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    石墨烯固相萃取-液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測定食品接觸材料中9種雙酚-二環(huán)氧甘油醚的遷移量

    2014-12-25 02:28:58肖家勇吳新華朱紹華焦艷娜付善良王利兵
    食品與生物技術(shù)學(xué)報 2014年12期
    關(guān)鍵詞:甘油醚甲醚雙酚

    龔 強(qiáng), 丁 利, 肖家勇, 吳新華, 成 婧,朱紹華, 焦艷娜, 付善良, 王利兵*

    (1.湖南出入境檢驗(yàn)檢疫局 檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心,食品安全科學(xué)技術(shù)湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,湖南 長沙 410004;2.中南林業(yè)科技大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,湖南 長沙410004)

    雙酚-二環(huán)氧甘油醚類物質(zhì)作為合成環(huán)氧樹脂原料且具有清除氯酸作用,常用作為嬰兒奶瓶、食品罐頭等多種食品接觸材料的內(nèi)涂層[1-2]。這類容器在使用過程中,雙酚類物質(zhì)殘留會向食品中遷移,與食品接觸后形成水合物、氯代物等衍生物而造成污染[3-5]。環(huán)境毒理學(xué)將這類物質(zhì)稱為環(huán)境激素,又稱“外因性內(nèi)分泌干擾物”。有研究報道,微量甚至痕量的雙酚A及其環(huán)氧化合物,即可能對動物生理狀況、生殖系統(tǒng)以及胎兒發(fā)育造成不良影響[6-8]。鑒于其對健康的危害,檢測接觸食品中其遷移含量,為預(yù)防其危害有著重要意義。目前,對于食品接觸材料中有毒有害物質(zhì)的遷移量測定一般采用食品模擬物,但對于實(shí)際樣品來說,樣品基質(zhì)復(fù)雜,前處理更復(fù)雜,有毒有害物質(zhì)的痕量遷移量的測定具有一定挑戰(zhàn)性。

    石墨烯作為一種新型的碳納米材料,因?yàn)槠洫?dú)特而又嚴(yán)密的二維結(jié)構(gòu),近來被廣泛關(guān)注。石墨烯具有比碳納米管更大的比表面積,而且石墨烯的制備更為簡單,且不受金屬離子的污染。近年來,石墨烯作為比碳納米管更優(yōu)異的吸附劑而廣泛用于SPE等分離領(lǐng)域,Liu等人以石墨烯負(fù)載硅膠固相萃取環(huán)境樣品中氯酚,同時進(jìn)一步利用石墨烯包覆磁性材料富集生物大分子以及環(huán)境樣品中多溴聯(lián)苯醚[9-12];Dong等人采用石墨烯基質(zhì)分散萃取了生物樣品中的小分子[13]。

    作者在課題組前期工作的基礎(chǔ)上,采用石墨烯填充固相萃取柱,高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定,以實(shí)際樣品為基質(zhì),測定不同生產(chǎn)日期的同類基質(zhì)以及不同基質(zhì)中的雙酚-二環(huán)氧甘油醚的遷移量,方法簡單、靈敏、快速。

    1 材料與方法

    1.1 儀器、試劑與材料

    API 4000 Q TRAP質(zhì)譜儀,美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司制造;多功能微量化樣品處理儀,長沙中訊電子工程研究所制造;固相萃取儀,美國Supelco公司制造;高速離心機(jī),德國Sigma公司制造;KQ-250E超聲波振蕩器,美國進(jìn)口。

    甲醇、叔丁基甲醚、乙酸乙酯、乙腈,均為色譜純,德國Merck公司產(chǎn)品;乙酸、乙酸銨,為分析純,北京化工廠產(chǎn)品;水為超純水,以美國Millipore超純水儀制備。

