中藥對(duì)腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子調(diào)節(jié)作用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展*

顧力華，魏丹霞，陳 斌

(昆明市中醫(yī)醫(yī)院，云南 昆明 650011)

中藥對(duì)腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子調(diào)節(jié)作用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展*

顧力華，魏丹霞，陳 斌

(昆明市中醫(yī)醫(yī)院，云南 昆明 650011)

腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子及其受體酪氨酸激酶B在腦梗死后神經(jīng)損傷的修復(fù)中起著重要作用，它能促進(jìn)神經(jīng)元的存活和生長(zhǎng)發(fā)育，提高其生物活性，減少損傷后神經(jīng)元的自然死亡，還能促進(jìn)突觸的可塑性等多種神經(jīng)保護(hù)及修復(fù)功能。其可能是中藥治療腦梗死重要靶點(diǎn)之一，具有潛在應(yīng)用前景。

中藥；腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；綜述

腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子(brain-derived neurotrophin factor，BDNF)及其受體酪氨酸激酶B(Tyrosine kinase B，TrkB)在腦梗死后損傷修復(fù)中的作用已逐漸得到肯定。中藥通過(guò)多靶點(diǎn)治療腦梗死，而BDNF及其受體TrkB是否是其作用靶點(diǎn)之一？還未有明確的結(jié)論，目前，許多學(xué)者采用大鼠大腦中動(dòng)脈線栓法(MCAO)建立腦缺血模型，應(yīng)用中藥對(duì)其進(jìn)行干預(yù)，并觀察BDNF或其受體TrkB變化，以期尋求答案，現(xiàn)就此作一綜述。

1 BDNF及其受體TrkB在腦梗死康復(fù)中的作用

BDNF是神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素家族的重要一員，在腦內(nèi)廣泛分布，尤以海馬和皮層含量最高[1]。BDNF能促進(jìn)多種神經(jīng)元的存活和生長(zhǎng)發(fā)育，可提高神經(jīng)元的生物活性，減少損傷后神經(jīng)元的自然死亡，還能促進(jìn)突觸的可塑性，改變腦內(nèi)神經(jīng)元的形態(tài)，增加突觸終末的密度和促進(jìn)樹突和軸突的生長(zhǎng)。BDNF發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)主要有賴于和其特異性受體TrkB的結(jié)合[2～4]。BDNF在海馬、大腦皮質(zhì)的神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)合成、分泌，經(jīng)逆行運(yùn)輸?shù)交浊澳X膽堿能神經(jīng)元的胞體，然后作用于膽堿能投射纖維終末的受體TrkB，形成配體-受體復(fù)合物，后者迅速激活酪氨酸激酶型受體[5]。當(dāng)BDNF與TrkB結(jié)合后，受體細(xì)胞外區(qū)構(gòu)象變化，使受體細(xì)胞內(nèi)區(qū)的酪氨酸激酶活性增強(qiáng)。其作用途徑，首先可通過(guò)提高神經(jīng)元表面的BDNF受體TrkB的表達(dá)，對(duì)神經(jīng)元產(chǎn)生生物效應(yīng)；還可以通過(guò)活化BDNF受體TrkB，在細(xì)胞內(nèi)阻斷損傷因子的作用[6，7]。從而保護(hù)神經(jīng)元免受缺血性損傷，縮小梗死體積，且促進(jìn)損傷后神經(jīng)組織的修復(fù)，減輕和改善患者癥狀。

