玫瑰天竺葵組培快繁技術(shù)體系的建立

鞠玉棟+楊敏+吳維堅(jiān)+李珊珊

摘 ?要：以玫瑰天竺葵莖段為外植體材料，研究其組培快繁技術(shù)體系。結(jié)果表明：初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基以MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L為宜;繼代培養(yǎng)基以MS+BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L為宜，芽增殖倍數(shù)為5.8;生根培養(yǎng)基以1/2MS+IBAA0.6mg/L為宜，生根率達(dá)97.5%以上，平均生根數(shù)13.8條;移栽基質(zhì)以泥炭土∶珍珠巖=3∶1為宜，成活率達(dá)98.3%。

關(guān)鍵詞：玫瑰天竺葵;莖段;組織培養(yǎng)

中圖分類號(hào) S682 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A ?文章編號(hào) 1007-7731（2015）01-26-03

Establishment of Tissue Culture and Rapid Propagation System of Pelargonium roseu

Ju Yudong et al.

（Sugarcane Research Institute Fujian Academy of Agriculture Sciences，Zhangzhou 363005，China）

Abstract：The tissue culture and rapid propagation system of Pelargonium roseu is studied using stems as explants in this paper. The results showed that the suitable shoot-inducing medium was MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，with inducement rate up to 96.7%.The suitable shoots multiplication culture medium was MS+BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L，with multiplication coefficient of 5.8.The suitable rooting culture medium was 1/2MS+IBAA0.6mg/L，with rooting rate up to 97.5%，in which average number of roots was 13.8. The suitable transplant medium was peat soil∶perlite （V/V）=3∶1，with survival rate up to 98.3%。

Key words：Pelargonium roseu;Stem;Tissue culture

玫瑰天竺葵（Pelargonium roseu）屬牻牛兒苗科天竺葵屬多年生草本植物，原產(chǎn)于南非。其莖葉可提取具有玫瑰香氣的芳香精油，廣泛用于香皂、香水等日化產(chǎn)品以及芳療保健等，具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值[1-2]。因其不易結(jié)實(shí)，且自然雜交易導(dǎo)致種性混雜，因此生產(chǎn)上一般采用扦插繁殖方式繁育種苗。近年來，隨著植物組培技術(shù)的迅速發(fā)展，采用組培快繁技術(shù)繁育種苗具有繁殖速度快、生長(zhǎng)整齊、成本低等優(yōu)點(diǎn)，因而被廣泛應(yīng)用于經(jīng)濟(jì)植物的種苗快繁[3]。關(guān)于天竺葵類植物的組培報(bào)道已經(jīng)很多[4-7]，而玫瑰天竺葵組培研究的相關(guān)報(bào)道還較少。為此，本研究以玫瑰天竺葵莖段為試驗(yàn)材料，探索促進(jìn)其莖段叢生芽分化、生根及移栽的方法，為今后大規(guī)?？焖偕a(chǎn)玫瑰天竺葵組培苗提供理論和實(shí)踐依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 玫瑰天竺葵，由福建省農(nóng)科院甘蔗研究所芳香植物研究中心提供。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 外植體的選取及消毒 選擇健壯無病蟲害植株，切取莖段，去掉葉片，將莖段先用自來水沖洗干凈，在超凈工作臺(tái)上用70%的酒精浸泡20s，再用0.1%升汞消毒8min，無菌水沖洗4～6次備用。

1.2.2 叢生芽的誘導(dǎo) 采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，將消毒后莖段接種于添加不同濃度6-BA的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，每處理接種30個(gè)莖段，重復(fù)3次。25d后觀察并統(tǒng)計(jì)叢生芽分化的情況。

1.2.3 叢生芽的繼代培養(yǎng) 采用單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，將初代培養(yǎng)得到的叢生芽接種于添加不同濃度6-BA和NAA的繼代培養(yǎng)基上，每處理接種30株，重復(fù)3次。25d后觀察不同激素濃度對(duì)芽苗增殖和質(zhì)量的影響。

1.2.4 試管苗生根 將生長(zhǎng)健壯的試管苗轉(zhuǎn)入不同處理的生根培養(yǎng)基中，每處理接種40株，重復(fù)3次，25d后觀察并統(tǒng)計(jì)生根情況。

