高效液相色譜法測(cè)定注射用頭孢他啶聚合物

劉映倩，吳群，羅立駿，唐倩

(1.重慶市食品藥品檢驗(yàn)所、重慶市藥物過程與質(zhì)量控制工程技術(shù)研究中心，重慶 401121；2.重慶醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，重慶 400030)

高效液相色譜法測(cè)定注射用頭孢他啶聚合物

劉映倩1，吳群1，羅立駿1，唐倩2

(1.重慶市食品藥品檢驗(yàn)所、重慶市藥物過程與質(zhì)量控制工程技術(shù)研究中心，重慶 401121；2.重慶醫(yī)藥高等專科學(xué)校，重慶 400030)

目的 建立高效液相色譜法測(cè)定注射用頭孢他啶聚合物的含量。方法 采用高效液相色譜法，色譜柱為TSK-GEL G2000SWXL凝膠色譜柱，流動(dòng)相為磷酸鹽緩沖液(pH7.0)0.005 mol·L-1磷酸氫二鈉溶液-0.005 mol·L-1磷酸二氫鈉溶液(61：39)，流速：0.8 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)231 nm，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量20 μL 。結(jié)果 頭孢他啶對(duì)照品檢測(cè)線性范圍為0.51～25.64 μg·mL-1(r=0.999)，注射用頭孢他啶聚合物檢測(cè)線性范圍為0.20～3.92 mg·mL-1(r=0.99)，聚合物定量限為0.71 μg。結(jié)論 該方法快速，分離度好，可用于注射用頭孢他啶聚合物的檢測(cè)。

注射用頭孢他啶；聚合物；色譜法，高效液相

頭孢他啶類藥物具有對(duì)革蘭陰性菌作用強(qiáng)，對(duì)銅綠假單胞菌作用突出的特點(diǎn)，臨床應(yīng)用非常廣泛。因藥物中存在的高分子雜質(zhì)與頭孢類抗生素藥物所致的速發(fā)型變態(tài)反應(yīng)有關(guān)，因此，決定變態(tài)反應(yīng)的關(guān)鍵質(zhì)量因素是高分子雜質(zhì)，藥品中含高分子雜質(zhì)越多，變態(tài)反應(yīng)發(fā)生率就越高[1]。筆者在本研究建立有效的測(cè)定方法，準(zhǔn)確測(cè)定多級(jí)聚合物，提高藥物的安全性和有效性。

1 儀器與試藥

Agilent 1260(美國(guó)Agilent公司)；頭孢他啶對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：130484-200803，含量：84.8%)；注射用頭孢他啶(重慶科瑞制藥股份有限公司，批號(hào)：130201，130202，130203；規(guī)格：0.5 g，1.0 g，2.0 g)；乙腈(色譜純)，其他試劑為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 色譜柱 TSK-GEL G2000SWXL凝膠色譜柱(7.8 mm×30 cm，5 μm)。

2.1.2 流動(dòng)相的選擇 A.磷酸鹽緩沖液(pH7.0)[0.005 mol·L-1磷酸氫二鈉溶液-0.005 mol·L-1磷酸二氫鈉溶液(61：39)]；B.磷酸鹽緩沖液(pH7.0)[0.005 mol·L-1磷酸氫二鈉溶液-0.005 mol·L-1磷酸二氫鈉溶液(61：39)]-乙腈(95：5)；C.以含3.5%硫酸銨的pH7.0的0.1 mol·L-1磷酸鹽緩沖液[0.1 mol·L-1磷酸氫二鈉溶液-0.1 mol·L-1磷酸二氫鈉溶液(61：39)]。實(shí)驗(yàn)表明：流動(dòng)相A和B中，頭孢他啶聚合物和單體能完全分離，均能檢測(cè)出兩個(gè)聚合物峰，流動(dòng)相A中兩個(gè)聚合物峰分離度為1.0，流動(dòng)相B中兩個(gè)聚合物峰分離度為0.8，流動(dòng)相C只能檢測(cè)出聚合物峰1個(gè)，其響應(yīng)值較低，見圖1。因此，采用流動(dòng)相A進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)。

