地面、鐵鍬、鐵釬、鐵鏈等一律用噴燈焚燒。

1.3.2糞便蟲卵檢查法飽和蔗糖漂浮法：稱取0.5 g采集于試驗(yàn)犬的糞便，放入15 mL離心管中，加少量飽和蔗糖液，充分?jǐn)嚢韬?，再加飽和蔗糖液至略隆起于試管口，靜置30 min，鏡檢蟲卵計(jì)數(shù)。

1.3.3剖檢法將試驗(yàn)犬解剖，從剖檢犬內(nèi)臟中取出小腸，腸內(nèi)容物置于盆中用生理鹽水漂洗沉淀，棄去上清數(shù)次后，用平皿逐份仔細(xì)檢查腸內(nèi)容物。腸管用剪刀剪開后，用生理鹽水輕輕沖洗，然后肉眼或者放大鏡觀察腸壁內(nèi)側(cè)有無(wú)棘球絳蟲并計(jì)數(shù)。

1.3.4糞抗原ELISA法應(yīng)用犬糞細(xì)粒棘球絳蟲抗原ELISA檢測(cè)試劑盒，對(duì)采集于試驗(yàn)犬的糞便進(jìn)行犬棘球絳蟲病的檢測(cè)。

2　結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，剖檢法的棘球絳蟲檢出率為64.29%；而瀉下法為17.86%，糞抗原ELISA法為14.29%，糞便蟲卵檢查法最低，為3.57%，見表1。

表1　四種檢查方法棘球絳蟲陽(yáng)性檢出率對(duì)比

3　結(jié)論

從結(jié)果可以看出，作為評(píng)價(jià)其他檢測(cè)方法的“金標(biāo)準(zhǔn)”[2]，剖檢法的陽(yáng)性檢出率比其他幾種方法高出很多，但是實(shí)際操作起來(lái)比較麻煩，可行性不大。相比之下，氫溴酸檳榔堿瀉下法和糞抗原ELISA法的檢出率要低很多，這可能與瀉下法藥物和ELISA檢測(cè)試劑有一定關(guān)系，但兩者的檢出率比較相近，而且比糞便蟲卵檢查法要高，這與焦偉[3]等的研究比較相近。El-Shehabi F S[4]等在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，犬糞抗原ELISA陽(yáng)性率為剖檢法的61.5%，而本試驗(yàn)比較低，為22.2%（4/18）。這可能是犬體內(nèi)棘球絳蟲數(shù)量較少的因素，因?yàn)镋l-Shehabi F S等發(fā)現(xiàn)當(dāng)犬體內(nèi)棘球絳蟲在100條以上時(shí)ELISA的敏感性較高。剖檢法能比較直觀的觀察出犬有無(wú)棘球絳蟲感染，但現(xiàn)實(shí)中意義不大，僅可作為某一地區(qū)流行病學(xué)調(diào)查的一個(gè)手段。氫溴酸檳榔堿瀉下法是僅次于剖檢法的檢查方法，但有相當(dāng)一部分犬只對(duì)檳榔堿不敏感，另外存在工作難度大、耗時(shí)費(fèi)力、工作人員易感染蟲卵的潛在危險(xiǎn)和對(duì)周圍生活環(huán)境污染的危險(xiǎn)。所以，與氫溴酸檳榔堿瀉下法檢出率相近的糞抗原ELISA法應(yīng)用起來(lái)就比較方便。黃燕[5]等在研究中指出，糞抗原ELISA法與剖檢結(jié)果相比，敏感性為92.3% ,特異性為80%，糞抗原在感染后的第2～3周可檢出，在早期診斷野生犬科動(dòng)物自然感染棘球絳蟲病中也具有很高的應(yīng)用價(jià)值。糞便蟲卵檢查法陽(yáng)性檢出率不高，在實(shí)際應(yīng)用中意義不大。

幾種檢查方法對(duì)犬棘球絳蟲的陽(yáng)性檢出率差別較大，而且操作的可行性也不同，所以在犬棘球絳蟲病的診斷中要多種檢查方法互補(bǔ)，能有效的彌補(bǔ)不同檢查方法的缺陷，盡可能使檢查結(jié)果科學(xué)化。

參考文獻(xiàn)：

[1]張亞樓，溫浩，馬旭東，等.家犬糞便中的細(xì)粒棘球絳蟲DNA-PCR檢測(cè)方法的建立[J] .中國(guó)病原生物學(xué)雜志，2006，1（5）：363-365.

[2] Eckert J . Predictive values and quality control of techniques for the diagnosis of Echinococcus multilocularis in definitive hosts [J].Acta Tropica，2003，85（2）：157-163.

[3]焦偉，柴君杰，伊斯拉音，等.現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用糞抗原檢測(cè)法診斷犬細(xì)粒棘球絳蟲感染的效果評(píng)價(jià)[J].中國(guó)寄生蟲病防治雜志，2003，3（16）：170-171.

[4] El-Shehabi F S，Kamhawi S A，Schantz P M，等.犬細(xì)粒棘球絳蟲的診斷：北諾爾當(dāng)犬及紅狐的糞抗原檢測(cè)與尸檢法的對(duì)比〔英〕[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)寄生蟲病分冊(cè)，2007，7（2）：83-90.

[5]黃燕，David H D，Christine A J，等.犬糞便棘球絳蟲抗原的雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)法建立與應(yīng)用[J].預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志，2008，24（6）：407-411.

作者簡(jiǎn)介：胡廣衛(wèi)（1982-），男，獸醫(yī)師，碩士，從事動(dòng)物防疫方向，E-mail：qhhgw@sina.com

收稿日期：2014-03-30