1.2.5 培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件 誘導(dǎo)和增殖以MS為基本培養(yǎng)基，附加不同種類和濃度的激素，蔗糖30g/L，瓊脂0.5%，pH5.8;促根以1/2MS為基本培養(yǎng)基，附加不同種類和濃度的激素，蔗糖20g/L，瓊脂0.5%，pH5.8。培養(yǎng)溫度26～28℃，光照強(qiáng)度2 000～2 500lx，光照時(shí)間10～12h/d。

1.2.6 組培苗的煉苗與移栽 生根培養(yǎng)30d后轉(zhuǎn)移至室溫自然光下煉苗7d，打開瓶蓋小心取出生根苗，洗凈基部培養(yǎng)基，將其移栽至不同處理基質(zhì)上保濕培養(yǎng)（相對(duì)濕度控制在80%～90%）。溫度控制在20℃左右，避免強(qiáng)光照射。每處理40株，重復(fù)3次，30d后統(tǒng)計(jì)成活率。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同誘導(dǎo)培養(yǎng)基對(duì)外植體芽誘導(dǎo)的影響 將玫瑰天竺葵莖段接種到不同誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，4d后莖段上腋芽開始萌發(fā)，25d后調(diào)查誘導(dǎo)率和腋芽萌發(fā)情況（結(jié)果見表1）。從表1可以看出，不同誘導(dǎo)處理的培養(yǎng)基均可誘導(dǎo)腋芽萌發(fā)，但未添加激素的培養(yǎng)基芽啟動(dòng)慢，誘導(dǎo)率較低，隨著6-BA濃度增加誘導(dǎo)率逐漸上升，隨后逐漸下降，且6-BA過高時(shí)誘導(dǎo)芽有玻璃化產(chǎn)生，因此，誘導(dǎo)培養(yǎng)基以MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L為最佳，誘導(dǎo)快，芽粗壯。

表1 不同誘導(dǎo)培養(yǎng)基對(duì)外植體芽誘導(dǎo)的影響

[培養(yǎng)基

（mg/L）＼&外殖體數(shù)（個(gè)）＼&萌芽數(shù)（株）＼&誘導(dǎo)率

（%）＼&腋芽萌發(fā)狀況＼&MS＼&90＼&60＼&66.7＼&芽可萌動(dòng)，生長(zhǎng)緩慢，誘導(dǎo)率低＼&MS+BA0.5+NAA0.1＼&90＼&72＼&80.0＼&芽生長(zhǎng)較快＼&MS+BA1.0+NAA0.1＼&90＼&87＼&96.7＼&芽生長(zhǎng)迅速，芽健壯＼&MS+BA2.0+NAA0.1＼&90＼&85＼&94.4＼&芽生長(zhǎng)迅速，芽健壯，略有玻璃化產(chǎn)生＼&]

2.2 不同激素配比對(duì)繼代增殖的影響 將初代誘導(dǎo)培養(yǎng)得到的玫瑰天竺葵芽接種至不同繼代培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)約8d后開始從葉腋處誘導(dǎo)出叢生芽（見圖1）。由表2可以看出，不同激素配比對(duì)玫瑰天竺葵增殖和生長(zhǎng)等有顯著影響，其中以6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L增殖率效果最佳，苗生長(zhǎng)健壯，其增殖系數(shù)為6.1。

圖1 玫瑰天竺葵繼代增殖

表2 不同激素配比對(duì)叢生芽增殖的影響

[培養(yǎng)基

（mg/L）＼&接種芽數(shù)（株）＼&增殖芽

苗數(shù)（株）＼&增殖系數(shù)（倍）＼&芽苗長(zhǎng)勢(shì)＼&MS+6BA0.3+NAA0.05＼&90＼&367＼&4.1＼&植株健壯，苗綠＼&MS+6BA0.5+NAA0.05＼&90＼&549＼&6.1＼&植株健壯，苗綠＼&MS+6BA0.7+NAA0.05＼&90＼&515＼&5.7＼&植株較壯，苗淺綠，有玻璃化產(chǎn)生。＼&MS+6BA1.0+NAA0.05＼&90＼&489＼&5.4＼&植株較壯，苗淺綠，玻璃化較嚴(yán)重＼&]