    石墨烯(直徑 0.5~2 μm,厚度~0.8 nm),南京先鋒納米公司產(chǎn)品;雙酚-二環(huán)氧甘油醚標(biāo)準(zhǔn)品:雙酚A 二縮水甘油醚(BADGE),雙酚 A(2,3-二羥基丙基)縮水甘油醚(BADGE·H2O),雙酚 A(3-氯-2-羥丙基)縮水甘油醚(BADGE·HCl),雙酚 A-雙(2,3-二羥丙基)醚(BADGE·2H2O),雙酚 A 二(3-氯-2-羥丙基)醚(BADGE·2HCl),雙酚 A(3-氯-2-羥丙基)(2,3-二羥基丙基)醚(BADGE·H2O·HCl),雙酚F 二縮水甘油醚(BFDGE),雙酚 F-雙(2,3-二羥丙基)醚(BFDGE·2H2O),雙酚 F 雙(3-氯-2-羥丙基)醚(BFDGE·2HCl),純度均≥95%,Sigma-Aldrich 公司產(chǎn)品;八寶粥、魚肉、橘片罐頭和牛肉等罐頭食品,購于長沙超市。

    1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

    準(zhǔn)確稱取9種雙酚-環(huán)氧甘油醚標(biāo)準(zhǔn)品各10.0 mg,用甲醇溶解,配成1.0 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。分別取標(biāo)準(zhǔn)儲備液,用甲醇定容配成100 μg/mL的中間標(biāo)準(zhǔn)溶液。上述溶液均4℃冷藏避光儲存。取適量儲備液,用甲醇稀釋配成溶度為1.0 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

    1.3 石墨烯固相萃取小柱的制備

    采用商品化空的3 mL的固相萃取小柱,用墊圈封住小柱底部,稱取20 mg石墨烯置于固相萃取柱中,用墊圈封住小柱頂部并壓緊,使其高度約為0.3 cm。使用前依次用6 mL甲醇、6 mL水活化。

    1.4 樣品前處理

    1.4.1 提取 稱取5.0 g樣品于50 mL的離心管中,加入15 mL叔丁基甲醚,振蕩混勻2 min,超聲提取15 min后,以7 000 r/min離心5 min,分離上清液。下層殘渣再用15 mL叔丁基甲醚采用上述步驟重復(fù)提取一次,合并兩次提取液。將提取液氮?dú)獯抵两桑?6 mL 甲醇-水(體積比 50∶50)溶解,肉制品樣品采用正己烷去脂:加3 mL正己烷,振蕩混勻后棄正己烷層,凈化。

    1.4.2 凈化 將提取液加到已活化石墨烯固相萃取小柱上,控制體積流量為1 mL/min,讓溶液流盡,5 mL水淋洗,棄淋洗液。用9 mL乙酸乙酯洗脫,收集全部洗脫液,氮?dú)獯抵两?,用體積比1∶1甲醇-水定容至1 mL,過0.45 μm濾膜,上機(jī)分析。

    1.5 色譜條件和質(zhì)譜條件

    1.5.1 色譜條件 流動相為甲醇 (A)和5 mmol/L醋酸銨溶液(內(nèi)含質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1%乙酸)(B),體積流量為0.25 mL/min;梯度(體積分?jǐn)?shù))洗脫程序?yàn)椋撼跏紩r 40%B;0~10 min,45%~5%B;10~10.01 min,5%~40%B;10.01~15 min,40%B。 色譜柱為 COSMOSIL柱(150mm×2.0mm;2.5μm),柱溫30℃,進(jìn)樣量10μL。

    1.5.2 質(zhì)譜條件 離子源:質(zhì)譜離子源為電噴霧離子源(ESI);掃描方式:正離子掃描;霧化氣(Gas1):60.00 psi;輔助氣(Gas2):65.00 psi;離子噴霧電壓(IS):5 500.00 V;氣簾氣(Cur):20.00 psi;離子化溫度(TEM):500℃;檢測方式:多反應(yīng)監(jiān)測掃描模式(MRM)。多反應(yīng)監(jiān)測條件下9種雙酚-二環(huán)氧甘油醚定性離子對、定量離子對、碰撞氣能量和去簇電壓見表1。

    表1 多反應(yīng)檢測掃描模式檢測9種雙酚-二環(huán)氧甘油醚的部分質(zhì)譜參數(shù)Table 1 Some parameters of multiple reaction monitoring detection for 9 bisphenol diglycidyl ethers

