1例雞大腸桿菌病的診治

樊三忠

江蘇省揚州市廣陵區(qū)畜牧獸醫(yī)站，江蘇揚州 225001

1例雞大腸桿菌病的診治

樊三忠

江蘇省揚州市廣陵區(qū)畜牧獸醫(yī)站，江蘇揚州 225001

雞大腸桿菌病是由某些血清型大腸埃希氏菌引起的一種細菌性傳染病，嚴重危害養(yǎng)雞業(yè)，可導(dǎo)致雞發(fā)生一系列疾病，如敗血癥、臍炎、胚胎死亡、肉芽腫、卵黃性腹膜炎和眼炎等，給養(yǎng)雞戶帶來了巨大的經(jīng)濟損失。本文以1例雞大腸桿菌病為例，通過臨床癥狀、病理剖檢進行觀察，并結(jié)合實驗室診斷方法對細菌進行分離鑒定。

雞大腸桿菌；診斷；治療

1894年，Ligniers首次報道雞大腸桿菌病，此后，許多國家和地區(qū)都有報道本病發(fā)生[1-2]。首先David 和Twisselman報道了由腸桿狀微生物引起的禽類感染，后來Wasserman等和Fahey分別在雞“氣囊病”病例中發(fā)現(xiàn)并分離出了大腸桿菌[3]。隨著20世紀80年代的集約化養(yǎng)禽業(yè)的不斷發(fā)展，該病在養(yǎng)禽業(yè)中已被列為重要細菌病，嚴重威脅著禽業(yè)的發(fā)展[4]。建立正確地診治禽大腸桿菌病方法，是基層獸醫(yī)工作者的重要研究課題。本文就臨床1例雞大腸桿菌病進行了細菌學(xué)診斷及治療，取得了很好的效果。

1 材料與方法

1.1 材 料

1）菌株來源于江蘇省揚州市廣陵區(qū)畜牧獸醫(yī)站，解剖來自廣陵區(qū)某養(yǎng)殖戶的疑似大腸桿菌病死雞，無菌采集心、肝等病料。

2）培養(yǎng)基。麥康凱瓊脂，普通營養(yǎng)瓊脂，三糖鐵瓊脂，血培養(yǎng)基，LB培養(yǎng)基。

3）主要試劑。麥芽糖、葡萄糖、甘露醇、乳糖、蔗糖、枸櫞酸鹽、側(cè)金盞花醇等細菌生化微量管（購自杭州天和微生物試劑有限公司）。草酸銨結(jié)晶紫染液、95%的乙醇溶液、盧戈碘液、番紅復(fù)染液、歐立希氏（Ehrlich’s）試劑，V-P試劑，M.R試劑。

4）藥敏紙片。復(fù)方新諾明（23.75/1.25）、左氧氟沙星（5 μg）、鏈霉素（10 μg）、氯霉素（30 μg）、四環(huán)素（30 μg）、慶大霉素（30 μg）、環(huán)丙沙星（5 μg）、多粘菌素（300 IU）、強力霉素（30 μg）、磺胺甲基異噁唑（300 μg）（購自杭州天和微生物試劑有限公司）。

5）大腸桿菌標準抗O因子血清、大腸桿菌O抗原單因子和多因子血清（購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所）。

1.2 方 法

1）細菌分離培養(yǎng)。對無菌采集的心、肝臟樣品，進行大腸桿菌的分離培養(yǎng)，對單個典型菌落進行純培養(yǎng)并凍干保存。

2）革蘭氏染色鏡檢。用接種環(huán)蘸取少許生理鹽水于潔凈玻片上，再挑取適量的分離細菌純培養(yǎng)與玻片上的生理鹽水混合，均勻涂布，自然干燥后用火焰固定，在玻片上滴加草酸銨結(jié)晶紫染液，作用1～3 min后，水洗，加盧戈碘液于玻片上媒染，作用1 min后，水洗，再加95%酒精溶液脫色，作用15～30 s后水洗，最后加番紅復(fù)染液復(fù)染1 min后，水洗，自然晾干后鏡檢，觀察細菌染色與形態(tài)。

3）大腸桿菌生化試驗。取分離的細菌分別接種三糖鐵瓊脂斜面，37℃培養(yǎng)24～48 h后觀察斜面與底部的顏色變化以及產(chǎn)氣情況，并對分離株進行麥芽糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖、甘露醇、側(cè)金盞花醇、吲哚、M.R、V-P、枸櫞酸鹽10項生化指標的測定。