2.1.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 通過二極管陣列檢測(cè)對(duì)頭孢他啶聚合物和單體進(jìn)行波譜掃描，頭孢他啶聚合物在231 nm處有較強(qiáng)吸收；分別在231，254，210 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其聚合物，在231 nm處聚合物峰面積最大，峰響應(yīng)值最大，其聚合物含量最高，故最終確定檢測(cè)波長(zhǎng)為231 nm。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 稱取頭孢他啶對(duì)照品約15 mg，精密稱定，置25 mL量瓶中，用水溶解并定容，精密量取1.0 mL，置100 mL量瓶中，用水定容。

2.3 供試品溶液的制備 稱取注射用頭孢他啶樣品約65 mg，置100 mL量瓶中，用水溶解并定容。

2.4 專屬性實(shí)驗(yàn) 取上述供試品溶液10.0 mL，置25 mL量瓶中，加入1 mol·L-1鹽酸溶液1 mL，放置5 min，用1 mol·L-1氫氧化鈉溶液1 mL中和；取上述供試品溶液10.0 mL，置25 mL量瓶中，加入1 mol·L-1氫氧化鈉溶液1 mL，放置5 min，用1 mol·L-1鹽酸溶液1 mL中和；取上述供試品溶液10.0 mL，置25 mL量瓶中，加入30%過氧化氫溶液2滴，放置5 min；取上述供試品溶液10.0 mL，置25 mL量瓶中，置水浴中放置5 min。吸取破壞后的各供試品溶液分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果表明：在酸、堿、氧化及熱破壞條件下，頭孢他啶均發(fā)生不同程度的降解，各破壞樣品中聚合物峰與單體峰均能良好分離，互不干擾，該色譜條件能滿足聚合物測(cè)定要求。見圖2。

2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取頭孢他啶對(duì)照品，加水溶解并稀釋成0.512 9，2.564 4，5.128 7，12.821 8，25.643 5 μg·mL-1濃度進(jìn)樣，記錄色譜峰面積，以濃度(C，μg·mL-1)對(duì)峰面積(A)進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程A=35.582 8+39.542 8C(r=0.999)。結(jié)果表明：頭孢他啶對(duì)照品在0.51～25.64 μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。精密吸取注射用頭孢他啶樣品，加水溶解并分別稀釋成0.195 8，0.489 4，0.978 8，1.957 7，3.915 3 mg·mL-1濃度進(jìn)樣，記錄色譜峰面積，以濃度(C，mg·mL-1)對(duì)峰面積(A)進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程為A=-19.386 0+158.65C(r=0.99)。結(jié)果表明：注射用頭孢他啶聚合物在0.20～3.92 mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

Fig.2 HPLC chromatogram of sample solution(A) and the solution destructed by base(B),acid(C),oxidation(D) and water bath(E)

2.6 精密度實(shí)驗(yàn) 取上述對(duì)照品溶液，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，結(jié)果以峰面積計(jì)算，其RSD=0.7%(n=6)，表明此方法精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取上述供試品溶液分別于0，0.5，1，2，4 h進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜峰面積。結(jié)果隨時(shí)間增加聚合物峰面積也逐漸增加，結(jié)果表明：供試品溶液不穩(wěn)定，應(yīng)臨用新配。

2.8 定量限 取上述供試品溶液適量，用水稀釋，當(dāng)信噪比為10(S/N=10)時(shí)，計(jì)算注射用頭孢拉定聚合物定量限為0.71 μg。

2.9 方法比較 按照《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版二部與現(xiàn)擬定方法測(cè)定注射用頭孢他啶聚合物的含量結(jié)果。見表1。