2.3 不同激素配比對(duì)不定根誘導(dǎo)的影響 將約3cm長(zhǎng)的健壯增殖芽切成單株轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，最快約10d后開始從基部長(zhǎng)出根，根系白色。從表3可以看出，以添加IBA0.6mg/L表現(xiàn)最好，生根率高達(dá)97.5%，平均每株生根數(shù)為13.8條，而其它處理都較差，生根率較低，生根數(shù)少，說明生根培養(yǎng)基以1/2MS+IBA0.6mg/L為佳。

表3 不同激素配比對(duì)不定根誘導(dǎo)的影響

[培養(yǎng)基

（mg/L）＼&接種數(shù)

（株）＼&生根數(shù)

（株）＼&生根率

（%）＼&平均每株

根數(shù)＼&1/2MS＼&120＼&92＼&76.7＼&7.8＼&1/2MS+IBA0.2＼&120＼&99＼&82.5＼&9.5＼&1/2MS+IBA0.4＼&120＼&108＼&90.0＼&10.3＼&1/2MS+IBA0.6＼&120＼&117＼&97.5＼&13.8＼&1/2MS+IBA0.8＼&120＼&110＼&91.7＼&11.5＼&]

2.4 不同基質(zhì)對(duì)移栽成活率的影響 經(jīng)煉苗后玫瑰天竺葵組培苗葉片舒展，葉色亮綠，將其轉(zhuǎn)至移栽基質(zhì)上培養(yǎng)。不同移栽基質(zhì)對(duì)組培苗成活率和生長(zhǎng)有明顯影響，結(jié)果見表4。從表4可以看出，在泥炭土∶珍珠巖=3∶1的栽培基質(zhì)上成活率最高，達(dá)98.3%，且組培苗長(zhǎng)勢(shì)良好。

表4 不同基質(zhì)對(duì)移栽成活率的影響

[栽培基質(zhì)＼&移栽苗

數(shù)（株）＼&成活苗

數(shù)（株）＼&成活率

（%）＼&生長(zhǎng)情況＼&泥炭土∶珍珠巖=3∶1＼&120＼&118＼&98.3＼&苗健壯，葉片濃綠＼&椰糠∶珍珠巖=3∶1＼&120＼&95＼&79.2＼&苗一般，葉片綠色＼&砂壤土＼&120＼&83＼&69.2＼&苗長(zhǎng)勢(shì)差，葉色淺＼&]

3 結(jié)論與討論

（1）選擇適當(dāng)?shù)耐庵搀w是組培成功的關(guān)鍵。在選擇玫瑰天竺葵莖段作為外植體時(shí)，其成熟度明顯影響誘導(dǎo)效果，過嫩的莖段易消毒致死，過老則不易誘導(dǎo)出芽，以半成熟莖段誘導(dǎo)效果最佳。

（2）在玫瑰天竺葵繼代增殖過程中，過高濃度的6-BA易導(dǎo)致產(chǎn)生愈傷組織和玻璃化，適宜濃度的6-BA既可保證增殖效果，又可減少玻璃苗產(chǎn)生的幾率。

（3）組培苗移栽前生長(zhǎng)在無菌、光溫等恒定條件下，抵抗力較弱，移栽后環(huán)境條件變化大往往易導(dǎo)致死亡。因此，移栽前一定經(jīng)過煉苗，使其適應(yīng)移栽后的溫度、光照等。同時(shí)，加強(qiáng)移栽后的管理，如保溫保濕、噴施殺菌劑等，以提高移栽成活率[8-9]。

（4）由本次試驗(yàn)結(jié)果表明，玫瑰天竺葵繼代增殖培養(yǎng)基以MS+BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L為宜，增殖系數(shù)為6.1;促根培養(yǎng)基以1/2MS+IBA0.6mg/L為宜，生根率達(dá)97.5%以上;組培苗移栽適宜基質(zhì)為泥炭土∶珍珠巖=3∶1，成活率達(dá)98.3%。

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