4）大腸桿菌O血清型的鑒定。

①凝集原的制備。挑取普通瓊脂平板上的純培養(yǎng)物，接種至營養(yǎng)肉湯，37℃，震蕩培養(yǎng)24 h，然后挑取一環(huán)營養(yǎng)肉湯的培養(yǎng)物，劃線接種至麥康凱瓊脂平板，37℃培養(yǎng)箱，靜置培養(yǎng)24 h，挑取麥康凱瓊脂平板上2～3個典型菌落再接種到普通瓊脂斜面，37℃靜置培養(yǎng)24 h，然后，用2 mL 0.5%石炭酸生理鹽水將普通瓊脂斜面上的菌苔洗脫下來，通過121℃高壓滅菌器高壓2 h的方式來除去K抗原和H抗原的O不凝集性，隨后制成濃稠的O凝集原，滅菌前菌液濃度大約為1010菌落形成單位（cfu/mL）。

②玻板凝集試驗。在一潔凈的玻片上滴1滴制備好的凝集原，再用接種環(huán)挑取1環(huán)多價因子血清，充分混勻，涂成大小為1.5 cm的圓圈，輕輕搖動玻片，30 s后若出現(xiàn)明顯凝集的現(xiàn)象可判定為陽性反應(yīng)。同時以生理鹽水代替多家因子血清混合菌懸液作對照，觀察是否出現(xiàn)自凝現(xiàn)象。重復(fù)以上操作，然后使每一O凝集原與多因子血清內(nèi)的每一單價因子血清再作進一步的凝集試驗，從而確定每株大腸桿菌的具體血清型。

5）藥敏試驗。采用紙片擴散法（Kirby-Bauer），即將含有不同濃度的抗菌藥物的紙片置于平板培養(yǎng)基上，平板已接種了被檢菌，抗菌藥物向周圍擴散，因此在藥敏紙片的周圍會出現(xiàn)抑菌圈，被檢菌對該種抗菌藥物的敏感性與抑菌圈的大小成正相關(guān)，根據(jù)抑菌圈的大小，判斷該菌對各種藥物的敏感程度。判斷標準為抑菌圈直徑大于20 mm為高度敏感，20～15 mm為中度敏感，15～10 mm為低度敏感，小于10 mm為耐藥。

在麥康凱瓊脂平板上用滅菌接種環(huán)挑取一典型大腸桿菌單菌落，在LB培養(yǎng)基表面作致密劃線。用無菌小鑷子將上述12種已滅菌的藥敏試紙貼于瓊脂平板表面，輕壓與平板表面緊貼，且不能再移動，然后將平板倒置于37℃培養(yǎng)箱，靜置培養(yǎng)后取出觀察結(jié)果。各紙片中心相距應(yīng)該大于24 mm，紙片距離平板內(nèi)緣應(yīng)大于15 mm。

2 結(jié)果

2.1 病理剖檢

病死雞剖檢后可見纖維素性心包炎，心包膜明顯增厚，并有黃色或白色纖維素性附著物（圖1），肝臟發(fā)生腫大，且其表面附著纖維素樣物（圖2）。

圖1 嚴重的心包炎

圖2 嚴重的肝周炎

2.2 細菌分離

經(jīng)過37℃/24 h培養(yǎng)后，在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上形成粉紅色、光滑濕潤、圓形隆起、邊緣整齊、中等大小的菌落（圖3）；使三糖鐵瓊脂斜面培養(yǎng)基斜面和底部均由原來的紅色變?yōu)辄S色，并且底部有氣泡產(chǎn)生。培養(yǎng)物涂片后經(jīng)革蘭氏染色并鏡檢，可觀察到兩端鈍圓、間或細長、呈兩極著色的革蘭氏陰性短桿菌，多呈單個或成對出現(xiàn)。另外，分離菌均無芽孢（圖4）。

圖3 細菌在麥康凱培養(yǎng)基上形態(tài)

