瀉肝安神法對(duì)睡眠剝奪大鼠氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)影響的研究

邢佳　王嘉麟　賀立娟　王椿野

瀉肝安神法對(duì)睡眠剝奪大鼠氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)影響的研究

邢佳王嘉麟賀立娟王椿野

【摘要】目的探討瀉肝安神法對(duì)睡眠剝奪大鼠腦干、海馬、下丘腦腦區(qū)氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)含量的干預(yù)效應(yīng)。方法將60只SD大鼠隨機(jī)分為4組，分別為正常對(duì)照組、失眠模型組、中藥組、西藥組，每組各15只，除正常對(duì)照組外的其余三組大鼠一律采用水平臺(tái)法反復(fù)剝奪睡眠7次，每次持續(xù)24小時(shí)。造模結(jié)束后，中藥組大鼠灌胃給藥瀉肝安神湯，西藥組灌胃給藥地西泮溶解液，失眠模型組灌胃給予純凈水，干預(yù)7天后取材，采用高效液相色譜法檢測(cè)各組大鼠腦干、海馬、下丘腦腦區(qū)6種氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的含量。結(jié)果經(jīng)方差分析發(fā)現(xiàn)大鼠剝奪睡眠后腦干氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)門冬氨酸下降，γ-氨基丁酸升高，下丘腦γ-氨基丁酸下降(P<0.05)，而在海馬和下丘腦區(qū)域各氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)含量變化不顯著(P>0.05)。采取瀉肝安神法治療后大鼠腦干門冬氨酸含量顯著升高，下丘腦γ-氨基丁酸含量升高(P<0.05)；而采用地西泮片治療后大鼠腦干區(qū)門冬氨酸升高，下丘腦門冬氨酸、γ-氨基丁酸、甘氨酸、?；撬嵘?P<0.05)。結(jié)論瀉肝安神法可調(diào)節(jié)睡眠剝奪大鼠的氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)，在下丘腦的作用機(jī)制類似于地西泮片，但對(duì)于氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的影響影響靶點(diǎn)要少于西藥。

【關(guān)鍵詞】γ-氨基丁酸；瀉肝安神法；水平臺(tái)法；睡眠剝奪大鼠；氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)

現(xiàn)今社會(huì)生活節(jié)奏的加快使人們生活方式改變，睡眠剝奪現(xiàn)象嚴(yán)重，心理壓力不斷增加，失眠發(fā)病率逐年升高，已嚴(yán)重威脅到人們的生活質(zhì)量及身心健康，中醫(yī)認(rèn)為壓力過(guò)大，精神抑郁，情志不暢，肝氣不舒，郁久化火，火熱上擾心神，發(fā)為不寐，因此，不寐與肝、心兩臟密切相關(guān)。瀉肝安神法標(biāo)本兼顧對(duì)失眠患者的睡眠及情緒有很好的改善作用，臨床取得較好療效，但其療效機(jī)制尚未闡明，目前已知的睡眠促進(jìn)神經(jīng)元全部都是以γ-氨基丁酸(gamma-amino butyric acid ,GABA)作為神經(jīng)遞質(zhì)的[1]。GABA是腦內(nèi)主要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，其神經(jīng)元幾乎無(wú)所不在地分布在大腦內(nèi)的每一個(gè)解剖部位，其中腦干和丘腦網(wǎng)狀核GABA能神經(jīng)元，以狀態(tài)選擇方式釋放GABA，抑制喚醒系統(tǒng)的靶神經(jīng)元[2]。而目前臨床公認(rèn)的治療失眠的鎮(zhèn)靜催眠類藥物都是作用在GABA受體發(fā)揮作用的。這為本研究提供了思路，本研究旨在通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察瀉肝安神法治療失眠前后大鼠腦干、海馬、下丘腦以GABA為代表的氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)含量測(cè)定，以探討瀉肝安神法干預(yù)失眠的療效機(jī)制。具體實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果如下。

1材料與方法

1.1動(dòng)物及分組

健康雄性SPF級(jí)Sprague Dawley(SD)大鼠，體質(zhì)量(250±20)g。由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供[許可證號(hào)：SCXK(京)2012-0001]。大鼠適應(yīng)環(huán)境1周后，用隨機(jī)數(shù)字表法[3]分組為：正常對(duì)照組、失眠模型組、中藥組、西藥組。每組15只，共60只。

