泡椒鳳爪中雙氧水含量測定及對1型糖尿病人的健康影響

宋雅文 江龍 謝雪 王鐵霖 馬嘉瑜 曹瑩月 母波

川北醫(yī)學(xué)院，四川南充 637000

泡椒鳳爪中雙氧水含量測定及對1型糖尿病人的健康影響

宋雅文 江龍 謝雪 王鐵霖 馬嘉瑜 曹瑩月 母波

川北醫(yī)學(xué)院，四川南充 637000

目的該研究通過測定市場散售泡椒鳳爪中雙氧水含量殘留，觀察其對糖尿病小鼠器官造成的影響來判定泡椒鳳爪中殘留的雙氧水是否對糖尿病人健康有影響。方法通過高錳酸鉀滴定法檢測市場散售鳳爪中的雙氧水的殘留含量，并以不同濃度（1.0%、10%、15%）的雙氧水處理1型糖尿病模型小鼠兩周，斷頸法處死小鼠，摘取各組小鼠的腎臟，脾臟，胃部，肝臟制作病理切片。觀察不同組的炎癥反應(yīng)情況，血糖及細(xì)胞形態(tài)的改變。結(jié)果糖尿病小鼠飼喂不同濃度的雙氧水后均造成血糖濃度明顯升高，其中用15%的雙氧水飼喂的糖尿病小鼠血糖濃度升高了33%。HE染色病理切片，鏡下觀察，雙氧水濃度越高對糖尿病小鼠臟器損傷越嚴(yán)重，且胃腸道、腎臟、肝臟損害較重，但所有實驗組未見到細(xì)胞形態(tài)明顯改變。結(jié)論市場散售泡椒鳳爪中雙氧水殘留含量達(dá)到1.0%，濃度高于1.0%的雙氧水對1型糖尿病小鼠肝臟、腎臟具有較為明顯損害，損傷主要表現(xiàn)為臟器組織炎癥反應(yīng)，并未見細(xì)胞形態(tài)明顯改變。

泡椒鳳爪；雙氧水；四氧嘧啶；血糖

近年來，泡椒鳳爪深受大家喜愛，但市場上銷售的泡椒鳳爪雙氧水殘留含量并無明確標(biāo)示。根據(jù)我國食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，國家已明令禁止在食品加工中使用工業(yè)雙氧水,食品在出廠前必須要把過氧化氫成分全部分解掉或除掉，成品不得檢出有殘留。雖然現(xiàn)在食品添加劑過氧化氫已廣泛應(yīng)用于食品加工，然而，食品級雙氧水的生產(chǎn)成本遠(yuǎn)高于工業(yè)級雙氧水。一些不法商人趁機(jī)用工業(yè)級雙氧水代替食品級雙氧水[1]。研究表明工業(yè)雙氧水含有砷、重金屬等多種有害物質(zhì)，也會嚴(yán)重危害食用者的健康[2]。但是對各個臟器是否具有損傷研究較少，特別是對糖尿病患者的影響未見報道。我國目前約有3千萬糖尿病患者，隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展和生活方式的改變有明顯增加趨勢[3]。因此，對于研究食品中雙氧水含量殘留對糖尿病患者健康的影響，指導(dǎo)糖尿病患者的飲食尤為重要。該實驗通過四氧嘧啶建造糖尿病小鼠模型，并用不同濃度雙氧水飼喂糖尿病模型小鼠，研究泡椒鳳爪雙氧水殘留對糖尿病患者的危害并為其飲食提供相應(yīng)的指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

泡椒鳳爪150 g(0.1 mol/L高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液，用0.1 mol/L草酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定。過氧化氫標(biāo)準(zhǔn)溶液：吸取35 mL 30%過氧化氫（分析純）溶液用蒸餾水稀釋至1 L。

用草酸標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定。

1.2 實驗試劑

1.0 %，10%，15%的雙氧水溶液，四氧嘧啶主要儀器:血糖儀，血糖試紙，電子分析天平，真空泵，離心機(jī)（3000轉(zhuǎn)/分），酸式滴定管、電爐。

1.3 方法

取3份樣品，每份5 g,第1份不經(jīng)加熱處理，第2份加熱除去雙氧水，第3份加熱蒸餾取餾出液測定,前兩份樣品消耗高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液量的差再減去第3份試樣所消耗的高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，計算出雙氧水的含量[4]。

2 實驗動物與分組

2.1 分組

雌性昆明小鼠24只，重量30～35 g，生理狀況基本相同，健康狀況也基本一致的成年昆明小鼠，普通環(huán)境喂飼，并分為空白組及A～F共8個組。

2.2 試驗方法

四氧嘧啶致糖尿病雄性小鼠病死率高于雌性小鼠，故用雌性小鼠造四氧嘧啶糖尿病小鼠模型病死率更低.將選定的雌性小鼠，隨機(jī)均分為八組小鼠，每組3只。編為空白對照組及A,B,C,D, E,F，適應(yīng)性喂養(yǎng)四天，禁食12 h。分別用浸泡了1.0%，10%，15%,的雙氧水的飼料飼分別飼喂A,B,C組，用150 mg/kg的四氧嘧啶溶液一次性腹腔注射D,E,F組，72 h后禁食不禁水，尾靜脈采血，測定血糖，挑選出血糖高于11.1 mmol/L的小鼠，分別用浸泡了1.0%，10%，15%,的雙氧水的飼料飼喂D,E,F組；放在條件相同且適宜的普通環(huán)境中飼喂兩周。兩周后進(jìn)行體檢。并連續(xù)幾天用血糖儀記錄觀察其血糖濃度變化情況。兩周后，將各組小鼠稱重后，處死用福爾馬林液固定其脾臟，腎臟，肝臟，胃作HE切片，脫水，透明，浸蠟包埋，制成4 um厚石蠟切片并用HE染色。顯微鏡下觀察小鼠各組織切片的病理變化，各組小鼠不同器官的炎癥反應(yīng)及損傷程度，以及有無細(xì)胞異形性，并記錄下來。

