一種泛酸鈣含量的檢測方法*

趙 靜，陳子龍

(陜西省渭南市食品藥品檢驗所，陜西 渭南714000)

0 引 言

泛酸鈣是B 族維生素的一種，是生物正常生長必需的營養(yǎng)物質之一，分混旋體(dl -型)、右旋體(d-型)、左旋體(l -型)3 種型式。其中以右旋體為主，又名本多生酸鈣，d -泛酸鈣屬維生素類藥物，是人體和動物體內輔酶A 的成分之一，存在于活細胞中，其主要作用是參與蛋白質、脂肪、糖在體內的新陳代謝，治療維生素B 缺乏癥、周圍神經炎以及手術后的腸絞痛，與維生素C 合用可治療播散性紅斑狼瘡。另外，d -泛酸鈣還能與羥酸形成高能硫酯化合物，激活活性較弱的酸，參與血色素卟啉架的合成，對皮膚和粘膜功能的正常化、對毛發(fā)的著色和抗感染也是不可缺少的，在預防鏈霉素和卡那霉素副作用方面也有積極的作用［1-4］。

復合維生素B 片是一個復雜的多組分制劑，其組分包括煙酰胺、維生素B1、維生素B2、維生素B6和泛酸鈣，用于因缺乏維生素B 類所致的各種疾患的輔助治療的營養(yǎng)補充制劑。也可預防和治療B 族維生素缺乏所致的營養(yǎng)不良、厭食、腳氣病、糙皮病等的維生素類非處方藥，收載于部頒標準化學藥品及制劑第一冊，發(fā)現為了有效的控制其質量，人們做了大量的工作，對其所含有的部分成分測定進行了研究，如對復合維生素B 片中維生素B1，B2，B6和煙酰胺的含量進行了測定［5-7］，但是其中所含的泛酸鈣，由于其含量低，且是以鹽的形式存在于藥品中，紫外吸收屬末端吸收，所以未對泛酸鈣含量測定進行研究。

目前，測定泛酸鈣的分析方法有容量法、毛細管電泳法、脈沖伏安法和高效液相色譜法等。其中，采用EDTA 絡合滴定測定鈣的容量法為中國藥典規(guī)定的標準方法，但其靈敏度低，對于含有多種水溶性、脂溶性維生素和礦物質的復合維生素片劑中泛酸鈣的測定，干擾通常較大，已不能滿足分析測定的要求。高效液相色譜法是分離測定復合維生素片劑中泛酸鈣的有效方法。因此本研究參考部分文獻方法［8-12］，采用HPLC-UV 法對復合維生素B 片中泛酸鈣的含量進行測定，已更好的保證復合維生素B 片產品質量。

1 實驗部分

1.1 儀器和試藥

島津高效液相色譜儀LC -30AD;島津SPD -20A 檢測器;SCQ-200 型超聲波清洗器;賽多利斯BBS-224S 型電子分析天平;

泛酸鈣對照品(中國藥品生物制品檢定所:100370 -200301);復合維生素B 片(A 公司，批號:130801;130802;130803);乙腈(美國Tedia 公司，色譜純);磷酸(國藥集團化學試劑有限公司，分析純);高純水。

1.2 方法

1.2.1 高效液相色譜條件

色譜柱:Kromasil C18(150 mm ×4. 6 mm，5 μm);流動相:乙腈-水-磷酸(100∶900∶1);檢測波長:210 nm;流速:1 mL·min-1，進樣體積:20 μL;柱溫:35 ℃.