2 中藥對(duì)BDNF的影響

國(guó)內(nèi)學(xué)者在中藥治療腦梗死對(duì)BDNF的影響方面做了有益的探索。如王發(fā)渭等[8]發(fā)現(xiàn)與缺血性腦損傷模型組大鼠比較，參龍健腦膠囊組大鼠海馬區(qū)BDNF、TrkB陽(yáng)性表達(dá)增加(P<0.01)，表明：其神經(jīng)功能恢復(fù)機(jī)制可能與促進(jìn)BDNF和TrkB表達(dá)密切相關(guān)。劉燕妮等[9]發(fā)現(xiàn)給藥組缺血性腦卒中的動(dòng)物模型BDNF表達(dá)有明顯差異(P<0.05)，表明：補(bǔ)益肝腎中藥能保護(hù)和改善缺血性腦卒中，對(duì)神經(jīng)再生有促進(jìn)作用。付燕燕等[10]發(fā)現(xiàn)氧化苦參堿中、高劑量組缺血再灌注大鼠模型神經(jīng)學(xué)評(píng)分均減低，BDNF陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)以及BDNF和其受體TrkB蛋白表達(dá)顯著增加(P<0.05，P<0.01)。表明：氧化苦參堿對(duì)腦缺血再灌注損傷的恢復(fù)機(jī)制可能與上調(diào)BDNF及受體TrkB的表達(dá)有關(guān)。許蓓等[11]發(fā)現(xiàn)：葛根素組7天齡腦缺血大鼠BDNF表達(dá)水平高于對(duì)照組(P<0.05)，表明：葛根素能減輕缺氧缺血引起的腦組織損傷可能和其增加海馬區(qū)BDNF的表達(dá)有關(guān)。李志華等[12]發(fā)現(xiàn)燈盞花素干預(yù)組缺血-再灌注模型BDNF mRNA表達(dá)較對(duì)照組明顯增加。表明：燈盞花素具有較明顯的清除自由基作用，但對(duì)缺血后腦皮層BDNF蛋白的表達(dá)無(wú)顯著影響。尹艷艷等[13]發(fā)現(xiàn)黃芪總苷可以明顯降低局灶性腦缺血模型大鼠神經(jīng)功能評(píng)分；提高腦組織中BDNF mRNA的表達(dá)；降低腦組織中p75NTR mRNA的表達(dá)，提高TrkB mRNA表達(dá)。表明：黃芪總苷對(duì)神經(jīng)功能恢復(fù)機(jī)制可能與促進(jìn)BDNF和TrkB mRNA表達(dá)、抑制p75NTR mRNA的表達(dá)有關(guān)。閆妍等[14]發(fā)現(xiàn)腦脈安膠囊各劑量組及西藥組皮層區(qū)神經(jīng)細(xì)胞水腫減輕，BDNF mRNA擴(kuò)增產(chǎn)物相對(duì)光密度均較缺血24h局灶性腦缺血大鼠模型組明顯升高(P<0.01)。結(jié)果表明：腦脈安膠囊通過(guò)上調(diào)腦源性神經(jīng)因子BDNF，使受損的神經(jīng)功能得到恢復(fù)。劉萬(wàn)里等[15]采用大鼠大腦中動(dòng)脈線栓法(MCAO)建立腦缺血模型，在造模結(jié)束后給予加減補(bǔ)陽(yáng)還五湯濃縮液，分別在缺血12，24、48 h，采用免疫組化方法觀察BDNF及NGF在不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)，結(jié)果表明：與假手術(shù)組相比，模型組及治療組大鼠BDNF及NGF的表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)均增強(qiáng)，以缺血48 h增強(qiáng)最為顯著，且治療組大鼠比模型組大鼠表達(dá)增強(qiáng)更顯著。結(jié)論顯示：腦缺血后神經(jīng)元內(nèi)BDNF和NGF的含量增多，有利于受損神經(jīng)元的恢復(fù)。加減補(bǔ)陽(yáng)還五湯可能通過(guò)促進(jìn)BDNF、NGF的表達(dá)而保護(hù)神經(jīng)元。賈軍樂(lè)等[16]采用線栓法制備大腦中動(dòng)脈梗阻(MCAO)模型，藥物組在腦缺血再灌注即刻和12h腹腔注射天麻素，分別在缺血再灌注 2h、4h、6h、12h 和 24h處死動(dòng)物，運(yùn)用 RT-PCR 技術(shù)檢測(cè)缺血側(cè)海馬組織內(nèi) BDNF 和 TrkB 的 mRNA 的表達(dá)變化。