1.2主要儀器及試劑

GABA標(biāo)準(zhǔn)品Sigma，辛烷磺酸鈉(1-OctanesulfonicAcid，Sodium Salt)色譜純 J.T.Baker，乙二胺四乙酸(EDTA，F(xiàn)ree acid)超純 Amresco，甲醇(CH3OH)、 乙腈(CH3CN)色譜純Fisher ChemAlert，0.5 mol/L醋酸鹽緩沖液(pH 6.0)，5%四氫呋喃，鄰苯二甲醛(OPA)，雙蒸餾水(didistilled water，DDW)

高效液相色譜儀(2695分離單元，2465 電導(dǎo)檢測(cè)器，Waters)，Empower色譜工作站。高速離心機(jī)(5417R，Eppendorf)，旋渦混合器(MS2 Minishaker，IKA Works)，超純水器(Milli-Q Gradient A10，Millipore)，標(biāo)準(zhǔn)型PH計(jì)(Basic PH Meter PB-20，Sartorius)。

1.3實(shí)驗(yàn)藥品

地西泮：北京益民藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(國(guó)藥準(zhǔn)字H11020898)，購(gòu)自北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院。

中藥湯劑：購(gòu)自北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院中藥房(柴胡10 g、郁金10 g、丹皮12 g、梔子10 g、當(dāng)歸12 g、白芍15 g、首烏藤15 g、酸棗仁20 g、川芎10 g、枳殼10 g、香附10 g、夏枯草15 g、黃芪10 g、茯苓15 g、刺五加15 g、炙甘草6 g)，自行煎制。

按人體和大鼠比例公式計(jì)算藥量。中藥湯劑人體單次給藥生藥量195 g，煎煮為250 mL中藥湯劑，按公式計(jì)算折合大鼠給藥量為17.5 g/kg，折合為具體藥量平均為5.6 mL。西藥片劑人體單次給藥生藥量1 mg，可溶解于10 mL純凈水中，按公式計(jì)算折合大鼠給藥量為0.09 mg/kg，折合為具體藥量平均為0.23 mL。

1.4動(dòng)物模型制備

采用睡眠剝奪法造模，具體方法如下：將大鼠分別放入睡眠剝奪箱內(nèi)的小平臺(tái)上，自由進(jìn)食、飲水，可進(jìn)行轉(zhuǎn)身、抬頭、舔毛等活動(dòng)，當(dāng)其進(jìn)入快速動(dòng)眼相(REM)睡眠，由于全身肌張力降低、肌肉松弛，大鼠將落入平臺(tái)下面的水中而驚醒，再重新爬上站臺(tái)，繼續(xù)在維持清醒狀態(tài)下站立。反復(fù)剝奪睡眠7次，每次持續(xù)24小時(shí)(8∶00～8∶00)，隔日1次，共14天，以達(dá)到睡眠剝奪的效果。為了排除隔離、限制活動(dòng)和水環(huán)境造成的應(yīng)激影響，設(shè)立了大平臺(tái)對(duì)照組,大鼠在大平臺(tái)上可以睡眠而不會(huì)落入水中，其它環(huán)境與模型組相同，但大平臺(tái)直徑大，可保持完整的睡眠周期。正常對(duì)照組不接受睡眠剝奪。

1.5組織取材及標(biāo)本處理

從表2可以得知，與完全中介效應(yīng)模型相比，部分中介效應(yīng)模型雖然比較復(fù)雜，但是對(duì)數(shù)據(jù)的擬合程度更好。同時(shí)，部分中介效應(yīng)模型的基本適配指標(biāo)均達(dá)到檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，且估計(jì)結(jié)果的基本適配指標(biāo)良好，未違反模型辨認(rèn)規(guī)則。

取材當(dāng)天稱重后，10%水合氯醛(30 mg/kg)腹腔注射麻醉后直接斷頭取腦(整個(gè)過(guò)程應(yīng)在5分鐘之內(nèi)完成)，從枕骨大孔向口腔側(cè)進(jìn)刀，剪開顱骨，剝?nèi)ヮ^頂骨，用鑷子取出整個(gè)腦組織，冰盤上分離出海馬、腦干及下丘腦，冰凍生理鹽水漂洗后濾紙拭干表面水分， 電子天平稱質(zhì)量，標(biāo)記稱重后分別裝入1.5 mL Eppendorf管，放置于-80℃冰箱保存，待樣品集齊后成批檢測(cè)。檢測(cè)前將稱重后的腦組織放入預(yù)冷至4℃的0.4 M高氯酸90 mg中，冰浴中勻漿2～3分鐘，并沉淀30分鐘去除蛋白。于冰浴下快速玻璃勻漿，靜置10分鐘，4℃條件下14000 r/min低溫離心15分鐘，取上清液，用0.22 μm濾膜過(guò)濾，-80℃保存待測(cè)(氨基酸檢測(cè)用Costar (Spin-X，0.22μm)離心式過(guò)濾器7000 r/min離心過(guò)濾，再用0.05 M 高氯酸10倍稀釋，取20 μL放入自動(dòng)進(jìn)樣器中待測(cè))。

