• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    半乳糖基甘油月桂酸單酯的抑菌活性和穩(wěn)定性

    2016-11-14 12:37:37刁明明齊丹萍別小妹呂鳳霞陸兆新趙海珍
    食品科學(xué) 2016年15期
    關(guān)鍵詞:單酯蠟樣半乳糖

    刁明明,齊丹萍,張 充,別小妹,呂鳳霞,陸兆新,趙海珍*

    (南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院,江蘇 南京 210095)

    半乳糖基甘油月桂酸單酯的抑菌活性和穩(wěn)定性

    刁明明,齊丹萍,張 充,別小妹,呂鳳霞,陸兆新,趙海珍*

    (南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院,江蘇 南京 210095)

    研究半乳糖基甘油月桂酸單酯對食品中幾種常見腐敗菌的抑菌作用及其穩(wěn)定性。方法:采用倍比稀釋法測定半乳糖基甘油月桂酸單酯對5 種細(xì)菌和3 種真菌的最小抑菌濃度(minimum inhibitory concentration,MIC)。同時以大腸桿菌和蠟樣芽孢桿菌為指示菌,研究pH值、溫度、紫外線照射及NaCl質(zhì)量分?jǐn)?shù)對半乳糖基甘油月桂酸單酯抑菌穩(wěn)定性的影響。結(jié)果:半乳糖基甘油月桂酸單酯對大腸桿菌、蠟樣芽孢桿菌等5 種細(xì)菌具有較好的抑菌活性,而對黃曲霉、黑曲霉和釀酒酵母等真菌的抑制效果不明顯或無抑制效果。半乳糖基甘油月桂酸單酯對熒光假單胞菌的MIC為0.078 mg/mL,對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌的MIC均為0.156 mg/mL。半乳糖基甘油月桂酸單酯在pH 5~8范圍內(nèi)具有較好的抑菌活性,經(jīng)溫度和紫外線照射處理后,抑菌活性有微弱下降,隨著NaCl質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增加,其抑菌活性顯著下降。

    半乳糖基甘油月桂酸單酯;抑菌活性;穩(wěn)定性

    刁明明, 齊丹萍, 張充, 等. 半乳糖基甘油月桂酸單酯的抑菌活性和穩(wěn)定性[J]. 食品科學(xué), 2016, 37(15): 1-6.

    DIAO Mingming, QI Danping, ZHANG Chong, et al. Antimicrobial properties and stability of galactosyl monolaurin[J]. Food Science, 2016, 37(15): 1-6. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201615001. http://www.spkx.net.cn

    在食品工業(yè)中,各類食品的防腐保鮮始終是一個亟待解決的重要問題,據(jù)不完全統(tǒng)計,我國每年約有20%~30%的食物因?yàn)楦鞣N腐敗變質(zhì)而損失[1-2]。食品腐敗的原因主要包括物理因素、化學(xué)因素、酶及微生物四方面,其中以微生物的作用最為嚴(yán)重[3]。食品腐敗變質(zhì)不僅降低食品的營養(yǎng)價值,而且還可產(chǎn)生各種有毒有害物質(zhì),引起食用者發(fā)生急性中毒或產(chǎn)生慢性毒害。因此,食品防腐是防止食品的腐敗、保障食品安全的重要手段。傳統(tǒng)的防腐方法如煙熏、干制、鹽腌等會影響食品的風(fēng)味、質(zhì)地,而現(xiàn)代的防腐技術(shù)如冷凍干燥、真空包裝、輻射保藏等不能適用于所有食品,且成本較高,為保證食品在保質(zhì)期內(nèi)不發(fā)生腐敗變質(zhì),食品防腐劑在現(xiàn)代食品工業(yè)中被廣泛應(yīng)用[4-5]。隨著食品工業(yè)的發(fā)展,人們對于防腐劑的要求越來越高,而傳統(tǒng)的有機(jī)酸型食品防腐劑如山梨酸鉀、苯甲酸鈉等的功效受pH值的影響較大,在中性、偏堿性食品中效果不佳[6]。因此,開發(fā)新型的抗菌性強(qiáng)、安全無毒、適應(yīng)性廣、穩(wěn)定性強(qiáng)的食品防腐劑具有重要的意義。

    甘油糖酯是糖類通過還原末端以α-或β-糖苷鍵與親脂性的長鏈單脂酰基或二脂?;视拖噙B接起來的一類化合物[7]。甘油糖酯廣泛存在于植物界和微生物中,是細(xì)菌原生質(zhì)膜、植物葉綠體類囊膜的主要組成成分,參與細(xì)胞膜的識別活動[7-8]。甘油糖酯是一種非離子型表面活性劑,具有兩親性結(jié)構(gòu),這種特殊的兩親性使它具有抗氧化、抗菌、抗腫瘤、溶血、免疫抑制等多種生理活性[8-13]。目前國內(nèi)外對酶法合成的脂肪酸糖酯及其抗菌活性有較多的報道,劉巧瑜等[14]研究發(fā)現(xiàn)月桂酸麥芽糖單酯和蔗糖月桂酸單酯對大腸桿菌、蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌等多種細(xì)菌具有較好的抑菌活性。Nobmann等[15]報道了新合成的甲基化葡萄糖月桂酸單醋和月桂酸甘露糖單酯對L. monocytogenes具有較好的抑菌活性,而且甲基化的辛酸葡萄糖單酯對Escherichia coli和Pseudomouas fluorescens有一定的抑制作用。但關(guān)于甘油糖酯抑菌活性的研究卻鮮有報道,有研究者從菊科植物Serratula strangulata的根莖中分離得到3 種甘油糖酯,其對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌3 種細(xì)菌具有明顯的抑制作用[16]。Deml等[17]從苔草裂孢黑粉菌(Schizonella melanogramma)中分離到兩種甘油糖酯Schizonelin A和B對革蘭氏陽性菌和某些革蘭氏陰性菌也有一定的抑制作用。為進(jìn)一步研究甘油糖酯的抑菌活性,本實(shí)驗(yàn)采用酶法合成半乳糖基甘油月桂酸單酯(簡稱C12單酯),考察C12單酯對幾種細(xì)菌、霉菌和酵母菌的抑菌活性大小及其對溫度、pH值、紫外線、NaCl的抑菌穩(wěn)定性,為開發(fā)一種高效、安全、適應(yīng)性廣的新型甘油糖酯類食品防腐保鮮劑奠定理論基礎(chǔ),同時豐富天然食品防腐劑的品種。

