■袁燕平 姚亞軍 倪自利 黎 勇
(長(zhǎng)沙興嘉生物工程股份有限公司技術(shù)中心)
硒是飼料里必需添加的一種重要微量元素,參與動(dòng)物體內(nèi)蛋白質(zhì)、氨基酸、核酸、脂肪、碳水化合物和維生素以及微量元素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝,在提高動(dòng)物免疫力、生產(chǎn)性能及改善肉品質(zhì)方面也有重要的作用。目前飼料中硒的檢測(cè)基本依照國(guó)標(biāo)方法GB/T13883-2008中的氫化物原子熒光光譜法(仲裁法)進(jìn)行,興嘉生物技術(shù)中心經(jīng)過(guò)多年的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)卻發(fā)現(xiàn),此方法中的處理方式主要針對(duì)配合飼料樣品,而針對(duì)于復(fù)合多礦的檢測(cè),還需在此基礎(chǔ)上做出諸多改進(jìn),才能使操作方便,結(jié)果準(zhǔn)確。
本文旨在將本實(shí)驗(yàn)室所總結(jié)出來(lái)的改進(jìn)經(jīng)驗(yàn)分享給同行,希望對(duì)大家有幫助。
硒原始標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 000 μg/ml,有國(guó)家證書(shū)),硝酸(優(yōu)級(jí)純),高氯酸(優(yōu)級(jí)純),鹽酸(優(yōu)級(jí)純),氫氧化鈉(優(yōu)級(jí)純),鐵氰化鉀等(優(yōu)級(jí)純),氬氣(99.9%)。
硒標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:準(zhǔn)確移取1 ml硒原始標(biāo)準(zhǔn)溶液于100 ml,用水稀釋至刻度,此標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度為10 μg/ml。
硒標(biāo)準(zhǔn)工作液:準(zhǔn)確移取5 ml硒標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于50 ml,用水稀釋至刻度,此標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度為1 μg/ml,現(xiàn)用現(xiàn)配。
混合酸溶液:硝酸+高氯酸=4+1。
5%鹽酸溶液:鹽酸+水=5+95。
200 g/l鐵氰化鉀:稱取20.0 g鐵氰化鉀,溶于100 ml水中,搖勻。
20 g/l硼氫化鈉溶液:稱取20.0 g硼氫化鈉,溶于氫氧化鈉中(5 g/l)中,定容至1 L。
結(jié)合相關(guān)產(chǎn)品開(kāi)發(fā)企業(yè),也可結(jié)合飛豬、攜程等旅游平臺(tái),實(shí)現(xiàn)不同產(chǎn)業(yè)資源的平臺(tái)數(shù)據(jù)信息互通,讓有趣的AR成為消費(fèi)者進(jìn)入各個(gè)商店的入口,同時(shí)也給消費(fèi)者帶來(lái)便利和愉快的體驗(yàn)[7]。
AR2140電子分析天平(感量為0.000 1 g),原子熒光分光光度計(jì)(北京吉天,AFS-8230),DL-1電爐。
1.2.1 樣品處理
稱取試樣0.25 g,準(zhǔn)確到0.000 2 g,置于100 ml高型燒杯中,加8 ml混合酸,蓋上表面皿于電爐上加熱,當(dāng)溶液高氯酸冒煙時(shí),再繼續(xù)加熱至溶液不再產(chǎn)生棕色氣體。冷卻,再加2.5 ml鹽酸,用水吹洗表面皿和杯壁,繼續(xù)加熱微沸約5 min即可,冷卻,移入50 ml容量瓶,用水稀釋至刻度,搖勻,作為試樣消化液。根據(jù)實(shí)際情況將此試樣消化液稀釋至含硒0.02~0.05 μg/ml,并且需加入5%鹽酸(體積比)和4%(體積比)200 g/l鐵氰化鉀溶液。
1.2.2 儀器參考條件
光電倍增管負(fù)高壓:260 V,硒空心陰極燈電流:60 mA,原子化溫度:800℃,爐高:8 mm,載氣流速:300 ml/min,屏蔽氣流速:800 ml/min;載液:5%鹽酸溶液;測(cè)量方式:標(biāo)準(zhǔn)曲線法;讀數(shù)方式:峰面積;延遲時(shí)間:1 s;讀數(shù)時(shí)間:15 s;加液時(shí)間:8 s;進(jìn)樣體積:2 ml。
