米醋對制川烏生物堿的影響

秦語欣， 譚 鵬， 國 偉， 費淑琳， 吳月嬌， 李 飛

（北京中醫(yī)藥大學，北京100029）

米醋對制川烏生物堿的影響

秦語欣， 譚 鵬， 國 偉， 費淑琳， 吳月嬌， 李 飛*

（北京中醫(yī)藥大學，北京100029）

目的分析輔料米醋的用量和蒸煮方式對制川烏生物堿類成分的影響。方法高效液相色譜法測定醋制川烏中的新烏頭堿、次烏頭堿、烏頭堿、苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿等6種生物堿的含有量。結果相比藥典法制川烏，醋蒸和醋煮制川烏在一定程度上促進雙酯型生物堿的一級水解，抑制單酯型生物堿的二級水解，從而提高其單酯型生物堿含有量。結論醋制川烏可提高制川烏單酯型生物堿含有量，以10%醋蒸制川烏最為適宜。

制川烏；醋；炮制；雙酯型生物堿；單酯型生物堿

川烏為毛茛科植物烏頭Aconitum carmichaelii Debx.的干燥母根，味辛、苦，性熱，有大毒，歸心、肝、脾經，具有祛風除濕、溫經止痛功效［1］。臨床應用中多使用炮制減毒后的制川烏，其減毒機理為川烏中劇毒成分烏頭堿等雙酯型生物堿經加熱炮制后水解為苯甲酰烏頭原堿等單酯型生物堿，毒性降低為原來的1/200［2-4］。歷代加輔料炮制川烏記載頗多，其中不乏酸性條件進行炮制，如 《證類本草》中的二虎丸，《普濟方》中的野狼毒丸，其中川烏的炮制方法分別為醋蒸、醋炒［5-6］?，F(xiàn)代藥理研究表明，醋制川烏的鎮(zhèn)痛效果優(yōu)于藥典法制川烏［7］。目前關于川烏藥材及制川烏生物堿類成分的研究較多［8-11］，但尚未見酸性輔料醋對制川烏生物堿類成分及成品質量影響的報道。本研究擬采用不同量的輔料醋炮制川烏，通過檢測炮制前后6種酯型生物堿的含有量變化，探討輔料醋對制川烏成品質量的影響。

1 材料

1.1 藥物 川烏藥材于2013年9月購于四川江油中壩附子科技發(fā)展有限公司，經中國食品藥品檢定研究院中藥所張繼主任藥師鑒定為毛茛科植物烏頭Aconitum carmichaeli Debx.的干燥母根。

1.2 炮制輔料用醋 純糧米醋，總酸 （以乙酸計）≥3.5 g/100 mL（天津市翠波食品有限責任公司）。

1.3 儀器與試劑

1.3.1 儀器 Waters液相色譜儀（1525色譜泵、紫外檢測器，美國Waters公司）；Agilent Extend-C18色譜柱（美國Agilent公司）；Sartorius BS210S（Max 210 g，d=0.1 mg）天平（德國賽多利斯公司）；SB25-12DTDN超聲波清洗機（寧波新芝生物科技股份有限公司）；RE旋轉蒸發(fā)儀 （上海亞榮生化儀器廠）；DHG-9070A電熱恒溫鼓風干燥箱（常州諾基儀器有限公司）。

1.3.2 試劑 烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿和苯甲酰新烏頭原堿對照品 （購于中國食品藥品檢定研究院，批號分別為110720-201111、110799-201106、110798-201106、111794-201102、111796-201002、111795-201002）；乙腈和四氫呋喃為色譜純 （德國Merck公司）；純凈水 （杭州娃哈哈集團有限公司）。

2 方法

2.1 炮制品的制備

2.1.1 生川烏 取原藥材，除去雜質，得生川烏，備用。

2.1.2 制川烏 按 《中國藥典》2010年版制川烏項下煮法及蒸法分別炮制［1］。取生川烏，用水浸泡至內無干心，取出加水煮沸4～6 h或蒸6～8 h，至取大個及實心者切開內無白心，口嘗微有麻舌感時，取出，晾至六成干，切片，干燥，得制川烏。

2.1.3 醋制川烏 參照上述制川烏的方法炮制。將其中浸泡用水以不同用量的醋水替換，其余操作同上。米醋用量分別為藥材量的 5%、10%、20%、30%、40%、50%，加水稀釋至相同體積。以上樣品平行操作兩批，分別粉碎。