    1 材料與方法

    1.1菌株與培養(yǎng)基

    大腸桿菌(Escherichia coli)ATCC 25922、熒光假單胞菌(Pseudomouas fluorescens)ATCC 49642、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)ATCC 6633、蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)ATCC 14579、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCC 25923、黑曲霉(Aspergillus niger)AS 3.350、黃曲霉(Aspergillus flavus)CICC 2062、釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CICC 32788,均由南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院酶工程實(shí)驗(yàn)室保藏。

    營養(yǎng)瓊脂(NA)培養(yǎng)基用于細(xì)菌的培養(yǎng),馬鈴薯葡萄糖(PDA)培養(yǎng)基用于真菌的培養(yǎng)[18]。

    1.2材料制備

    半乳糖基甘油、C12單酯(純度>97%)由南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院酶工程實(shí)驗(yàn)室自制。C12單酯為乳白色固體,性質(zhì)穩(wěn)定,在-20 ℃能貯存較長時間,不易溶于水,易溶于甲醇、乙醇、丙酮、三氯甲烷等有機(jī)溶劑中。

    半乳糖基甘油的制備:以β-半乳糖苷酶為催化劑,以半乳糖為糖基供體,甘油為糖基受體,選擇性合成半乳糖基甘油。隨后對半乳糖基甘油進(jìn)行分離純化,得到的純品進(jìn)行高效液相色譜(high performance liquid chromatography,HPLC)、質(zhì)譜(mass spectrometry,MS)、核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)鑒定,確定其化學(xué)結(jié)構(gòu),以作為后期合成半乳糖基甘油酯的中間物[7]。

    C12單酯的制備:以固定化脂肪酶Novozyme435為催化劑,以半乳糖基甘油為糖基供體,以月桂酸為?;w,合成C12單酯,通過薄層色譜法(thin-layer chromatography,TLC)、硅膠柱層析、HPLC-蒸發(fā)光散射檢測(evaporation light-scattering detection,ELSD)、MS等方法對C12單酯進(jìn)行分離純化和鑒定[19]。

    1.3儀器與設(shè)備

    SX-700高壓蒸汽滅菌器 日本TOMY公司;HYL-A全溫?fù)u瓶柜 太倉市強(qiáng)樂實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠;Orion 3 STAR pH計 美國Thermo公司;UV-2450紫外分光光度計日本島津公司;迷你渦旋混勻器 美國精騏有限公司;AY120電子精密天平 日本Shimadzu公司;SW-CJ-IBU超凈工作臺 蘇州凈化設(shè)備有限公司。

    1.4方法

    1.4.1菌懸液的制備

    1.4.1.1細(xì)菌、酵母菌菌懸液

    采用平板菌落計數(shù)法和分光光度法結(jié)合的方法,使用前將初始菌液稀釋成濃度為106~107CFU/mL的菌懸液。

    1.4.1.2孢子菌懸液

    用無菌生理鹽水將霉菌產(chǎn)生的孢子從斜面洗下,轉(zhuǎn)移至離心管中,渦旋振蕩10 min,用已滅菌的脫脂棉過濾,用血球計數(shù)板計數(shù),使用前將初始菌液稀釋成濃度為106~107CFU/mL的菌懸液。

    1.4.2抑菌活性的測定

    以熒光假單胞菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、黃曲霉、黑曲霉和釀酒酵母為指示菌,采用打孔法測定半乳糖基甘油和C12單酯的抑菌情況。將配好的菌懸液加入融化的NA培養(yǎng)基(霉菌和酵母菌為PDA培養(yǎng)基)中混勻,使培養(yǎng)基中菌濃度為106~107CFU/mL,室溫冷卻凝固后得到指示菌平板。用滅菌的5 mm打孔器打孔后用牙簽將瓊脂塊挑出,向孔內(nèi)加入50 μL制備好的樣品溶液,以甲醇溶液為對照,細(xì)菌37 ℃培養(yǎng)24 h,霉菌和酵母菌28 ℃培養(yǎng)48 h后觀察測量和記錄抑菌圈的直徑。每組進(jìn)行3 次平行實(shí)驗(yàn),并取其平均值。

    1.4.3最小抑菌濃度(minimum inhibitory concentration,MIC)的測定

    使用倍比稀釋法將C12單酯母液配制成質(zhì)量濃度10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0.078、0.039 mg/mL的樣品溶液,各取100 μL加入到含有100 μL菌濃度為106CFU/mL的NA培養(yǎng)基中,得到的樣品質(zhì)量濃度均減半。將處理后的96 孔板放在37 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)孵育24 h后,用酶標(biāo)儀在600 nm波長處測定吸光度。以上述樣品中對應(yīng)的不同劑量的甲醇溶液作為對照(排除樣品中甲醇對細(xì)菌的抑制作用)。選取抑菌活性最佳的質(zhì)量濃度,觀察記錄MIC值,實(shí)驗(yàn)平行3 次。

    1.4.4抑菌時效的測定

    以大腸桿菌和蠟樣芽孢桿菌為指示菌,采用光電比濁法測定C12單酯的抑菌時效。將處于對數(shù)生長期的種子液接種至含有1×MIC C12單酯的NA液體培養(yǎng)基中,37 ℃、180 r/min進(jìn)行培養(yǎng),以不含C12單酯的甲醇溶液為對照組,每隔2 h測定600 nm波長處的吸光度。采用下式計算t時刻的抑菌率。

    式中:A0,ck、At,ck分別為對照組在0、t時刻的吸光度;A0,i、At,i分別為實(shí)驗(yàn)組在0、t時刻的吸光度。

    1.4.5pH值對抑菌穩(wěn)定性的影響

    用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)固體培養(yǎng)基的pH值,配制成pH值分別為5、6、7、8、9的營養(yǎng)瓊脂固體培養(yǎng)基,用平板菌落計數(shù)法,制成含1×MIC C12單酯的不同pH值環(huán)境的微生物培養(yǎng)平板,凝固后置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),以相同pH值的不含C12單酯的微生物平板為對照,37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h后觀察平板中菌落的生長情況并計數(shù),分別測定抑菌率。

    式中:N1為對照組的菌落數(shù);N2為實(shí)驗(yàn)組的菌落數(shù)。

    1.4.6溫度對抑菌穩(wěn)定性的影響

    將C12單酯分裝在5 個無菌樣品瓶中,經(jīng)40、60、80、100 ℃處理20 min,冷卻后待用。采用平板菌落計數(shù)法,制成含1×MIC C12單酯的微生物培養(yǎng)平板,以甲醇溶液做對照實(shí)驗(yàn)。37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h后,觀察平板中菌落的生長情況并計數(shù),按公式(2)分別測定抑菌率。