表1 各組小鼠器官組織HE切片病理變化

3 實驗結(jié)果

測得樣品中雙氧水的濃度為1.08%。過氧化氫檢驗管樣品陽性，呈橙黃色。高倍顯微鏡下可見各組處理過的小鼠臟器大小不一的炎性病灶，可見各組小鼠都是以肝臟，腎臟損傷為主，其腎臟，肝臟HE病理切片較為典型（見圖1～4），各組小鼠各器官組織切片病理變化均有明顯改變（見表1），并且高血糖組對雙氧水損傷更敏感（見圖5）。

圖1

圖2

圖3

圖4

注：圖1:E組小鼠腎小球結(jié)構(gòu)幾乎消失。上皮細(xì)胞足突增寬，部分融合，微絨毛化。大量淋巴細(xì)胞侵潤（HE×400）；圖2：F組小鼠系膜區(qū)增寬,系膜基質(zhì)增多。腎小球基底膜增厚，腎小管水腫，血管擴(kuò)張明顯，大量淋巴細(xì)胞浸潤（HE×400）；圖3：E組小鼠部分肝細(xì)胞水腫，有大量中性粒細(xì)胞，淋巴細(xì)胞侵潤（HE×400）；圖4：F組小鼠肝細(xì)胞水腫明顯，炎細(xì)胞浸潤明顯。伴有大量淋巴細(xì)胞浸潤（HE×400）

圖5 濃度H2O2喂養(yǎng)小鼠前后2周血糖濃度變化

4 討論

市場上銷售的泡椒鳳爪添加的雙氧水超標(biāo),長期攝入后對胃腸道，肝腎造成損傷。通過研究市面上大家喜愛的小吃雙氧水的殘留對糖尿病患者健康的影響，對指導(dǎo)糖尿病患者的飲食極為重要。實驗可得，1.0%的雙氧水溶液就可對小鼠肝臟和腎臟造成炎癥損傷且使糖尿病組小鼠血糖升高明顯。而濃度越高的雙氧水對器官損傷越大。其中用15%的雙氧水處理的糖尿病小鼠2周后的血糖濃度升高了33%。高倍顯微鏡下可見各組處理過的小鼠肝腎切片有大小不一的炎性病灶，肝細(xì)胞水腫明顯，有淋巴細(xì)胞浸潤，而高血糖出現(xiàn)肝細(xì)胞脂肪變；腎小球數(shù)量明顯下降，腎髓質(zhì)炎細(xì)胞浸潤并且腎小管擴(kuò)張水腫。而糖尿病小鼠對雙氧水更敏感，但具體機(jī)制尚不清楚，其分子生物學(xué)機(jī)制方面有待進(jìn)一步研究。而最近越來越多的研究表明1型糖尿病是一種T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫疾病，胰島β細(xì)胞受到自身免疫破壞而不能合成和分泌胰島素,臨床癥狀較嚴(yán)重。大量研究表明,1型糖尿病的發(fā)病機(jī)制與β細(xì)胞自身抗原、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞等有關(guān)[11]，故可以類比雙氧水的作用機(jī)制是產(chǎn)生特定的氧自由基或刺激過度活化的T,B細(xì)胞，同時使肝，腎等器官中的SOD含量降低，從而進(jìn)一步使胰島B細(xì)胞受損，有可能與臭氧和NO2對細(xì)胞膜毒害有關(guān)，臭氧攻擊RNA、DNA，在NO2和紫外線作用下生成亞氨基氧基、硝氧基自由基來攻擊細(xì)胞膜。建議有慢性肝腎疾病或糖尿病患者盡量避免食用泡椒鳳爪。

[1]胡民主.工業(yè)級雙氧水在食品加工中的檢測[J].恩施職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報，2012（4）.

[2]覃大元，劉興舉，李波.食品中雙氧水殘留含量的快速測定[J].食品安全導(dǎo)刊，2013（5）.

[3]彭乙華，曾恒禮，蔣紅．苦碟子對人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞株HUVEC生長的影響[J].川北醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2011，26（6）：480-482．

R587.1

A

1672-4062（2015）02（b）-0235-02

2014-11-26）

國家自然科學(xué)基金（81101733），四川省教育廳重點項目（10ZA168），川北醫(yī)學(xué)院科研發(fā)展計劃項目（MP-ZK-01）。

母波，男，博士，主要從事細(xì)胞遺傳學(xué)研究，單位：川北醫(yī)學(xué)院生物醫(yī)學(xué)院教研室。

宋雅文，女，本科，川北醫(yī)學(xué)院。