表1 兩種方法測(cè)定注射用頭孢他啶聚合物結(jié)果

3 討論

《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版二部測(cè)定注射用頭孢他啶聚合物，采用葡聚糖凝膠G-10(40～120 μm)作為高分子雜質(zhì)分離色譜系統(tǒng)的凝膠介質(zhì)，采用分子排阻色譜法進(jìn)行測(cè)定，其方法耗時(shí)長(zhǎng)，不能對(duì)頭孢他啶聚合物及單體進(jìn)行基線分離，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果不準(zhǔn)確。現(xiàn)擬定方法參照β-內(nèi)酰胺類抗生素的頭孢地嗪鈉有關(guān)物質(zhì)Ⅱ[2]，采用球狀蛋白色譜親水硅膠(相對(duì)分子質(zhì)量適用范圍為1 000～10 000)為填充劑的色譜柱，采用分子排阻色譜法進(jìn)行高分子雜質(zhì)的控制。該方法測(cè)定注射用頭孢他啶聚合物專屬性好，分析時(shí)間短，聚合物與單體之間能達(dá)到基線分離，能有效分離其聚合物，準(zhǔn)確測(cè)定出其聚合物的量。

本方法與《中華人民共和國(guó)藥典》方法采用的色譜柱不相同，所以不能以《中華人民共和國(guó)藥典》方法的判定結(jié)果認(rèn)為注射用頭孢他啶的聚合物含量不合格。采用G2000凝膠色譜柱測(cè)定聚合物的方法是目前聚合物檢測(cè)的一種新趨勢(shì)，目前申報(bào)的抗生素聚合物測(cè)定均采用此方法。如要制定此方法測(cè)定注射用頭孢他啶聚合物的含量限度，則需要收集市面上所有流通及生產(chǎn)的頭孢他啶原料及制劑進(jìn)行檢測(cè)，最終確定其聚合物含量限度。

[1] 黃肖民.頭孢菌素類抗生素高分子雜質(zhì)分析探討[J].科技創(chuàng)新與應(yīng)用，2013，(21)：50-51.

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：179.

DOI 10.3870/yydb.2015.06.027

Determination of Ceftazidime for Injection by HPLC

LIU Yingqian1, WU Qun1, LUO Lijun1,TANG Qian2

(1.ChongqingInstituteforFoodandDrugControl,ChongqingPharmaceuticalProcessandQualityControlEngineeringTechnologyResearchCenter,Chongqing401121,China； 2.ChongqingMedicalandPharmaceuticalCollege,Chongqing400030,China)

Objective To establish an HPLC method for the determination of ceftazidime for injection. Methods HPLC column was TSK-GEL G2000SWXL gel column.Mobile phase of phosphate buffer (pH 7.0) was 0.005 mol·L-1disodium hydrogen phosphate solution-0.005 mol·L-1sodium dihydrogen phosphate solution (61：39), the flow rate was 0.8 mL·min-1. The detection wavelength was 231 nm； column temperature was 30 ℃； the injection volume was 20 μL. Results Ceftazidime reference linear range was 0.51-25.64 μg·mL-1(r=0.999), ceftazidime for injection polymer linear range was 0.20-3.92 mg·mL-1(r=0.99), and the limit of quantification polymer was 0.71 μg. Conclusion The method is rapid and the separation was good.It can be used for the detection of ceftazidime for injection.

Ceftazidime for injection； Polymer； Chromatography，high performance liquid

2014-02-20

2014-05-02

劉映倩(1981-)，女，貴州赤水人，副主任藥師，學(xué)士，研究方向：藥物分析。電話：(0)13594057636，E-mail：wenling8081@sina.com。

唐倩(1979-)，女，四川廣安人，副教授，碩士，研究方向：藥物分析。電話：(0)18680866274，E-mail：qiantang60460@163.com。

R978.11；R927.2

B

1004-0781(2015)06-0802-03