2.2 色譜條件 按照2010年版 《中國藥典》川烏項下條件，Agilent Extend-C18色譜柱（4.6 mm× 250 mm，5μm）；以乙腈-四氫呋喃 （25：15）為流動相A，以0.1 mol/L醋酸銨溶液（每1 000 mL加冰醋酸0.5 mL）為流動相B，按表1的規(guī)定進行梯度洗脫，檢測波長為235 nm。

表1 流動相梯度洗脫條件Tab.1 M obile phase gradient elution condition

2.3 對照品溶液的制備 取對照品適量，精密稱定，加異丙醇-三氯甲烷 （1：1）配制成每1 mL含烏頭堿0.034 mg、次烏頭堿0.01 mg、新烏頭堿0.087 mg、苯甲酰烏頭原堿0.023 mg、苯甲酰次烏頭原堿0.095 mg、苯甲酰新烏頭原堿0.125 mg的溶液，備用。

2.4 供試品溶液的制備 取炮制品粉末 （過三號篩）2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加氨試液3 mL，精密加入異丙醇-乙酸乙酯 （1：1）混合溶液50 mL，稱定質量，超聲處理 （功率300 W，頻率40 kHz；水溫在25℃以下）30 min，放冷，再稱定質量，用異丙醇-乙酸乙酯 （1：1）混合溶液補足減失的質量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25 mL，40℃以下減壓回收溶劑至干，殘渣精密加異丙醇-三氯甲烷 （1：1）混合溶液3 m L溶解，濾過，取續(xù)濾液即得。

2.5 樣品測定 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，計算供試品溶液中烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿和苯甲酰新烏頭原堿的量。色譜圖見圖1，各成分含有量見表2、圖2。

表2 各炮制品中烏頭類生物堿測定結果Tab.2 Aconitum alkaloids conten ts in different p rocessed products

3 結果

川烏經醋制后生物堿含有量發(fā)生了明顯變化，不同醋濃度對其影響不同，與藥典法制川烏相比，醋制川烏均使單酯型生物堿含有量升高，且加入適當比例的醋可使其達到藥典規(guī)定，煮法炮制加輔料醋可使單酯型生物堿含有量提高14%～82%；蒸法炮制加輔料醋可使單酯型生物堿含有量提高8%～67%。

圖1 6種生物堿測定HPLC圖譜Fig.1 HPLC chromatograms of six kinds of alkaloids

圖2 生品、不同用量醋煮品、不同用量醋蒸品中雙酯型生物堿總量、單酯型生物堿總量Fig.2 Diester-type and monoester-type alkaloids contents in raw Aconcti Radix Cocta and different processed products

單酯型生物堿成分含有量的提高說明輔料醋可能抑制了單酯型生物堿的水解；加入輔料醋炮制品檢測不到雙酯型生物堿成分，說明輔料醋促進了雙酯型生物堿的水解。雙酯型生物堿的水解過程為通過加水加熱處理，使極毒的雙酯型烏頭堿C8位上的乙?；?（或分解），失去一分子醋酸，得到相應的苯甲酰單酯型生物堿，為雙酯型生物堿的一級水解；再進一步將C14位上的苯甲酰基水解（或分解），失去一分子苯甲酸，得到親水性氨基醇類烏頭原堿，為單酯型生物堿的二級水解［12-13］。炮制時加入輔料醋增加了川烏藥材組織中醋酸的濃度，酸可催化乙?；乃?，因此可能醋酸促進了雙酯型生物堿的一級水解；隨著反應的進行，醋酸量逐漸增加，由于酸性條件下?；夥磻獮榭赡娣磻敶姿崃窟_到一定程度時則抑制?；?，即抑制了苯甲酰基的水解，從而抑制了單酯型生物堿的二級水解。

圖2結果顯示，煮法與蒸法炮制得到的制品酯型生物堿含有量變化趨勢呈現(xiàn)為隨醋濃度的增加單酯型生物堿含有量先升高，后下降，再升高的波動變化。加入輔料醋后生物堿的變化較為復雜，該變化趨勢尚未發(fā)現(xiàn)科學解釋，對此有待進一步研究。

4 討論

《中國藥典》2010年版規(guī)定，制川烏單酯型生物堿總量應為0.070%～0.15%［1］。本實驗生川烏采用藥典法炮制，其指標性成分—單酯型生物堿含有量均低于藥典要求，而炮制時加入適當比例的醋可提高該成分含有量，使其達到藥典要求。煮法炮制會使生物堿類成分流失，而蒸法炮制則較好的保留有效成分。醋煮川烏雖相對提高了單酯型生物堿含有量，但仍低于藥典規(guī)定下限，而藥典法蒸川烏時，單酯型生物堿含有量雖然也略低于藥典規(guī)定下限，但當加入少量醋后便可使其達到藥典要求。對比表2（不同醋用量蒸制品單酯型生物堿含有量）發(fā)現(xiàn)，采用10%、50%米醋均可以有效提高該成分含有量并達到藥典規(guī)定，考慮經濟成本，選用10%米醋蒸制川烏工藝在生產上最為適宜。

