掌跖膿皰病患者血清中腫瘤壞死因子α、白細(xì)胞介素17、22和白細(xì)胞介素17F水平的研究

孫昂遠(yuǎn) 劉越陽 李鐵男 孫曉冬 孫曉杰 陳晴燕 王強(qiáng)

掌跖膿皰病是一種病因不明，僅發(fā)于掌跖的慢性復(fù)發(fā)性無菌性膿皰性皮膚病。研究證實(shí)［1］，免疫功能紊亂在掌跖膿皰病的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。有報(bào)道Th17細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子白細(xì)胞介素（IL）17參與銀屑病的病理生理過程，隨后有研究表明，掌跖膿皰病患者血清和皮損中IL-17和IL-22表達(dá)增加［2］。本研究采用ELISA法檢測(cè)掌跖膿皰病活動(dòng)期和靜止期患者血清中IL-17相關(guān)細(xì)胞因子水平，探討它們與掌跖膿皰病發(fā)病的關(guān)系。

一、資料與方法

1.臨床資料：選取沈陽市第七人民醫(yī)院皮膚科門診和病房經(jīng)臨床或病理確診的30例掌跖膿皰病患者和20例健康人對(duì)照作為研究對(duì)象。所有患者均符合掌跖膿皰病的診斷［3］，男4例，女26例，年齡（45±12）歲，病程中位數(shù)為2年。納入標(biāo)準(zhǔn)：疾病處于活動(dòng)期（指原皮疹未消，新膿皰不斷出現(xiàn)，反復(fù)發(fā)作），入組前3個(gè)月內(nèi)未接受治療，未使用生物制劑、免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素和維A酸類制劑，且均無其他系統(tǒng)性疾病，未合并其他自身免疫性疾病。入組患者前4周口服我院協(xié)定方掌跖膿皰湯（遼藥制字z04010078號(hào)：金銀花15 g、連翹 15 g、黃芩 10 g、紫花地丁 15 g、公英 15 g、重樓 30 g、生地 15 g、丹皮 10 g、赤芍 10 g、黃芪 15 g、甘草 10 g），對(duì)停服掌跖膿皰湯后1～2周有新發(fā)膿皰的患者，給予阿維A和窄譜中波紫外線聯(lián)合治療2～4周；患者終止治療后無新發(fā)皮疹時(shí)間達(dá)1個(gè)月以上即判為靜止期（指皮疹消退，無新發(fā)膿皰時(shí)間達(dá)1個(gè)月以上）。健康人對(duì)照組均來自我院健康體檢者，男2例，女18例，年齡（42±14）歲。兩組間性別構(gòu)成比及年齡分布差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究經(jīng)沈陽市第七人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，受檢者均簽署知情同意書。

2.主要試劑與儀器：人TNF-α、IL-17、IL-22和IL-17F ELISA試劑盒均為美國RayBiotech公司產(chǎn)品，酶標(biāo)儀ST-360為上?？迫A生物工程股份有限公司產(chǎn)品。

3.ELISA 法檢測(cè)血清中 TNF-α、IL-17、IL-22、IL-17F 含量：抽取外周靜脈血5 ml，室溫下充分凝血，離心分離血清存于-80℃冰箱。根據(jù)ELISA檢測(cè)結(jié)果的A值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，換算出細(xì)胞因子濃度。

4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS17.0軟件，細(xì)胞因子檢測(cè)結(jié)果非正態(tài)分布，以中位數(shù)（M）（P25～P75）表示，采用配對(duì)秩和檢驗(yàn)比較患者組靜止期與活動(dòng)期細(xì)胞因子水平的差異，Mann-WhitneyU檢驗(yàn)比較組間的差異，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果

各組血清 TNF-α、IL-17、IL-22、IL-17F 水平的比較：掌跖膿皰病患者組活動(dòng)期外周血TNF-α、IL-17、IL-22表達(dá)水平分別高于靜止期（T值分別為 1.5、2.0、3.0，均P＜ 0.05）和對(duì)照組（u值分別為 4.17、3.84、4.69，均P＜ 0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；靜止期也顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（u值分別為 2.71、3.53、2.18，均P＜ 0.05）。但掌跖膿皰病患者活動(dòng)期外周血IL-17F表達(dá)水平分別與靜止期（T=76，P＞0.05）、對(duì)照組（u=0.98，P＞ 0.05）比較，及靜止期與對(duì)照組相比（u=1.37，P＞0.05），差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

三、討論

目前研究認(rèn)為，掌跖膿皰病與扁桃體炎、牙周炎、金屬過敏、吸煙、血漿鈣離子失衡等有關(guān)，但確切病因仍不清楚。Skov等［4］發(fā)現(xiàn)，掌跖膿皰病皮損中IL-8濃度異常升高，采用IL-8單抗HuMab10F8治療能阻斷依賴IL-8的中性粒細(xì)胞活化和遷移，皮損中IL-8濃度快速下降，新生膿皰減少50%以上，表明IL-8在掌跖膿皰病發(fā)病過程中發(fā)揮作用。Ozawa等［5］研究了尋常性銀屑病和掌跖膿皰病皮損中IL-8和補(bǔ)體成分的定位，認(rèn)為中性粒細(xì)胞沿IL-8的濃度梯度遷移入表皮內(nèi)，之后在補(bǔ)體成分引導(dǎo)下到達(dá)皮損的角質(zhì)層下。由此我們推測(cè)，與中性粒細(xì)胞趨化募集相關(guān)的免疫機(jī)制和細(xì)胞因子在掌跖膿皰病的發(fā)病機(jī)制中可能發(fā)揮重要作用。