1.2.2 溶液的制備

1)對照品儲備液。將泛酸鈣對照品置于120℃干燥3 h，精密稱取泛酸鈣對照品201.76 mg 于200 mL 量瓶中，加入適量流動相，超聲溶解后，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為泛酸鈣對照品儲備液。

2)供試品溶液。取本品20 片，精密稱定，研細，精密稱取適量(約相當于泛酸鈣5 mg)置10 mL 量瓶中，加入適量流動相，超聲溶解后，用流動相稀釋至刻度，0.45 μm 微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

1.3 方法學考察結果

1.3.1 線性關系考察

精密量取泛酸鈣對照品儲備液用流動相稀釋成濃度為353.08;403.52;504.4;605.28;706.16 μg·mL-1，按“2.1”項下色譜條件測定，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標進行線性回歸，表明泛酸鈣在353.08 ～706.16 μg·mL-1間，與相應色譜峰面積呈良好的線性關系，回歸方程為:y =140 000x-15 435，r=0.999 4.泛酸鈣色譜圖見圖1.

1.3.2 精密度試驗

取線性試驗項下濃度為0.504 4 mg·mL-1泛酸鈣對照品溶液，按上述色譜條件連續(xù)進樣6 次，計算峰面積，其RSD=0.98%.

1.3.3 重復性試驗

取同一批號供試品，按“2.2”項下供試品溶液制備方法處理6 份，按上述色譜條件測定含量，其含量平均值為97.53%，RSD=0.89%.

1.3.4 回收率試驗

取同一批號供試品100 片，研細，精密稱定(約相當于泛酸鈣12.5 mg)6 份，置50 mL 量瓶中，分別加入濃度為0.504 4 mg·mL-1泛酸鈣對照品溶液適量，按上述色譜條件測定含量，計算回收率，泛酸鈣的平均回收率為98.66%，RSD =0.73%.結果見表1.

1.3.5 穩(wěn)定性試驗

將新配置的供試品溶液，分別于0，1，4，8，10，12 h 在上述同一色譜條件下進樣，測定含量，RSD=0.78%，表明該溶液在12 h 內穩(wěn)定。

圖1 空白樣品Fig.1 HPLC chromatograms of negative sample

表1 加樣回收率試驗結果Tab.1 Results of recovery experiment

1.3.6 樣品含量測定

取樣品3 批，按供試品溶液制備方法處理樣品，測定含量，結果見表2.

表2 樣品含量測定結果Tab.2 Determination results of sample

2 討 論

2.1 采用高效液相色譜法的檢測

通過采用高效液相色譜法對復合維B 片中泛酸鈣含量的檢測，用對照品溶液在200 ～400 nm 波長范圍內掃描，發(fā)現泛酸鈣在200 ～210 nm 波長有較大吸收，考慮到這個范圍是末端吸收，因此選用截止波長較低的乙腈作為有機相，并選定210 nm為檢測波長。流動相中增大乙腈的比例，色譜出峰快，保留時間短，泛酸鈣峰與其它組分峰不能分開;磷酸的加入量低，泛酸鈣峰拖尾嚴重，過高腐蝕色譜柱，實驗經優(yōu)化得到流動相為V(水)∶V(乙腈)∶V(磷酸)=900∶100∶1.

2.2 幾種其他傳統(tǒng)分析法的比較

毛細管電泳法因其重現性差，分離能力較弱，對PH 值要求較高，不能滿足泛酸鈣含量方法學檢測。容量 法其靈敏度低，對于含有多種水溶性、脂溶性維生素和礦物質的復合維生素片劑中泛酸鈣的測定，干擾通常較大，已不能滿足分析測定的要求。而脈沖伏安法因解析復雜體系的能力不足，分析時間較長，且需要對樣品除氧，也不利于泛酸鈣的檢測。

3 結 論

與傳統(tǒng)的泛酸鈣的分析方法(容量法、毛細管電泳法、脈沖伏安法和高效液相色譜法等)相比。高效液相色譜法測定復合維生素B 片中泛酸鈣的含量，該法靈敏度高、重復性好、在測定濃度范圍內，峰面積與濃度之間呈良好的線性關系，回收率高，且處方中其他成分對泛酸鈣含量測定無干擾，故本法可以作為復合維生素B 片中泛酸鈣的含量測定方法。

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