漢防己甲素對急性切口痛大鼠的鎮(zhèn)痛作用研究

阮林+黃煥森+金文香+許陽英+朱卓麗+李莉+連肖強

[摘要] 目的 探討漢防己甲素對急性切口痛大鼠模型的鎮(zhèn)痛作用。 方法 選擇急性切口痛模型作為研究對象，將SD雄性大鼠30只隨機分為急性疼痛組和漢防己甲素組，在術前1 d至術后6 d分別進行疼痛累積評分、熱和機械痛閾測定。 結果 從切開后2 h～6 d急性疼痛模型組的熱縮足反射潛伏期均顯著低于基礎值，但漢防己甲素組只有術后2 h～3 d熱縮足反射潛伏期顯著低于基礎值（P<0.05），而且漢防己甲素組的熱縮足反射潛伏期從切開后2 h～6 d均顯著高于急性疼痛模型組（P<0.05）。急性疼痛模型組和漢防己甲素組的50%縮足閾值在術后2 h～6 d均顯著低于基礎值（P<0.05），兩組間基礎閾值差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），但從切開后2 h～5 d，漢防己甲素組的50%縮足閾值顯著高于急性疼痛模型組（P<0.05），術后6 d差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。急性疼痛模型組及漢防己甲素組的疼痛累積評分在切開后均較基礎值顯著增加（P<0.05），兩組間基礎值差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），但術后漢防己甲素組的評分低于對照組，第5、6天差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。 結論 漢防己甲素可緩解急性疼痛模型的靜息痛、熱及機械刺激的誘發(fā)痛，有希望成為新的術后鎮(zhèn)痛方法。

[關鍵詞] 漢防己甲素；鎮(zhèn)痛；急性疼痛；痛閾

[中圖分類號] R285 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2014）12（c）-0011-04

雖然圍術期疼痛治療有較大發(fā)展，但因為區(qū)域阻滯學應用受限、阿片類藥物副作用及痛覺過敏等因素，仍有患者術后要忍受中到重度的疼痛[1-3]。術后疼痛的發(fā)生率在常見手術如腦科手術、胸科手術、截肢術等仍較高[4-6]，因此術后疼痛治療仍是一個研究熱點，有必要研究開發(fā)新的疼痛治療藥物。漢防己甲素（Tetrandrine，Tet）是從防己科植物粉防己中提取出的一種雙芐基異喹啉類生物堿，具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤等多種藥理作用[7-10]。由于漢防己甲素具有非常廣泛的藥理作用以及可有效抑制多種急慢性炎癥，故在疼痛治療方面具有廣闊的應用前景。因此本項研究擬在足底切口痛模型大鼠注射漢防己甲素，測定大鼠的誘發(fā)及自發(fā)性疼痛行為評估漢防己甲素對術后疼痛的鎮(zhèn)痛效應，了解其應用于術后疼痛治療的可行性。

1 資料與方法

1.1 實驗動物

成年雄性SD大鼠（8～10周，體重200～250 g），由廣東省實驗動物中心提供。動物實驗遵循廣州醫(yī)科大學動物倫理要求，每12小時標準喂食1次，隨意飲水，控制室溫為25℃左右。

1.2 實驗分組

將30只大鼠隨機分為急性疼痛模型組和漢防己甲素組，每組15只，進入行為學測量。急性疼痛模型組接受左足底切開手術，切開足底前腹腔注射生理鹽水50 μl。漢防己甲素組也接受左足底切開手術，切開足底前腹腔注射漢防己甲素（30 mg/kg體重，HPLC純度≥98%，上海阿拉丁試劑公司）。大鼠隨后分別接受熱痛閾、機械痛閾測定及疼痛累計評分。

1.3 模型建立

在大鼠放入透明誘導箱后予3%異氟醚吸入誘導下，入睡后取出經鼻罩給予1.5%異氟醚吸入維持，氧流量0.3 L/min。酒精消毒大鼠左足跖面，從足跟部邊緣0.5 cm處向前作長為1 cm的縱向切口，切透皮膚、筋膜及跖肌，隨后用5-0抗菌可吸收縫線縫合皮膚兩針，按壓止血及清潔傷口消毒，建立急性大鼠足底切口痛模型。

1.4 熱縮足反射潛伏期

利用熱刺痛儀的輻射熱源照射切口旁0.5 mm，記錄從照射開始到熱縮足反應的時間，間隔5 min重復3次，取平均值記錄為熱縮足反射潛伏期，通過測定后足對熱傷害刺激的回縮反應潛伏期來評估熱痛閾。