1.6色譜條件

預(yù)柱：Shiseido，Guard Cartridge，Capcell C18 MG S-5，4.0×10 mm；色譜柱：Waters XterraTM MS(3.0×50 mm，2.5 μm，Part#186000598)；流動(dòng)相：100 mM 磷酸氫二鈉，25%甲醇，10%乙腈，用磷酸調(diào)pH至6.70。流速：0.6 mL/分鐘；衍生方法：取50 μL OPA/βME 加入到20μL稀釋后的腦勻漿液中，衍生2分鐘后上樣; (程序：Line1 Add 50uLl from reagent A to sample; Line2 Mix 4 cycles with 30 μL; Line3 Wait 2 minute)；進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：40℃；設(shè)置2道電勢(shì)為： 150、550 mV。

1.7統(tǒng)計(jì)處理

2結(jié)果

2.1門冬氨酸

實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)方差分析統(tǒng)計(jì)提示，各組間門冬氨酸含量在腦干(F=4.37，P=0.0095)和下丘腦(F=3.29，P=0.0332)有差異，在海馬無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=1.26，P=0.3025)。組間采用SNK-q檢驗(yàn)提示，在腦干區(qū)模型組低于空白對(duì)照組，中藥組及西藥組高于模型組(P<0.05)。在下丘腦西藥組高于模型組(P<0.05)。該結(jié)果表明，睡眠剝奪后模型組大鼠腦干區(qū)的門冬氨酸含量較空白組明顯下降(P<0.05)，海馬區(qū)和下丘腦也相對(duì)降低，但變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。而在瀉肝安神湯干預(yù)1周之后，中藥組在腦干區(qū)的門冬氨酸含量顯著高于模型組(P<0.05)，在下丘腦與海馬也有升高的趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。采用地西泮片治療后大鼠腦干區(qū)和下丘腦區(qū)門冬氨酸也有所升高(P<0.05)。

表1各組間不同腦區(qū)的門冬氨酸含量比較

組別腦干下丘腦海馬空白對(duì)照組447.22±60.1143.59±49.43622.31±863.71失眠模型組280.92±116.47b109.06±31.29252.06±193.20西藥組317.82±30.88a201.86±77.81a839.26±897.71中藥組417.16±72.71a155.72±76.66554.70±600.05

注：與模型組比較aP<0.05；與空白組比較，bP<0.05。

2.2γ-氨基丁酸

實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)方差分析統(tǒng)計(jì)提示，各組間GABA含量在腦干(F=4.37，P=0.0095)和下丘腦(F=3.29，P=0.0332)有差異，在海馬無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=4.31，P=0.1605)。組間采用SNK-q檢驗(yàn)提示，在腦干區(qū)模型組高于空白對(duì)照組(P<0.05)。在下丘腦模型組低于空白對(duì)照組，中藥組及西藥組高于模型組(P<0.05)。該結(jié)果表明，睡眠剝奪后模型組大鼠較空白組大鼠在腦干區(qū)的GABA含量升高，在下丘腦區(qū)的GABA含量下降(P<0.05)，在海馬有下降趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。瀉肝安神湯干預(yù)1周之后，中藥組在下丘腦區(qū)的GABA含量高于模型組(P<0.05)，在腦干與海馬也有升高的趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。西藥組結(jié)果與中藥組一致。

表2各組間不同腦區(qū)的GABA含量比較

組別腦干下丘腦海馬空白對(duì)照組253.60±44.29137.86±36.35649.39±321.42失眠模型組306.07±25.20b111.01±23.84b365.80±108.99西藥組375.32±84.36b200.7±54.37ba1477.33±1755.66中藥組357.32±84.36b169.56±63.77a856.74±813.57