1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線
分別準(zhǔn)確移取0.0、0.25、0.50、1.00、2.00、3.00 ml標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液2于50 ml容量瓶中,加入10 ml水,加入2.5 ml鹽酸,加2 ml鐵氰化鉀溶液,用水稀釋至刻度,搖勻。
1.2.4 改進(jìn)方法與國(guó)標(biāo)法對(duì)比(見(jiàn)表1)
表1 改進(jìn)方法與國(guó)標(biāo)法對(duì)比
1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線
在硒標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與熒光值之間繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線,結(jié)果顯示,在硒濃度為0~0.060 μg/ml范圍內(nèi),硒的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與其熒光值之間存在良好的線性關(guān)系,所得結(jié)果見(jiàn)表2。
表2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性關(guān)系
1.3.2 精密度
按照1.2節(jié)中所述方法對(duì)3個(gè)不同多礦樣品分別進(jìn)行3次平行檢測(cè),實(shí)驗(yàn)結(jié)果列于表3。結(jié)果表明該方法能將多礦中硒檢測(cè)出來(lái),且平行樣極差相對(duì)值和變異系數(shù)均在5%以下,說(shuō)明用此方法檢測(cè)多礦樣品中的硒,平行性和精密度較好。
表3 精密度實(shí)驗(yàn)
1.3.3 重復(fù)性
按照1.2中所述方法,兩個(gè)月內(nèi)不同時(shí)間對(duì)這3個(gè)多礦分別進(jìn)行3次檢測(cè),結(jié)果列于表4。兩個(gè)月內(nèi)測(cè)得結(jié)果的極差相對(duì)值最高只有4.98%,變異系數(shù)在3%以下,說(shuō)明用此方法檢測(cè)多礦樣品中的硒,穩(wěn)定性良好。
表4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)
1.3.4 回收率
在多礦樣品中加入硒標(biāo)液,按照1.2節(jié)中所述方法,進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn),所得結(jié)果列于表5。由表5可看出,最小回收率為95.11%,最大回收率為104.40%,說(shuō)明該方法可靠,準(zhǔn)確性高,可以滿足檢測(cè)要求。
表5 回收率實(shí)驗(yàn)
1.3.5 與2,3-二氨基奈熒光法對(duì)比
實(shí)驗(yàn)小組亦將本實(shí)驗(yàn)中的3個(gè)樣送到某外檢機(jī)構(gòu),其采用2,3-二氨基奈熒光法進(jìn)行了檢測(cè),所得結(jié)果列于表6。由數(shù)據(jù)可知,2,3-二氨基奈熒光法所得結(jié)果重復(fù)性相當(dāng)差,方法不穩(wěn)定,所得結(jié)果不可靠?;诖朔N情況,建議采用氫化物原子熒光光譜法檢測(cè)飼料中的硒(即國(guó)標(biāo)中的仲裁法),如果針對(duì)符合多礦,則可以采用本文中的條件進(jìn)行檢測(cè)。
表6 2,3-二氨基奈熒光法重復(fù)性
①對(duì)國(guó)標(biāo)中氫化物原子熒光光譜法的各個(gè)條件進(jìn)行優(yōu)化后,此方法更加適合復(fù)合多礦的檢測(cè),不僅可得到良好的精密度和準(zhǔn)確度,結(jié)果穩(wěn)定可靠,操作也更加方便簡(jiǎn)單。
② 2,3-二氨基奈熒光法重復(fù)性很差,操作得不好,很容易導(dǎo)致較大誤差,所以不推薦采用。
③建議飼料同行在檢測(cè)復(fù)合多礦原料時(shí),采用此方法。