結(jié)果表明再灌注損傷后，損傷側(cè)海馬組織內(nèi) BDNF 和 TrkB 的 mRNA 表達(dá)均增高。在天麻素治療組中 BDNF 和 TrkB 的 mRNA于再灌注2h上升，4h達(dá)高峰。結(jié)論顯示：腦缺血后損傷側(cè)海馬神經(jīng)元內(nèi) BDNF 和 TrkB 的 mRNA 含量增多，可能有利于受損神經(jīng)元的修復(fù)。周弋人等[17]建立大鼠大腦中動(dòng)脈局灶缺血/再灌注梗死(MCAO)模型后，采用短期給藥：燈盞細(xì)辛 2.7 mL/kg，共 7d，長(zhǎng)期給藥：燈盞細(xì)辛2.7 mL/kg，共28d，4 周末處死作 BDNF、TrkB 免疫組化。結(jié)果表明：2個(gè)給藥組BDNF 和 TrkB 的IOD值均高于 MCAO 模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且長(zhǎng)期給藥組 BDNF 和 TrkB IOD 值高于短期給藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論顯示：燈盞細(xì)辛可誘導(dǎo)腦梗死后 BDNF 及其高親和性受體 TrkB 表達(dá)上調(diào)，這可能是燈盞細(xì)辛對(duì)腦梗死恢復(fù)期保護(hù)作用的機(jī)制之一。馬建鵬等[18]采用MCAO模型，給予不同劑量康腦液灌胃給藥，共 7d，分別于再灌注后 6 h、12 h、24 h、72 h、7 d 處死大鼠。采用 TTC 染色法觀察大鼠的腦梗死面積；免疫組織化學(xué)法觀察大鼠腦組織 VEGF、BDNF、MMP-9 的表達(dá)。結(jié)果：比較各組缺血再灌注 24 h大鼠腦梗死灶面積，發(fā)現(xiàn) 28.6、14.3 g·kg-1·d-1劑量組較腦缺血再灌注模型組明顯減小(P<0.05)；與腦缺血再灌注模型組相比，28.6、14.3 g·kg--1·d-1劑量組各時(shí)間點(diǎn)的 VEGF、BDNF 表達(dá)量明顯上調(diào)(P<0.01)，MMP-9 表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞明顯減少(P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論顯示康腦液可促進(jìn)大鼠局灶性腦缺血后腦組織中 VEGF，BDNF 的表達(dá)，同時(shí)抑制腦內(nèi) MMP-9 的表達(dá)，縮小腦梗死面積，發(fā)揮對(duì)神經(jīng)血管單元的保護(hù)作用，減輕腦缺血再灌注損傷。

3 小結(jié)

綜上所述，現(xiàn)研究表明中藥治療腦梗死，BDNF及受體TrkB可能是其治療的重要靶點(diǎn)之一。但多數(shù)研究樣本含量少、研究時(shí)間較短，缺乏大樣本的循證醫(yī)學(xué)的研究成果。因此，今后采用更大樣本，更科學(xué)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案，以提供更高級(jí)別的循證醫(yī)學(xué)證據(jù)，從而更好地指導(dǎo)臨床，顯得尤為重要。

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昆明市科技局社會(huì)科技事業(yè)發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(NO：2013-04-01-A-S-01-0003)；全國(guó)名老中醫(yī)藥專家傳承工作室建設(shè)項(xiàng)目(國(guó)中醫(yī)藥人教函[2012]149號(hào))。

顧力華(1971-)，男，漢族，云南昆明市人，碩士學(xué)位，副主任醫(yī)師，主要研究方向：腦卒中康復(fù)。

E-mail：kmglh169@163.com

R28

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1007-2349(2015)12-0087-02

2015-10-29)