注：與模型組比較，aP<0.05；與空白組比較，bP<0.05。

2.3谷氨酸

實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)方差分析統(tǒng)計(jì)提示各組間谷氨酸含量在腦干(F=2.5，P=0.0736)、下丘腦(F=2.45，P=0.0823)和海馬均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=2.39，P=0.075)。提示睡眠剝奪及重要干預(yù)對(duì)谷氨酸遞質(zhì)含量影響不大。

表3各組間不同腦區(qū)的谷氨酸含量比較

組別 腦干 下丘腦 海馬正常對(duì)照組707.69±297674.24±230.981112.27±532.80失眠模型組918.36±228.51654.21±184.89706.65±225.85西藥組974.94±340.171016.45±325.192613.97±2753.71中藥組969.91±162.20851.27±420.081615.92±1497.26

2.4谷氨酰胺

實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)方差分析統(tǒng)計(jì)提示各組間谷氨酰胺含量在腦干(F=1.84，P=0.1554)、下丘腦(F=1.5，P=0.2336)和海馬均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=3.77，P=0.287)。提示睡眠剝奪及重要干預(yù)對(duì)谷氨酰胺遞質(zhì)含量影響不大。

表4各組間不同腦區(qū)的谷氨酰胺含量比較

組別 腦干 下丘腦 海馬正常對(duì)照組397.25±175.52347.39±178.50824.50±420.05失眠模型組449.80±85.88277.66±93.79450.99±136.79西藥組516.18±188.61435.49±162.381666.65±1790.13中藥組524.03±105.15381.42±188.421106.23±1100.95

2.5甘氨酸

實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)方差分析統(tǒng)計(jì)提示，各組間甘氨酸含量在下丘腦(F=2.94，P=0.0481)有差異，其中西藥組高于模型組(P<0.05)，其余組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。各組間在腦干(F=1.26，P=0.3004)和海馬(F=2.08，P=0.1189)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。提示睡眠剝奪及中藥干預(yù)對(duì)甘氨酸遞質(zhì)含量影響不大。

表5各組間不同腦區(qū)的甘氨酸含量比較

組別 腦干 下丘腦 海馬正常對(duì)照組234.49±97.3244.3±17.93132.22±66.06失眠模型組208.57±45.9435.45±11.9962.25±29.26西藥組259.24±94.1959.77±14.86a240.32±266.69中藥組273.01±70.3343.61±20.37145.29±147.81

注：與模型組比較，aP<0.05

2.6?；撬?/p>

實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)方差分析統(tǒng)計(jì)提示，各組間牛磺酸含量在下丘腦(F=3.5，P=0.0265)有差異，其中西藥組高于模型組和空白對(duì)照組(P<0.05)，其余組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。各組間在腦干(F=1.26，P=0.3004)和海馬(F=2.22，P=0.1011)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。提示睡眠剝奪及中藥干預(yù)對(duì)甘氨酸遞質(zhì)含量影響不大，西藥對(duì)下丘腦?；撬徇f質(zhì)有部分影響。

表6各組間不同腦區(qū)的?；撬岷勘容^

組別腦干下丘腦海馬正常對(duì)照組218.47±114.65415.80±173.69429.30±243.37失眠模型組259.51±138.25323.78±98.69183.76±75.36西藥組298.29±116.89587.44±180.41ab774.85±836.57中藥組278.96±61.93431.36±198.03472.99±462