    1.4.7紫外線照射對抑菌穩(wěn)定性的影響

    將不同質(zhì)量濃度的樣液置于40 W的紫外燈下,距離25 cm,照射5、10、15、20、25、30 min,以未經(jīng)處理的相同質(zhì)量濃度的C12單酯作對照,以大腸桿菌和蠟樣芽孢桿菌作指示菌,測定抑菌率,比較紫外線照射前后的抑菌活性。

    1.4.8NaCl質(zhì)量分?jǐn)?shù)對抑菌穩(wěn)定性的影響

    以大腸桿菌和蠟樣芽孢桿菌為供試菌株,分別向培養(yǎng)基中添加0%、1%、2%、4%、8%的NaCl,配制成含不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)NaCl的微生物培養(yǎng)平板,在每一組相同的NaCl質(zhì)量分?jǐn)?shù)條件下,設(shè)置空白對照組,以等體積甲醇代替C12單酯溶液作為空白對照組,37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h后,觀察平板中菌落的生長情況并計數(shù),測定抑菌率。

    1.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

    2 結(jié)果與分析

    2.1 半乳糖基甘油與C12單酯的抑菌活性

    國內(nèi)外有很多的對酶法合成脂肪酸糖酯及其抑菌活性的報道,根據(jù)報道,糖酯對微生物具有較廣泛的抑制作用[20-23]。C12單酯對食品中幾種腐敗菌的抑制效果見表1。底物半乳糖基甘油沒有抑菌活性,C12單酯對革蘭氏陽性菌和陰性菌均具有抑菌活性,并且抑菌效果較好,而在黃曲霉、黑曲霉和釀酒酵母等真菌培養(yǎng)基上無明顯抑菌圈出現(xiàn),表明對其抑制效果不明顯或無抑制性。這也與劉巧瑜等[14]報道的質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.09%的麥芽糖月桂酸單酯和蔗糖月桂酸單酯均可有效地抑制蠟狀芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌等多種細(xì)菌的生長,而麥芽糖單酯、蔗糖單酯和P1570對黑曲霉、青霉和釀酒酵母和葡萄酒酵母菌均無明顯抑制效果的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。

    表1 C12單酯的抑菌譜Table 1 Antimicrobial spectrum of galactosyl monolaurin

    2.2C12單酯的MIC

    分別以熒光假單胞菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌為指示菌,二倍稀釋法測定C12單酯的MIC,由表2可知,C12單酯能夠有效抑制幾種供試菌的生長,且其抑菌能力隨著質(zhì)量濃度的增加而增強(qiáng)。C12單酯對熒光假單胞菌的MIC為0.078 mg/mL,對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌的MIC均為0.156 mg/mL。張希[6]研究發(fā)現(xiàn)中鏈脂肪酸糖單酯對金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)的抑菌作用,對E. coli O157:H7和白色念珠菌的抑菌活性較弱,其中甲基葡萄糖苷月桂酸單酯、蔗糖月桂酸單酯和麥芽糖月桂酸單酯對金黃色葡萄球菌的MIC

    表2 C12單酯對不同細(xì)菌的最小抑菌濃度Table 2 MICs of galactosyl monolaurin against indicator bacteria

    值分別為0.188、0.25、0.25 mg/mL,甲基葡萄糖月桂酸單酯對E. coli O157:H7的MIC為0.188 mg/mL。本研究結(jié)果與之不符,說明C12單酯的抑菌活性與糖基有關(guān),糖基不同,抑菌活性也不同。李更更[24]在對不同親水基團(tuán)的脂肪酸酯的抑制效果的研究中也發(fā)現(xiàn)麥芽糖月桂酸單酯和蔗糖月桂酸單酯對大腸桿菌、沙門氏菌、枯草芽孢桿菌、酵母菌和霉菌都有一定的抑制作用,而N-乙酰氨基葡萄糖月桂酸單酯對大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄糖球菌和白色葡萄糖球菌有一定的抑制作用,而對酵母菌和霉菌則無抑制作用,說明不同糖基的脂肪酸酯的抑菌效果存在明顯差異。

    2.3C12單酯的抑菌時效

    圖1 C12單酯對大腸桿菌和蠟樣芽孢桿菌的抑菌時效Fig. 1 Antibacterial activity-time curves of galactosyl monolaurin against Escherichia coli and Bacillus cereus

    采用比濁法測定C12單酯對大腸桿菌和蠟樣芽孢桿菌的抑菌活性,結(jié)果如圖1所示。隨著培養(yǎng)時間的延長,C12單酯對大腸桿菌的抑菌率呈現(xiàn)急劇下降的趨勢,72 h左右時,其對大腸桿菌幾乎沒有抑菌作用。而C12單酯對蠟樣芽孢桿菌的抑菌率在前36 h基本不變,維持在90%以上,36 h以后抑菌率急劇下降。隨著時間的延長,C12單酯對大腸桿菌和蠟樣芽孢桿菌的抑菌率呈下降的趨勢,這可能是因?yàn)榇竽c桿菌和蠟樣芽孢桿菌酶系降解了C12單酯,解除其對細(xì)胞的生理代謝的干擾的結(jié)果。本實(shí)驗(yàn)與羅春燕[25]研究單中碳鏈脂肪酸甘油酯對大腸桿菌和蠟樣芽孢桿菌的抑制效果一致。

    2.4pH值對C12單酯抑菌活性的影響

    表3 pH值對C12單酯抑菌活性的影響Table 3 Effect of pH on antibacterial activity of galactosyl monolaurin

    以大腸桿菌和蠟樣芽孢桿菌為供試菌,測定不同pH值條件下C12單酯的抑菌活性,評價其酸堿穩(wěn)定性。由表3可知,在不同pH值條件下,C12單酯對大腸桿菌和蠟樣芽孢桿菌仍保持較強(qiáng)的抑菌活性。在pH 5~8的范圍內(nèi),C12單酯對大腸桿菌和蠟樣芽孢桿菌的抑菌活性無顯著變化;在pH 9時,C12單酯對兩種菌的抑菌活性顯著下降,但其抑菌率仍在93%以上,說明C12單酯具有良好的酸堿穩(wěn)定性。本實(shí)驗(yàn)與劉燕[26]和趙存洋[27]的研究結(jié)果一致。

    劉燕[26]對單中碳鏈脂肪酸甘油酯抑菌活性的研究發(fā)現(xiàn)其對細(xì)菌、霉菌和酵母菌的MIC沒有變化,表明在中性至微堿的環(huán)境下,單中碳鏈脂肪酸甘油酯的抑菌性能不受pH值的影響。趙存洋[27]的研究表明pH值從3升高到9,單月桂酸甘油酯對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌等6 種食品腐敗菌的MIC均未發(fā)生變化,表明單月桂酸甘油酯在酸性至堿性環(huán)境中具有良好的抑菌活性。