1.5 機械痛閾測定

先使大鼠預適應測試籠2 d后測定基礎值。采用up-down法和應用10支von Frey絲（0.6～26.0 g，Stoelting 58011，美國）測定大鼠機械性縮足閾值，并計算50%縮足閾值，計算公式為50%縮足閾值=（10[Xf+kδ]）/10000，其中Xf為最后一支von Frey絲的壓力值；k為陽性/陰性反應組合相對應的查表值，δ為所用刺激間的平均差值。當基礎閾值>20后可在次日建立急性足底切口痛大鼠模型分別在術前1 d和術后2 h、1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d接受機械痛閾測定。

1.6 疼痛累計評分

將大鼠置于底為1 cm×1 cm網格的透明塑料籠內，觀察大鼠切開足。根據(jù)切開足承重情況給予0、1、2分：若完全負重且網格使傷口變白或扭曲則為0分；若傷口觸及網格但傷口未變白或扭曲則為1分；若足部完全離開網格則為2分。給予20 min適應期后，每次觀察時間為1 min，之后間隔5 min重復一次，連續(xù)觀察1 h，累加得出疼痛累計評分（0～24分）。

1.7 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件（SPSS Inc，USA）進行數(shù)據(jù)分析。計量資料用均數(shù)±標準差（x±s）表示，所有行為學測試結果均采用非參數(shù)檢驗進行分析，同一組大鼠不同測試時間點的數(shù)據(jù)先用Friedman ANONA檢驗差異，然后再用配對秩和檢驗（Wilcoxon matched pairs test）分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 漢防己甲素對急性切口痛大鼠模型熱痛閾的影響

每組術前1 d測定值為基礎值，從切開后2 h～6 d急性疼痛模型組的熱縮足反射潛伏期均顯著低于基礎值，但漢防己甲素組只有術后2 h～3 d熱縮足反射潛伏期顯著低于基礎值（P<0.05），而且漢防己甲素組的熱縮足反射潛伏期從切開后2 h～6 d均顯著高于急性疼痛模型組（P<0.05），即漢防己甲素提高了切口痛大鼠的熱痛閾（表1）。

2.2 漢防己甲素對急性切口痛大鼠模型機械痛閾的影響

急性疼痛模型組和漢防己甲素組的50%縮足閾值在術后2 h～6 d均顯著低于基礎值（P<0.05），兩組間基礎閾值差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），但從切開后2 h～5 d，漢防己甲素組的50%縮足閾值顯著高于急性疼痛模型組（P<0.05），術后6 d差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），即漢防己甲素提高了切口痛大鼠的機械痛閾（表2）。

2.3 漢防己甲素對急性切口痛大鼠模型的疼痛累積評分的影響

急性疼痛模型組及漢防己甲素組的疼痛累積評分在切開后均較基礎值顯著增加（P<0.05），兩組間基礎值差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），但術后漢防己甲素組的評分低于對照組，第5、6天差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），即漢防己甲素降低了切口痛大鼠的疼痛累積評分（表3）。

3 討論

術后疼痛是機體受到手術傷害刺激組織損傷后發(fā)生的包括生理、心理和行為上的一系列反應。近年來，圍術期鎮(zhèn)痛得到麻醉和外科界的高度重視，主張將手術后疼痛作為“第五生命體征”，與血壓、心率、呼吸、體溫等生命體征同等對待并給予及時治療[10-14]。本實驗預先建立一種大鼠急性術后疼痛模型，它是由Brennan于1996年建立的左足切口痛模型，被證明能良好地反映臨床術后疼痛[15-16]。與靜息痛相關的疼痛累積評分能反映疼痛通路的持續(xù)活動，而熱痛閾、機械痛閾則可反映皮膚的敏感性，本研究比較了足底切口痛模型大鼠鞘內應用漢防己甲素與否的疼痛累積評分、熱痛閾以及機械性痛閾，發(fā)現(xiàn)漢防己甲素可同時改善靜息痛及誘發(fā)痛，提示給予漢防己甲素是一個有效的術后疼痛治療藥物。

漢防己甲素是植物防己科粉防己的主要活性成分，化學結構為雙芐基異喹啉類化合物，具有鎮(zhèn)痛、抗炎、降血壓、抗脂質過氧化、逆轉心臟和血管的重塑、防止細胞受損、改善微循環(huán)及Ca2+拮抗作用[17]。既往關于漢防己甲素的研究主要是用于治療風濕痛、關節(jié)痛、神經痛，這些均是慢性疼痛，但漢防己甲素是否作用于急性疼痛，目前尚未見報道，其機制尚缺少研究。因此根據(jù)這部分實驗結果，認為漢防己甲素也可用于急性疼痛治療，并且可用于急性圍術期疼痛，可能是與漢防己甲素的抗氧化應激作用有關，正在進行下一步研究。

總之，在足底切口痛模型大鼠，漢防己甲素可改善大鼠術后的疼痛行為、減輕熱刺激及機械性刺激引起的痛覺過敏，有望成為新的術后急性疼痛治療藥物之一。

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（收稿日期：2014-09-18 本文編輯：郭靜娟）