注：與模型組比較aP<0.05，與空白組比較bP<0.05

3討論

3.1大鼠造模后神經(jīng)遞質(zhì)的變化

睡眠是一個(gè)重要的生物學(xué)過(guò)程，睡眠是通過(guò)多個(gè)腦區(qū)和神經(jīng)調(diào)節(jié)物質(zhì)交互錯(cuò)雜作用來(lái)調(diào)節(jié)的。而睡眠剝奪后中樞神經(jīng)系統(tǒng)處于普遍的抑制狀態(tài),其機(jī)制就與中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)興奮性氨基酸與抑制性氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)的平衡失調(diào)密切相關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)剝奪睡眠96小時(shí)后大鼠各腦組織(腦干、大腦額葉皮質(zhì)及下丘腦等)GABA、GABA/Glu(γ-氨基丁酸/谷氨酸)均顯著增高[4]。尚有研究提示，大鼠睡眠剝奪后下丘腦GABA表達(dá)較正常睡眠組顯著增高[5]。但對(duì)于失眠大鼠腦內(nèi)GABA的含量變化的研究并不統(tǒng)一，目前存在兩種截然相反的結(jié)果，一類研究[6-8]發(fā)現(xiàn)睡眠剝奪后下丘腦谷氨酸、GABA升高，給予中藥治療后下降并趨于正常水平。而另有研究[9-11]發(fā)現(xiàn)腹腔注射氯苯丙氨酸致失眠造模后大鼠下丘腦GABA下降，而治療后回升。目前，沒(méi)有學(xué)者對(duì)兩種不同的結(jié)果做出解釋，這可能與造模方法、睡眠剝奪的時(shí)間不同均有關(guān)。本研究采用水平臺(tái)法剝奪睡眠建立失眠模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)睡眠剝奪后不同腦區(qū)GABA含量變化存在差異。睡眠剝奪后腦干GABA含量升高、而下丘腦GABA含量下降。此外，腦干氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)門冬氨酸下降，而在海馬和下丘腦區(qū)域各氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)含量變化不顯著。該結(jié)果表示剝奪睡眠后大鼠神經(jīng)遞質(zhì)發(fā)生改變，證明造模成功有效。

3.2瀉肝安神法對(duì)大鼠腦內(nèi)氨基酸類遞質(zhì)的影響

本實(shí)驗(yàn)用睡眠剝奪方法造模，造模結(jié)束后連續(xù)灌胃給藥7天，結(jié)果表明瀉肝安神法治療后大鼠腦干門冬氨酸升高，下丘腦GABA含量升高，海馬的氨基酸遞質(zhì)無(wú)明顯變化。該結(jié)果證明瀉肝安神法可升高腦干內(nèi)門冬氨酸含量，升高下丘腦GABA含量，其療效機(jī)制可能與改變不同部位腦內(nèi)氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的含量有關(guān)。

GABA是腦內(nèi)主要的抑制性氨基酸類遞質(zhì)，對(duì)神經(jīng)元的活動(dòng)及相互聯(lián)系具有抑制性調(diào)控作用。Glu是腦內(nèi)主要的興奮性氨基酸類遞質(zhì)，對(duì)神經(jīng)元具有興奮性作用。Glu和GABA對(duì)于維持神經(jīng)細(xì)胞抑制與興奮功能平衡的穩(wěn)定具有極為重要的意義。近年來(lái)研究表明GABA的水平與人的心理、精神疾病關(guān)系密切。目前很多研究均認(rèn)為GABA能神經(jīng)元抑制丘腦皮層中繼神經(jīng)元，來(lái)降低皮層激活[12]，且GABA能神經(jīng)系統(tǒng)在褪黑素的催眠過(guò)程中起著重要的調(diào)節(jié)作用[13]。因此，常見催眠藥物和麻醉劑都是通過(guò)增強(qiáng)GABA介導(dǎo)的神經(jīng)傳遞來(lái)發(fā)揮作用的[14]。本研究西藥組選用地西泮片，是治療失眠的經(jīng)典藥物，屬苯二氮卓受體激動(dòng)劑，其作用機(jī)制是非選擇性拮抗γ-氨基丁酸復(fù)合受體，具有鎮(zhèn)靜、肌松、抗驚厥和抗焦慮的四重作用。而中藥組采用瀉肝安神湯干預(yù)，研究結(jié)果是后腦干及下丘腦GABA含量均升高，中西藥組之間沒(méi)有顯著差異，這提示了瀉肝安神法改善睡眠的療效作用機(jī)制可能與地西泮類似，也通過(guò)提高下丘腦及腦干GABA含量改善失眠，促進(jìn)發(fā)揮神經(jīng)抑制功能，但相比西藥組，瀉肝安神法對(duì)氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的整體影響較小。