    2.5溫度對C12單酯抑菌活性的影響

    表4 溫度對C12單酯抑菌活性的影響Table 4 Effect of temperature on antibacterial activity of galactosyl monolaurinaurin

    以大腸桿菌和蠟樣芽孢桿菌為供試菌,測定不同溫度條件下C12單酯的抑菌活性,評價其熱穩(wěn)定性。由表4可知,溫度對C12單酯的抑菌活性有較大影響。當(dāng)溫度低于60 ℃時,隨著溫度的升高,C12單酯對蠟樣芽孢桿菌的抑菌活性的變化不大;當(dāng)溫度高于60 ℃時,其對蠟樣芽孢桿菌的抑菌活性隨溫度的升高而顯著下降。當(dāng)溫度低于40 ℃時,隨著溫度的升高,C12單酯對大腸桿菌的抑菌活性無顯著變化;當(dāng)溫度高于40 ℃時,其對大腸桿菌的抑菌活性隨溫度的升高而顯著下降。然而C12單酯經(jīng)100 ℃處理20 min后,其對兩種供試菌的抑菌率仍在85%以上,說明C12單酯具有較好的熱穩(wěn)定性。

    2.6紫外線照射時間對C12單酯抑菌活性的影響以大腸桿菌和蠟樣芽孢桿菌為供試菌,測定紫外線照射不同時間后C12單酯的抑菌活性,由表5可知,經(jīng)紫外線照射不同時間后,C12單酯對兩種供試菌的抑菌活性基本保持不變,即紫外線照射對C12單酯的抑菌活性無顯著影響,由此可見半乳糖基甘油月桂酸單對紫外光具有極高的穩(wěn)定性。

    表5 紫外線照射時間對C12單酯抑菌活性的影響Table 5 Effect of UV irradiation on antibacterial activity of galactosyl monolaurinaurin

    2.7NaCl質(zhì)量分?jǐn)?shù)對C12單酯抑菌活性的影響

    表6 NaCl質(zhì)量分?jǐn)?shù)對C12單酯抑菌活性的影響Table 6 Effect of NaCl concentration on antibacterial activity of galactosyl monolaurin

    以大腸桿菌和蠟樣芽孢桿菌為供試菌,測定不同NaCl質(zhì)量分?jǐn)?shù)下C12單酯的抑菌活性。由表6可知,NaCl質(zhì)量分?jǐn)?shù)對C12單酯的抑菌活性有較大影響。NaCl質(zhì)量分?jǐn)?shù)在1%~8%范圍內(nèi),隨著鹽離子強(qiáng)度的增加,C12單酯對兩種供試菌的抑菌活性呈現(xiàn)出顯著下降的趨勢。一般情況下認(rèn)為抑菌物質(zhì)與細(xì)菌相互作用的過程中,抑菌物質(zhì)通過靜電引力的方式吸附到細(xì)胞膜上后與之結(jié)合,實(shí)驗(yàn)中鹽離子濃度的增加可能影響到C12單酯與細(xì)菌細(xì)胞膜的結(jié)合,從而影響了C12單酯抑菌活性的發(fā)揮[28]。

    3 結(jié) 論

    C12單酯對大腸桿菌、熒光假單胞菌、枯草芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌均具有較好的抑菌活性,而對黃曲霉、黑曲霉和釀酒酵母等真菌的抑制效果不明顯或無抑制性。對C12單酯的抑菌穩(wěn)定性研究結(jié)果顯示:C12單酯對pH值、溫度和紫外線照射有較強(qiáng)的穩(wěn)定性,但對NaCl不穩(wěn)定。這可能是因?yàn)镃12單酯是一種非離子表面活性劑,生物表面活性劑的主要特性就是耐酸、熱及離子強(qiáng)度、低毒性和生物可降解性等[29-30]。已有研究表明甘油單脂肪酸酯類對細(xì)菌、酵母菌和霉菌的生長都有較好的抑制作用,且其抑菌活性不受環(huán)境pH值的影響,被美國食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)為一般公認(rèn)安全類食品添加劑[31],這都說明C12單酯有成為一種高效、安全、適用性廣的新型甘油糖酯類食品防腐保鮮劑的潛力。關(guān)于糖酯抑菌機(jī)理的研究,目前國內(nèi)外的相關(guān)報道較少[32]。一般認(rèn)為防腐劑是通過影響細(xì)胞亞結(jié)構(gòu)的正常生理功能來實(shí)現(xiàn)其抑菌作用的[27]。C12單酯是一種非離子型表面活性劑,具有疏水特性,可能會以細(xì)胞膜為作用靶點(diǎn),破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的完整性,從而改變細(xì)胞膜的通透性,抑制細(xì)菌的生長。后續(xù)將繼續(xù)研究C12單酯對大腸桿菌和蠟樣芽孢桿菌的抑菌機(jī)理,為C12單酯的進(jìn)一步應(yīng)用提供理論依據(jù)。

    [1] 王麗, 張毓, 陳翠嵐. 我國食品防腐劑的應(yīng)用及發(fā)展趨勢[J]. 食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報, 2011, 2(2): 83-87.

    [2] 羅傲霜, 淳澤, 羅傲雪, 等. 食品防腐劑的概況與發(fā)展[J]. 中國食品添加劑, 2005(4): 78-83. DOI:10.3969/j.issn.1006-2513.2005.04.015.

    [3] 林科. 食品防腐劑的種類及其研究進(jìn)展[J]. 廣西輕工業(yè), 2009,25(10): 9-11. DOI:10.3969/j.issn.1003-2673.2009.10.006.

    [4] 肖燕清, 白衛(wèi)東, 錢敏. 我國食品防腐劑的發(fā)展現(xiàn)狀及對策[J]. 中國調(diào)味品, 2010, 35(11): 43-62. DOI:10.3969/ j.issn.1000-9973.2010.11.005.

    [5] 王杉, 揭琴豐, 邱偉華. 食品防腐劑的應(yīng)用現(xiàn)狀、問題及對策[J]. 中國食品添加劑, 2011(6): 163-166. DOI:10.3969/ j.issn.1006-2513.2011.06.022.

    [6] 張希. 中鏈脂肪酸糖單酯的酶法合成以及理化性質(zhì)和抑菌活性研究[D]. 杭州: 浙江大學(xué), 2014: 73-83.

    [7] 魏微. 半乳糖基甘油脂酶法合成及其抗腫瘤活性研究[D]. 南京: 南京農(nóng)業(yè)大學(xué), 2014: 4-12.

    [8] 李春霞, 李英霞, 管華詩. 甘油糖酯生物活性研究進(jìn)展[J]. 中國海洋藥物, 2002, 22(2): 47-52. DOI:10.3969/j.issn.1002-3461.2003.02.013.