市場上流通的川烏藥材質量良莠不齊，有些按照藥典規(guī)定的煮4～6 h或蒸6～8 h后仍難以得到合格的制品，酯型生物堿含有量太低會使藥效降低，影響臨床使用。本實驗加入輔料醋炮制川烏，可在一定程度上提高酯型生物堿的含有量，解決了制品質量達不到藥典要求的問題，對制川烏的生產有一定指導意義。

采用不同用量的米醋炮制川烏時，制品中酯型生物堿含有量呈波動變化，該變化機理有待進一步研究。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2010年版一部［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

［2］張 毅，翁代群，王海軍，等.烏頭堿的水解動力學研究［J］.中草藥，2009，40（S1）：120-122.

［3］王峰峰，宋兆輝，張?zhí)m蘭，等.烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿水解和醇解產物的研究［J］.中國中藥雜志，2012，37（11）：1564-1569.

［4］涂瑤生，全智慧，孫冬梅，等.制川烏炮制過程中生物堿類成分的時量變化關系［J］.中國實驗方劑學雜志，2013，19（6）：25-29.

［5］北宋·唐慎微.證類本草［M］.上海：上海古籍出版社，1991.

［6］明·朱 棣.普濟方［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1959.

［7］吳剛剛，章小菁，梁澤華.川烏炮制品減毒增效的實驗研究［J］.綠色科技，2011，（6）：163-165.

［8］王 偉，趙翡翠，陳 良，等.HPLC法同時測定白喉烏頭中高烏甲素、烏頭堿、新烏頭堿［J］.中成藥，2014，36（4）：796-799.

［9］王兆基，關錫耀，徐樹棋，等.毒性中藥生川烏質量標準研究［J］.中成藥，2006，28（5）：651-655.

［10］程麗麗，許妍妍，張艷軍.中藥川烏多成分同時檢測及藥動學評價研究進展［J］.天津中醫(yī)藥大學學報，2014，33（1）：56-60.

［11］李 萌，張根衍，潘桂湘.LC-MS/MS測定烏頭屬中藥中8個生物堿含量［J］.遼寧中醫(yī)藥大學學報，2014，16（2）：51-53.

［12］譚 鵬，鄧欣祺，李 飛，等.烏頭堿電噴霧質譜裂解機制的研究［J］.中國測試，2014，40（1）：43-46.

［13］譚 鵬.烏頭堿型生物堿的模擬炮制研究［D］.北京：北京中醫(yī)藥大學，2012.

Influence of vinegar on aconite alkaloids from Aconiti Radix Cocta

QIN Yu-xin， TAN Peng， GUOWei， FEIShu-lin， WU Yue-jiao， LIFei*
（Beijing University of ChineseMedicine，Beijing 100029，China）

AIMTo analyze the impactof adjuvant vinegar on alkaloids from Aconiti Radix Cocta.METHODSTo analyze six aconite alkaloids，including mesaconitine，hypaconitine，aconitine，benzoylmesaconine，benzoyl aconine，and benzoyl hypaconine from Aconiti Radix Cocta processed with different concentration of vinegar by HPLC.RESULTSCompared with the officialmethod，steaming and boiling process with vinegar promoted the first hydrolysis of diester-type alkaloids and inhibited the second hydrolysis ofmonoester-type alkaloids in Aconiti Radix Cocta to some degree，so improved the amount ofmonoester-type alkaloids.CONCLUSIONProcessing with vinegar can increase the content ofmonoester-type alkaloids in Aconiti Radix Cocta，best presents by 10%vinegar concentration.

Aconiti Radix Cocta；vinegar；process；diester-type alkaloids；monoester-type alkaloids

R283

A

1001-1528（2015）04-0828-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.04.030

2014-06-06

中醫(yī)藥行業(yè)科研專項項目 （201107008）；國家973計劃中醫(yī)基礎理論專項 （2009CB522800；2009CB522805）

秦語欣（1991—），女（滿族），碩士生，研究方向為中藥炮制。E-mail：qinyuxin11@sina.com

*通信作者：李 飛 （1963—），女，碩士，教授，碩士生導師，研究方向為中藥炮制。Tel：（010）84738616，E-mail：lf668@ sina.com