圖4 顯微鏡下觀察的G-桿菌

2.3 生化試驗結(jié)果

生化試驗結(jié)果見表1，其生化試驗結(jié)果符合大腸埃希氏菌的生化特性，可基本判定此次分離到的菌株為大腸桿菌。

表1 生化試驗結(jié)果1）

2.4 分離株O血清型分析

通過玻板凝集試驗，測定該大腸桿菌分離株的血清型為O2。

2.5 藥敏試驗

本試驗選用10種抗生素進行耐藥性檢測，結(jié)果見表2。

表2 大腸桿菌藥敏試驗結(jié)果

在供試的10種抗生素中，受試菌株對左氧氟沙星、慶大霉素和多粘菌素都敏感，左氧氟沙星最敏感，而對其他幾種抗生素則有耐藥性。

2.6 治療結(jié)果

治療本病用0.1%氟哌酸飲水，連飲3～5 d；硫酸慶大霉素肌肉注射，按5 000 U/kg連續(xù)注射3～5 d；3 d后，死亡率減少，5 d后治愈，治愈率達95%。

3 討 論

帶來了嚴重的阻礙。作為基層獸醫(yī)工作者，對目前臨床上大腸桿菌進行耐藥情況普查，以便正確指導(dǎo)臨床用藥很有必要。如果能夠在臨床的實際用藥中采取交叉、輪換、聯(lián)合等用藥方式，同時制定合理的治療程序，將會大大減少大腸桿菌產(chǎn)生耐藥性的機會，從而達到相對較好的防制效果。

雞大腸桿菌病重在預(yù)防，應(yīng)減少飼料和飲水的污染，尤其飲水器，適當(dāng)增加葡萄糖等。更應(yīng)注意洗刷和消毒，用具及環(huán)境要經(jīng)常徹底消毒。搞好種蛋及孵化器的清潔衛(wèi)生和消毒工作，加強飼養(yǎng)管理[5]。

雞大腸桿菌病是一種常見病和多發(fā)病，由致病性大腸埃希氏菌感染而引起的。大腸桿菌病屬于條件性疾病，而大腸桿菌普遍存在，因此，當(dāng)雞群飼養(yǎng)密度大，疾病干擾，氣候突變，應(yīng)激因素存在時，便會造成本病暴發(fā)流行。另外，由于集約化養(yǎng)雞業(yè)不斷發(fā)展，使得該病的發(fā)病率和死亡率隨之增加，嚴重導(dǎo)致家禽生產(chǎn)性能的下降，給養(yǎng)禽業(yè)造成重大損失。

本試驗中的10種抗生素均為革蘭氏陰性菌敏感的代表藥物。結(jié)果顯示臨床上大腸桿菌的耐藥現(xiàn)象已十分顯著，這給家禽養(yǎng)殖業(yè)大腸桿菌病的防治

[1] 崔治中.獸醫(yī)全攻略雞病[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2009：194-195.

[2] 劉振湘，姚衛(wèi)東.畜禽傳染病[M].北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2008：219-223.

[3]俆建義.禽病防治[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2006：86-93.

[4]臧素敏.養(yǎng)雞與雞病防治[M].北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2012：120-124.

[5]黃炎坤，趙云煥.養(yǎng)雞實用新技術(shù)大全[M].北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2011：167-172.

疫苗注射部位不準確效果差

疫苗能否產(chǎn)生足夠的免疫力與注射方法有很大關(guān)系，有些疫苗要求肌肉注射，有些疫苗需要皮下注射，有些要求后海穴注射，因為這樣做才能發(fā)揮疫苗的最佳效果。但在生產(chǎn)上并沒有完全做到，特別是在豬沒有保定好的情況下打飛針，很難掌握準確的部位，可能注入肌肉，也可能注入脂肪，也可能注入皮下，這樣疫苗的效果要大打折扣。比如需要肌肉注射的疫苗，在肌肉內(nèi)很容易吸收，但如注入脂肪，疫苗長時間不能吸收，在體溫38℃的高溫下，疫苗很快會失效，也就起不到免疫的效果了。

所以，在給仔豬和后備豬注射疫苗時必須將豬保定好。育肥豬也像后備豬一樣固定是不現(xiàn)實的，因為數(shù)量太大，會花費太大的工作量；而如果打飛針則往往會使部分豬的注射失敗或效果不理想，所以尋找一種可操作的方法非常必要。

在生產(chǎn)中，可以在1個小圈里，幾個飼養(yǎng)人員用1個鐵欄桿將豬擠到1個角落或邊上，因豬擠在一起時不易活動，特別是豬頭都要抬起來，很容易固定部位打針。大一些的保育豬也可以這樣操作。

來源：金河動保網(wǎng)

2015-10-27

樊三忠，1970年生，男，獸醫(yī)師。