    [9] 蔣志國, 杜琪珍. 甘油糖酯生物活性最新研究進(jìn)展[J]. 中國糧油學(xué)報, 2009, 24(9): 163-167.

    [10] MATSUFUJI M, NAGAMATSU Y, YOSHIMOTO A. Protective effects of bacterial glyceroglycolipid M874B against cell death caused by exposure to heat and hydrogen peroxide[J]. Journal of Bioscience and Bioengineering, 2000, 89(4): 345-349. DOI:10.1016/S1389-1723(00)88957-4.

    [11] KUNIHO N. High resistance to oxygen radicals and heat is caused by a galacticglycerolipid in Microbacterium sp. M874[J]. Journal of Biochemistry, 2000, 127(5): 731-737. DOI:10.1093/oxfordjournals. jbchem.a022664.

    [12] COLOMBO D, COMPOSTELLA F, RONCHETTI F, et al. Antitumor-promoting effects of glycerolipid analogues on two-stage mouse skin carcinogens[J]. Cancer Letters, 2000, 161(2): 201-205. DOI:10.1016/S0304-3835(00)00610-8.

    [13] 楊文, 候海彤, 馮福應(yīng), 等. 硫代異鼠李糖甘油二酯(SQDG)的生物合成與功能[J]. 植物學(xué)通報, 2003, 20(1): 103-114. DOI:10.3969/ j.issn.1674-3466.2003.01.015.

    [14] 劉巧瑜, 張曉鳴. 麥芽糖單酯和蔗糖單酯的抑菌性研究[J]. 食品工業(yè)科技, 2010, 31(7): 313-315.

    [15] NOBMANN P, SMITH A, DUNNE J, et al. The antimicrobial efficacy and structure activity relationship of novel carbohydrate fatty acid derivatives against Listeria spp. and food spoilage microorganisms[J]. International Journal of Food Microbiology, 2009, 128(3): 440-445. DOI:10.1016/j.ijfoodmicro.2008.10.008.

    [16] DAI J Q, ZHU Q X, ZHAO C Y, et al. Three new glyceroglycolipids from Serratula strangulata[J]. Phytochemistry, 2001, 58(8): 135-139.

    [17] DEML G, ANKE T, OBERWINKLER F, et al. Schizonellin A and B,new glycolipids from Schizonella melanogramma[J]. Phytochemistry,1980, 19(1): 83-87. DOI:10.1016/0031-9422(80)85018-7.

    [18] 李平蘭, 賀稚非. 食品微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)原理與技術(shù)[M]. 北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社, 2005: 263-265.

    [19] 齊丹萍, 刁明明, 陸兆新, 等. 響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化單半乳糖基甘油棕櫚酸酯的酶法合成工藝[J]. 食品科學(xué), 2015, 36(18): 1-6. DOI:10.7506/ spkx1002-6630-201518001.

    [20] RIHAKOVA Z, PLOCKOVA M, FILIP V, et al. Antifungal activity of lauric acid derivatives against Aspergillus niger[J]. European Food Research and Technology, 2001, 213(6): 488-490. DOI:10.1007/ s002170100416.

    [21] HABULIN M, SABEDER S, KNEZ Z. Enzymatic synthesis of sugar fatty acid esters in organic solvent and in supercritical carbon dioxide and their antimicrobial activity[J]. Journal of Supercritical Fluids,2008, 45(3): 338-345. DOI:10.1016/j.supflu.2008.01.002.

    [22] THOMAS L V, DAVIES E A, DELVES-BROUGHTON J, et al. Synergist effect of sucrose fatty acid esters on nisin inhibition of Gram-positive bacteria[J]. Journal of Applied Microbiology, 1998,85(6): 1013-1022. DOI:10.1111/j.1365-2672.1998.tb05266.x.

    [23] TSUCHIDO T, YOKOSUKA N, TAKANO M. Isolation and characteristics of a Bacillus subtilis mutant tolerant to the lytic action of sucrose esters of long-chain fatty acids[J]. Journal of Fermentation and Bioengineering, 1993, 75(3): 191-195. DOI:10.1016/0922-338X(93)90114-N.

    [24] 李更更. 非水相酶催化合成脂肪酸酯及其抗菌性的研究[D]. 無錫:江南大學(xué), 2008: 28-41. DOI:10.7666/d.y1398705.

    [25] 羅春燕. 中碳鏈脂肪酸類食品添加劑的制備及性能研究[D]. 南昌:南昌大學(xué), 2011: 40-47. DOI:10.7666/d.y1943143.

    [26] 劉燕. 單中碳鏈脂肪酸甘油酯的制備及乳化和抑菌性能研究[D]. 南昌: 南昌大學(xué), 2011: 66-68. DOI:10.7666/d.y1942871.

    [27] 趙存洋. 單月桂酸甘油酯的抑菌性能及機(jī)理研究[D]. 南昌: 南昌大學(xué), 2013: 19-31. DOI:10.7666/d.Y2402753.

    [28] 李俊霖. 10-HDA對G+抑菌活性及機(jī)制的研究[D]. 濟(jì)南: 齊魯工業(yè)大學(xué), 2014: 35-36.

    [29] 侯占群, 高彥祥. 生物表面活性劑及其在食品工業(yè)中的應(yīng)用進(jìn)展[J].食品研究與開發(fā), 2010, 31(4): 170-174.

    [30] MOHAN P K, NAKHLA G, YANFUL E K. Biokinetics of biodegradability of surfactants under aerobic, anoxic and anaerobic conditions[J]. Water Research, 2006, 40(3): 533-540. DOI:10.1016/ j.watres.2005.11.030.

    [31] HANNUKSELA M, HAAHTELA T. Hypersensitivity reactions to food additives[J]. Allergy, 1987, 42(8): 561-575. DOI:10.1111/j.1398-9995.1987.tb00386.x.

    [32] 胡靜, 趙小慧, 朱春玉, 等. 槐糖脂對金黃色葡萄球菌的抑菌機(jī)理[J].食品科學(xué), 2012, 33(5): 33-36.