中醫(yī)認(rèn)為肝主魂，不寐與肝臟密切相關(guān)?！恫∫蛎}治》曰：“肝火不得臥之因……陰火擾動(dòng)血室則夜臥不寧矣。”《普濟(jì)方》曰：“平人肝不受邪，故臥則魂歸于肝，神靜而得寐?！北狙芯坎捎脛儕Z睡眠方法造模一可致大鼠不得臥而耗傷陰血，二可造成部分應(yīng)激致大鼠郁怒不暢，接近臨床肝氣郁結(jié)證。本研究采用臨床經(jīng)驗(yàn)瀉肝安神法治療失眠癥，該方君藥選用柴胡、川芎、枳殼梳理肝氣，臣以香附、郁金、黃芪、茯苓輔助君藥理氣健脾，佐以梔子、丹皮、夏枯草瀉火，以當(dāng)歸、白芍養(yǎng)血，以首烏藤、酸棗仁及刺五加安神，炙甘草調(diào)和諸藥，以期標(biāo)本兼顧。在前期研究工作中發(fā)現(xiàn)疏肝瀉火養(yǎng)血安神法治療臨床肝郁化火型失眠癥有效，并對(duì)睡眠質(zhì)量及情緒均有改善作用[15]。而在本研究中通過(guò)與西藥地西泮片對(duì)比探索中藥方劑的療效機(jī)制，研究發(fā)現(xiàn)失眠是一種神經(jīng)節(jié)律失常性疾病，GABA能神經(jīng)系統(tǒng)與睡眠關(guān)系密切，本研究發(fā)現(xiàn)瀉肝安神法可使大鼠腦干門冬氨酸含量顯著升高，下丘腦GABA含量升高；而采用地西泮片治療后大鼠腦干區(qū)門冬氨酸升高，下丘腦門冬氨酸、GABA、甘氨酸、牛磺酸升高。提示其療效機(jī)制可能與改變不同部位腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)的含量有關(guān)，且在下丘腦的作用機(jī)制類似于地西泮片，但對(duì)于氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的影響靶點(diǎn)要少于西藥。

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(本文編輯：蒲曉田)

·論著·

作者單位：100102北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院[許涼涼(碩士研究生)、伊辛(碩士研究生)、魏文浩(碩士研究生)、尹雪雁(碩士研究生)]，研究生院(蔡程科)

Study on the method ofXieganAnshen’s effects on amino acid neurotransmitters of rats after sleep deprivationXINGJia,WANGJia-lin,HELi-juan,etal.NO.2DepartmentofEncephalopathy,DongfangHospitalofBeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100078,China

【Abstract】ObjectiveTo investigate the Xiegan Anshen intervention of contents of amino acid neurotransmitters in brainstem，hypothalamus and hippocampus of rats after sleep deprivation. Methods60 SD rats were randomly divided into 4 groups (each having 15 rats): normal control group, insomnia model group, Chinese medicine group and Western medicine group. Apart from the normal control group, other three groups of rats are repeatedly deprived of sleep for 7 times by using level station method, each lasting 24 hours. After modeling, rats of Chinese medicine group, western medicine group and insomnia model group were intragastrically administered with Xiegan Anshen Decoction, diazepam solution and pure water respectively. Rats then were killed 7 days after the intervention. HPLC method was used to detect 6 kinds of amino acid neurotransmitters in brainstem, hippocampus and hypothalamus regions. ResultsAfter sleep deprivation, the content of Aspartate in brainstem decreased significantly; the content of GABA in brainstem increased, and the content of GABA in hypothalamus decreased significantly. There were no significant changes in hippocampus. After treatment by Xiegan Anshen decoction, the content of Aspartate in brainstem was significantly increased, and the content of GABA in hypothalamus increased too. After treatment by Diazepam Tablets, the content of Aspartate in brainstem was significantly increased, and the contents of Aspartate, GABA, Glycine and Taurine in hypothalamus increased. ConclusionXiegan Anshen decoction can regulate the content of amino acid neurotransmitters of sleep deprivation rats, and the mechanism of action of Xiegan Anshen Decoction in hypothalamus is similar to Diazepam Tablets, but its effects on the targets are less effective than those of Diazepam Tablets.

【Key words】GABA;Xiegan Anshen Decoction;Water platform;Sleep Deprivation Rats;amino acid neurotransmitters

通訊作者：蔡程科(1971- )，博士，副教授。研究方向：中藥新劑型與新制劑。E-mail:cck98@126.com

作者簡(jiǎn)介：許涼涼(1989- )，2012級(jí)在讀碩士研究生。研究方向：中藥新劑型與新制劑。E-mail:18811502803@163.com

基金項(xiàng)目：北京中醫(yī)藥大學(xué)自主課題(2013-ZYY-01)；北京中醫(yī)藥大學(xué)科研創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(2011-CXTD-13)

(收稿日期：2014-08-08)

Corresponding author:XING Jia, E-mail:dfyyxingjia@163.com

【中圖分類號(hào)】R285.5

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

doi:10.3969/j.issn.1674-1749.2015.03.015