Hagforsen等［1］研究表明，促炎介質(zhì)表達(dá)量在掌跖膿皰病患者皮損膿皰和末端汗管內(nèi)或附近部位增高，其中IL-17表達(dá)水平異常增高，掌跖膿皰部位朗格漢斯細(xì)胞的浸潤(rùn)也明顯增多，CD4+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、朗格漢斯細(xì)胞在掌跖膿皰病患者的非皮損部位也較健康對(duì)照者明顯增多。IL-17的主要生物學(xué)功能是促進(jìn)炎癥反應(yīng)，在中性粒細(xì)胞募集方面有重要作用。其主要由Th17細(xì)胞分泌，而后者也可產(chǎn)生IL-17F、IL-22、IL-21和IL-23，這些細(xì)胞因子很可能協(xié)同誘導(dǎo)許多炎癥反應(yīng)，對(duì)表皮、內(nèi)皮、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)和功能產(chǎn)生影響［6］。IL-17相關(guān)性細(xì)胞因子包括 IL-17、IL-22、TNF-α、IL-23、IL-8、干擾素γ（IFN-γ）。IL-17參與銀屑病的病理生理過程，IL-17/IL-17F通過釋放CXC趨化因子促進(jìn)中性粒細(xì)胞募集、活化和遷移，也能上調(diào)病變部位IL-8的表達(dá)，且IL-17和IFN-γ可增強(qiáng)角質(zhì)形成細(xì)胞產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子，包括合成和分泌IL-8［7］。Watanabe 等［8］體外研究表明，IL-17F 可以時(shí)間依賴的方式刺激正常人角質(zhì)形成細(xì)胞產(chǎn)生IL-8，并且比TNF-α和IL-17A作用更強(qiáng)，因此認(rèn)為IL-17F是一種選擇性中性粒細(xì)胞趨化劑，趨化和激活中性粒細(xì)胞參與炎癥反應(yīng)。IL-17A刺激角質(zhì)形成細(xì)胞產(chǎn)生趨化因子、細(xì)胞因子和促炎介質(zhì)，由此可通過固有免疫和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)共同導(dǎo)致慢性炎癥［9］。IL-22主要由Th17和Th22產(chǎn)生，它能誘導(dǎo)產(chǎn)生CCL20從而募集表達(dá)CCR6的Th22、Th17和樹突細(xì)胞，可增強(qiáng)角質(zhì)形成細(xì)胞過度表達(dá)中性粒細(xì)胞的趨化因子CXCL1、CXCL5和CXCL8。TNF-α通過增加IL-22R和STAT3的表達(dá)，從而通過協(xié)同作用趨化中性粒細(xì)胞［10-11］，而激活的中性粒細(xì)胞也可分泌IL-17A和IL-17F加重炎癥反應(yīng)［12］。IL-22協(xié)同IL-17A和IL-17F增強(qiáng)角質(zhì)形成細(xì)胞表達(dá)抗微生物肽，促進(jìn)上皮細(xì)胞表達(dá)趨化因子如IL-8。IL-22的某些功能可以被IL-17A、IL-17F 和 TNF-α 協(xié)同或抑制［13-14］。因此，TNF-α、IL-17、IL-22、IL-17F和角質(zhì)形成細(xì)胞之間相互作用可能參與中性粒細(xì)胞趨化募集和慢性炎癥。

表1 掌跖膿皰病患者血清腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細(xì)胞介素（IL）17、IL-22和IL-17F水平［中位數(shù)（P25～P75）］ ng/L

本研究發(fā)現(xiàn)，掌跖膿皰病患者活動(dòng)期外周血TNF-α、IL-17和IL-22表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組，這一結(jié)果與Murakami等［2］研究一致，同時(shí)也顯著高于靜止期水平，表明掌跖膿皰病患者外周血TNF-α、IL-17和IL-22表達(dá)水平和疾病活動(dòng)有關(guān)，在掌跖膿皰病的發(fā)病機(jī)制中可能發(fā)揮重要作用。本研究還發(fā)現(xiàn)，掌跖膿皰病患者靜止期外周血TNF-α、IL-17和IL-22表達(dá)也顯著高于健康對(duì)照組，提示掌跖膿皰病患者即使在靜止期也存在免疫異常，可能在各種復(fù)雜的內(nèi)外因素刺激下加重免疫紊亂而再次復(fù)發(fā)。雖然研究證實(shí)IL-17F是一種選擇性中性粒細(xì)胞趨化劑，但本研究結(jié)果顯示，各組IL-17F含量均較低，且無明顯差異。而Murakami等［2］應(yīng)用RT-PCR研究掌跖膿皰病患者皮損組織中IL-17F mRNA較對(duì)照組顯著上調(diào)，我們推測(cè)IL-17F可能在皮損部位表達(dá)，參與本病發(fā)病過程。

綜上所述，我們推測(cè)掌跖膿皰病患者外周血TNF-α、IL-17和IL-22可能參與掌跖膿皰病的發(fā)病過程，其機(jī)制可能與中性粒細(xì)胞的趨化募集有關(guān)，但具體機(jī)制還需深入研究。

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