    Antimicrobial Properties and Stability of Galactosyl Monolaurin

    DIAO Mingming, QI Danping, ZHANG Chong, BIE Xiaomei, L? Fengxia, LU Zhaoxin, ZHAO Haizhen*
    (College of Food Science and Technology, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China)

    Antimicrobial properties and stability of galactosyl monolaurin were investigated in this study. The minimum inhibitory concentration (MIC) of galactosyl monolaurin against five bacteria and three fungi from foods were determined by doubling dilution method. Escherichia coli and Bacillus cereus were used as indicator bacteria to investigate the effects of temperature, pH, UV irradiation and salt concentration on the stability of galactosyl monolaurin. Results showed that galactosyl monolaurin could inhibit five tested bacteria and had little or no effect on the growth of three tested fungi. The MIC of galactosyl monolaurin against Pseudomouas fluorescens was 0.078 mg/mL, and the same MIC value of 0.156 mg/mL was observed against Escherichia coli, Bacillus subtilis, Bacillus cereus and Staphylococcus aureus. In the pH range of 5 to 8, the antibacterial activity of galactosyl monolaurin was stable. Temperature and UV irradiation showed little effect on the antimicrobial activity of galactosyl monolaurin. With increasing NaCl concentration, this antimicrobial activity decreased significantly.

    galactosyl monolaurin; antimicrobial activity; stability

    10.7506/spkx1002-6630-201615001

    TS202.3

    A

    1002-6630(2016)15-0001-06

    10.7506/spkx1002-6630-201615001. http://www.spkx.net.cn

    2015-11-11

    國家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目(31301558);中央高?;究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金項(xiàng)目(KJQN201427)

    刁明明(1991—),女,碩士研究生,研究方向?yàn)槭称飞锛夹g(shù)。E-mail:2013108058@njau.edu.cn

    趙海珍(1975—),女,副教授,博士,研究方向?yàn)槭称飞锛夹g(shù)。E-mail:zhaohz@njau.edu.cn

    引文格式:

    猜你喜歡
    單酯蠟樣半乳糖
    梅雨季節(jié),除了霉菌,還要小心它
    澤蘭多糖對D-半乳糖致衰老小鼠的抗氧化作用
    中成藥(2018年8期)2018-08-29 01:28:24
    新型表面活性劑檸檬酸單酯的溶液性能研究及其在凝膠油中的應(yīng)用
    黃芩-黃連藥對防治D-半乳糖癡呆小鼠的作用機(jī)制
    中成藥(2018年3期)2018-05-07 13:34:11
    半乳糖凝集素-3與心力衰竭相關(guān)性
    細(xì)菌型豆豉蠟樣芽孢桿菌的動態(tài)變化研究
    中國釀造(2016年12期)2016-03-01 03:08:09
    半乳糖凝集素-3在心力衰竭中的研究進(jìn)展
    酶法合成麥芽糖醇脂肪酸單酯的抑菌性*
    油脂類食品中脂肪酸單氯丙醇單酯和雙酯的分離測定
    超聲條件下蔗糖-6-月桂酸單酯及蔗糖-6’-月桂酸單酯的合成、純化與結(jié)構(gòu)鑒定
    一个人看视频在线观看www免费| 在线观看免费高清a一片| 亚洲成人久久爱视频| 久久精品国产a三级三级三级| 免费看不卡的av| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 欧美日韩在线观看h| 一级a做视频免费观看| 高清欧美精品videossex| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产免费一级a男人的天堂| 搡女人真爽免费视频火全软件| 成人漫画全彩无遮挡| 国产老妇伦熟女老妇高清| 中文在线观看免费www的网站| 亚洲色图av天堂| 亚洲精品自拍成人| 国产视频首页在线观看| a级毛色黄片| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 日韩一本色道免费dvd| 各种免费的搞黄视频| videossex国产| 国产精品久久久久久精品电影| 免费观看无遮挡的男女| 亚洲国产成人一精品久久久| 黄色一级大片看看| 日本午夜av视频| 国产精品女同一区二区软件| 亚洲精品456在线播放app| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产免费一级a男人的天堂| 五月玫瑰六月丁香| 简卡轻食公司| 免费看不卡的av| 男女啪啪激烈高潮av片| 成人漫画全彩无遮挡| 国产精品国产三级国产专区5o| a级一级毛片免费在线观看| 三级国产精品欧美在线观看| 亚洲精品色激情综合| 婷婷色综合www| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 波野结衣二区三区在线| 国产成年人精品一区二区| 亚洲精品国产av成人精品| 国产亚洲一区二区精品| 99热这里只有是精品在线观看| 麻豆国产97在线/欧美| 高清av免费在线| 九色成人免费人妻av| 国产av不卡久久| 国产黄a三级三级三级人| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 深爱激情五月婷婷| 久久6这里有精品| 亚洲精品国产av成人精品| 人妻少妇偷人精品九色| 一级黄片播放器| 晚上一个人看的免费电影| 又爽又黄a免费视频| 亚洲丝袜综合中文字幕| 白带黄色成豆腐渣| eeuss影院久久| 色播亚洲综合网| 亚洲久久久久久中文字幕| 一个人看的www免费观看视频| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 一区二区三区免费毛片| 日韩视频在线欧美| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 亚洲最大成人av| 国产精品国产三级国产专区5o| 中国美白少妇内射xxxbb| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 最近中文字幕高清免费大全6| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 欧美日韩综合久久久久久| www.色视频.com| 成人无遮挡网站| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 日本免费在线观看一区| 激情五月婷婷亚洲| 晚上一个人看的免费电影| 白带黄色成豆腐渣| 少妇的逼好多水| 丝袜脚勾引网站| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 3wmmmm亚洲av在线观看| 亚洲欧美清纯卡通| 免费看不卡的av| 亚洲自拍偷在线| 久久99热这里只频精品6学生| 国产精品国产三级国产专区5o| av黄色大香蕉| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产黄片美女视频| 边亲边吃奶的免费视频| 亚洲欧美精品专区久久| 搡女人真爽免费视频火全软件| 一边亲一边摸免费视频| 日本av手机在线免费观看| 亚洲国产最新在线播放| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 女人被狂操c到高潮| 国产大屁股一区二区在线视频| 亚洲精品一二三| 久久久久国产网址| 成人毛片a级毛片在线播放| 少妇丰满av| 好男人视频免费观看在线| 国产在线一区二区三区精| 国产av码专区亚洲av| 成人国产av品久久久| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产精品99久久久久久久久| 看非洲黑人一级黄片| 久久午夜福利片| 久久久a久久爽久久v久久| 中文天堂在线官网| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产久久久一区二区三区| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产亚洲91精品色在线| 亚洲成人一二三区av| 国产精品.久久久| 美女国产视频在线观看| av女优亚洲男人天堂| 国产在线男女| 搡女人真爽免费视频火全软件| 日韩免费高清中文字幕av| 亚洲丝袜综合中文字幕| 精华霜和精华液先用哪个| 欧美成人a在线观看| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 国内精品美女久久久久久| 国产精品爽爽va在线观看网站| 婷婷色av中文字幕| av.在线天堂| 麻豆国产97在线/欧美| 热re99久久精品国产66热6| h日本视频在线播放| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 国产午夜精品一二区理论片| 搡女人真爽免费视频火全软件| 99久国产av精品国产电影| 久久这里有精品视频免费| 国产精品福利在线免费观看| 亚洲国产高清在线一区二区三| 日韩av免费高清视频| 免费在线观看成人毛片| 99精国产麻豆久久婷婷| 亚洲精品色激情综合| 麻豆乱淫一区二区| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 99热这里只有是精品在线观看| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 日韩三级伦理在线观看| 午夜激情福利司机影院| 伊人久久精品亚洲午夜| 高清av免费在线| 亚洲成人一二三区av| 人体艺术视频欧美日本| 18禁在线播放成人免费| 久久久久久久亚洲中文字幕| 成人黄色视频免费在线看| 好男人视频免费观看在线| 久久这里有精品视频免费| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲无线观看免费| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 免费看日本二区| 国产熟女欧美一区二区| av一本久久久久| 午夜精品国产一区二区电影 | 午夜亚洲福利在线播放| 夜夜爽夜夜爽视频| 男女下面进入的视频免费午夜| 国产精品熟女久久久久浪| 亚洲国产精品999| 日本wwww免费看| 国产片特级美女逼逼视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 高清午夜精品一区二区三区| 视频中文字幕在线观看| 日韩视频在线欧美| 精品久久久久久电影网| 韩国高清视频一区二区三区| 永久免费av网站大全| 午夜亚洲福利在线播放| 国产成人精品一,二区| av播播在线观看一区| 好男人视频免费观看在线| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 两个人的视频大全免费| 大片免费播放器 马上看| 国产淫语在线视频| 99热网站在线观看| 免费在线观看成人毛片| 成人毛片60女人毛片免费| 日本av手机在线免费观看| 免费少妇av软件| 欧美日韩视频精品一区| 色婷婷久久久亚洲欧美| 精品酒店卫生间| 高清av免费在线| 午夜精品国产一区二区电影 | 亚洲va在线va天堂va国产| 午夜免费男女啪啪视频观看| 亚洲精品乱久久久久久| 高清毛片免费看| 91久久精品电影网| 春色校园在线视频观看| 亚洲在久久综合| av又黄又爽大尺度在线免费看| 成人鲁丝片一二三区免费| 国产精品久久久久久久电影| 国产av国产精品国产| 日韩电影二区| 少妇人妻久久综合中文| 91精品国产九色| 亚洲精品aⅴ在线观看| 日日摸夜夜添夜夜爱| 久久久精品免费免费高清| 国内揄拍国产精品人妻在线| 热re99久久精品国产66热6| 欧美xxⅹ黑人| 亚洲国产最新在线播放| 麻豆成人av视频| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 91精品国产九色| 日韩欧美 国产精品| 国精品久久久久久国模美| 可以在线观看毛片的网站| 国产伦精品一区二区三区视频9| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲av日韩在线播放| 国产av国产精品国产| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 一级片'在线观看视频| 成人亚洲精品av一区二区| 91久久精品电影网| 大香蕉97超碰在线| 国产精品一区二区在线观看99| 国产精品爽爽va在线观看网站| 真实男女啪啪啪动态图| 在线观看一区二区三区| 国产精品久久久久久久久免| 亚洲精品亚洲一区二区| 简卡轻食公司| 国产免费福利视频在线观看| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 久久亚洲国产成人精品v| av又黄又爽大尺度在线免费看| 中文字幕免费在线视频6| 中文字幕av成人在线电影| 最后的刺客免费高清国语| 麻豆成人av视频| 有码 亚洲区| 久久久久久久久久久丰满| 中文欧美无线码| 在线免费十八禁| 亚洲经典国产精华液单| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 久久久久久久久久成人| 嫩草影院精品99| 欧美一级a爱片免费观看看| 亚洲av成人精品一二三区| 三级国产精品片| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 亚洲国产成人一精品久久久| 亚洲熟女精品中文字幕| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产成人精品久久久久久| 国产成人免费无遮挡视频| 欧美高清成人免费视频www| 大码成人一级视频| 亚洲人成网站高清观看| 久久久久久久久大av| 亚洲av不卡在线观看| 2022亚洲国产成人精品| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产乱来视频区| 中文天堂在线官网| 国产淫片久久久久久久久| 久久女婷五月综合色啪小说 | 国产又色又爽无遮挡免| 激情五月婷婷亚洲| 赤兔流量卡办理| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 高清在线视频一区二区三区| 一区二区av电影网| 美女主播在线视频| 婷婷色av中文字幕| av在线观看视频网站免费| 国产精品一区www在线观看| 大陆偷拍与自拍| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 欧美日韩综合久久久久久| 久久久久久久精品精品| 高清视频免费观看一区二区| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 国产黄色免费在线视频| 水蜜桃什么品种好| 人体艺术视频欧美日本| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| www.av在线官网国产| 日韩强制内射视频| 国产又色又爽无遮挡免| 欧美少妇被猛烈插入视频| 99热这里只有是精品50| xxx大片免费视频| av在线app专区| 久久久久精品久久久久真实原创| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 亚洲,欧美,日韩| 久久ye,这里只有精品| 日韩电影二区| 亚洲国产欧美人成| 午夜免费观看性视频| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 91精品国产九色| 亚洲精品,欧美精品| 最近的中文字幕免费完整| 1000部很黄的大片| 国产亚洲精品久久久com| 插逼视频在线观看| 一区二区三区免费毛片| 插逼视频在线观看| 大香蕉97超碰在线| 我的老师免费观看完整版| 2021少妇久久久久久久久久久| h日本视频在线播放| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 三级经典国产精品| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 久久久久久伊人网av| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 少妇被粗大猛烈的视频| 午夜精品国产一区二区电影 | 三级国产精品片| 亚洲av国产av综合av卡| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 国产精品久久久久久久电影| 2021少妇久久久久久久久久久| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 春色校园在线视频观看| 成人毛片60女人毛片免费| 热99国产精品久久久久久7| 全区人妻精品视频| 99久国产av精品国产电影| 成年女人看的毛片在线观看| 国内精品宾馆在线| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 精品人妻熟女av久视频| 午夜福利在线在线| 啦啦啦啦在线视频资源| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲精品456在线播放app| 精品人妻视频免费看| 美女高潮的动态| av在线观看视频网站免费| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 成年女人看的毛片在线观看| 国产片特级美女逼逼视频| 国产高潮美女av| 国产淫片久久久久久久久| 永久免费av网站大全| 精品一区二区三区视频在线| 久久久久久九九精品二区国产| 乱系列少妇在线播放| 日韩欧美 国产精品| 午夜爱爱视频在线播放| 蜜臀久久99精品久久宅男| 青春草国产在线视频| 久久99蜜桃精品久久| 三级国产精品片| 亚洲真实伦在线观看| 人妻系列 视频| 蜜臀久久99精品久久宅男| 国产亚洲一区二区精品| 欧美bdsm另类| 亚洲精品一区蜜桃| xxx大片免费视频| 国产探花在线观看一区二区| 777米奇影视久久| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产精品人妻久久久影院| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产一区亚洲一区在线观看| 日韩视频在线欧美| 免费电影在线观看免费观看| 成人二区视频| 精品国产露脸久久av麻豆| 国产黄a三级三级三级人| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产成人午夜福利电影在线观看| 视频区图区小说| 麻豆成人午夜福利视频| 99久久九九国产精品国产免费| 91久久精品国产一区二区三区| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| av免费观看日本| 熟女人妻精品中文字幕| av天堂中文字幕网| 在线观看美女被高潮喷水网站| 成年女人在线观看亚洲视频 | 国产精品久久久久久久久免| 成人毛片60女人毛片免费| 一二三四中文在线观看免费高清| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频 | 久久99蜜桃精品久久| 久久久久网色| av.在线天堂| 久久6这里有精品| 色综合色国产| 日韩欧美精品免费久久| .国产精品久久| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 可以在线观看毛片的网站| 成人国产麻豆网| 亚洲综合精品二区| 国产成人一区二区在线| 一级毛片 在线播放| 欧美3d第一页| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 不卡视频在线观看欧美| 欧美少妇被猛烈插入视频| 久久久亚洲精品成人影院| 一级毛片我不卡| 亚洲av日韩在线播放| 少妇人妻精品综合一区二区| 美女主播在线视频| 免费黄频网站在线观看国产| 色哟哟·www| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 26uuu在线亚洲综合色| 日日啪夜夜爽| 夫妻午夜视频| 亚洲在久久综合| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 亚洲av日韩在线播放| 一级黄片播放器| 美女主播在线视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 久久久久久国产a免费观看| 欧美+日韩+精品| 大片免费播放器 马上看| 国产成人精品久久久久久| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 亚洲国产欧美在线一区| 亚洲精品一二三| 国产成人免费无遮挡视频| 免费观看av网站的网址| 久久久久国产精品人妻一区二区| 精品人妻视频免费看| 又爽又黄a免费视频| 日本三级黄在线观看| 大码成人一级视频| 人妻一区二区av| 毛片一级片免费看久久久久| 最近中文字幕2019免费版| 亚洲精品日本国产第一区| 久久99精品国语久久久| 亚洲国产精品国产精品| 久久久久久久午夜电影| 亚洲国产日韩一区二区| 毛片女人毛片| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 中文字幕免费在线视频6| 国产一区亚洲一区在线观看| av在线亚洲专区| 一个人观看的视频www高清免费观看| 欧美日韩综合久久久久久| 久久久久精品性色| 深夜a级毛片| 亚洲国产精品国产精品| 久久久精品94久久精品| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲欧美精品专区久久| 日日啪夜夜爽| 国产精品爽爽va在线观看网站| 精品酒店卫生间| 在线 av 中文字幕| 91aial.com中文字幕在线观看| 久久久久久久大尺度免费视频| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 国产淫语在线视频| av国产精品久久久久影院| 日本免费在线观看一区| 性色av一级| 成人国产麻豆网| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 天美传媒精品一区二区| 成人亚洲精品一区在线观看 | 美女视频免费永久观看网站| 最近最新中文字幕免费大全7| 欧美高清成人免费视频www| 毛片一级片免费看久久久久| 国产精品一区二区性色av| 超碰97精品在线观看| 丰满人妻一区二区三区视频av| 国产欧美日韩精品一区二区| 一二三四中文在线观看免费高清| 交换朋友夫妻互换小说| 极品教师在线视频| 亚州av有码| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 在线观看免费高清a一片| 91久久精品电影网| 国产精品蜜桃在线观看| 色吧在线观看| 免费av观看视频| 性插视频无遮挡在线免费观看| 亚洲精品aⅴ在线观看| 免费看av在线观看网站| 日韩大片免费观看网站| 久久久久久久久久成人| 日本欧美国产在线视频| 欧美日韩在线观看h| 久久久久久久亚洲中文字幕| 校园人妻丝袜中文字幕| 亚洲欧美精品自产自拍| 欧美 日韩 精品 国产| 一级片'在线观看视频| 免费大片黄手机在线观看| 男人和女人高潮做爰伦理| 欧美日韩在线观看h| 久久久久久久亚洲中文字幕| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产熟女欧美一区二区| 超碰97精品在线观看| 精品午夜福利在线看| 特级一级黄色大片| 一本一本综合久久| 只有这里有精品99| 高清毛片免费看| 国产亚洲最大av| 伦理电影大哥的女人| 亚洲国产色片| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲av中文字字幕乱码综合| videossex国产| 一区二区三区精品91| 观看免费一级毛片| 嫩草影院新地址| 制服丝袜香蕉在线| 亚洲国产成人一精品久久久| 亚洲国产欧美人成| 色网站视频免费| 美女高潮的动态| 国产亚洲91精品色在线| 成年版毛片免费区| 秋霞在线观看毛片| 爱豆传媒免费全集在线观看| 亚洲国产日韩一区二区| 日韩 亚洲 欧美在线| 精品一区二区免费观看| 在线播放无遮挡| 日韩免费高清中文字幕av| 亚洲熟女精品中文字幕| 成人欧美大片| 亚洲国产最新在线播放| 国产真实伦视频高清在线观看| 99热这里只有是精品50| 日日摸夜夜添夜夜爱| 亚洲av中文av极速乱| 真实男女啪啪啪动态图| 亚洲色图综合在线观看| 久久热精品热| 乱码一卡2卡4卡精品| 最近中文字幕高清免费大全6| 午夜福利高清视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 久久久久久久精品精品| 久久热精品热| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 久久久久久久精品精品| 日韩人妻高清精品专区| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 在线观看美女被高潮喷水网站| 大话2 男鬼变身卡| 丝瓜视频免费看黄片| 激情 狠狠 欧美| 高清午夜精品一区二区三区| 欧美 日韩 精品 国产| 亚洲精品国产成人久久av| 久久久久久久久久人人人人人人| 久久久久国产精品人妻一区二区| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 久久久成人免费电影| 高清视频免费观看一区二区| 国产人妻一区二区三区在| 久久99热这里只有精品18| 人妻一区二区av| 久久久久网色| 国产成人91sexporn| 天天一区二区日本电影三级| 国产精品一区www在线观看| 少妇人妻久久综合中文| 特级一级黄色大片| 亚洲欧美一区二区三区国产|