    2 結(jié)果與討論

    2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

    采用注射泵連續(xù)進(jìn)樣,將9種雙酚-二環(huán)氧甘油醚標(biāo)準(zhǔn)溶液(質(zhì)量濃度100 ng/mL)分別注入離子源中,正離子模式下進(jìn)行母離子全掃描,選擇適當(dāng)?shù)姆肿与x子峰。結(jié)果表明,電噴霧正離子電離模式下,9種物質(zhì)全掃描的分子離子[M+NH4]+最理想。分別對9種甘油醚的母離子進(jìn)行二次碎裂,得到碎片離子峰的信息,確定每個目標(biāo)化合物的特征離子對后,在多反應(yīng)監(jiān)測 (MRM)模式下優(yōu)化去簇電壓(DP)、碰撞能量(CE)。 聯(lián)機(jī)液相色譜儀,參照本課題組吳新華[13]液相條件,流動注射分析優(yōu)化碰撞氣(CAD)、霧化氣(Gas1)、輔助氣(Gas2)、噴霧電壓(IS)、氣簾氣(CUR)、離子化溫度(TEM)等質(zhì)譜參數(shù)。優(yōu)化好9種雙酚-二環(huán)氧甘油醚的MRM色譜圖,見圖1。

    圖1 9種雙酚-二環(huán)氧甘油醚的多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)色譜圖(100 ng/mL)Fig.1 Chromatograms of 9 bisphenol diglycidyl ethers in MRM mode(100 ng/mL)

    2.2 石墨烯用量的選擇

    石墨烯表面積非常大 (理論值為2630 m2/g)[9],有著很強(qiáng)的吸附能力,因此適當(dāng)選擇固相萃取中石墨烯的用量對實(shí)驗(yàn)極為關(guān)鍵。Liu等采用20 mg石墨烯作為固相萃取填料,對氯酚類物質(zhì)進(jìn)行分析,獲得了較好的回收率[12]。本文作者選擇了5、10、20、40、60、80 mg石墨烯,對空白樣品進(jìn)行加標(biāo)回收分析,9種甘油醚的加標(biāo)量均為10.0 μg/kg。石墨烯用量低于20 mg時,9種環(huán)氧甘油醚的回收率隨著石墨烯的增加而增大;用量在20~40 mg之間時,回收率變化不大;當(dāng)用量大于40 mg時,回收率隨著石墨烯增加反而有所降低(見圖2)。因此,本實(shí)驗(yàn)選擇20 mg石墨烯作為固相萃取填料用量。

    2.3 提取溶劑的優(yōu)化

    參照本課題組吳新華文獻(xiàn)[14],本實(shí)驗(yàn)分別比較了乙腈、甲醇、乙酸乙酯和叔丁基甲醚作為提取溶劑對9種環(huán)氧甘油醚提取效率的影響 (見圖3)。9種甘油醚的加標(biāo)量均為10 μg/kg,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:不同的提取溶劑對9種甘油醚的回收率差異較大。其中甲醇、乙腈提取回收率較低,9種甘油醚的回收率在34.6%~70.7%之間。叔丁基甲醚對9種甘油醚的回收率在63.7%~101.9%,綜合分析較其他3種試劑提取回收率好。因此,本實(shí)驗(yàn)選擇叔丁基甲醚作為提取溶劑。

    圖2 石墨烯用量對9種環(huán)氧甘油醚回收率的影響Fig.2 Effect of graphene on the recoveries of 9 bisphenol diglycidyl ethers

    2.4 洗脫溶劑的選擇

    經(jīng)石墨烯吸附后,洗脫效率是回收率的保證。實(shí)驗(yàn)過程中分別比較了乙腈、堿性甲醇(含體積分?jǐn)?shù)5%氨水)、叔丁基甲醚和乙酸乙酯作為洗脫溶劑對9種環(huán)氧甘油醚洗脫效率的影響(見圖4)。9種雙酚-二環(huán)氧甘油醚的加標(biāo)量均為10.0 μg/kg,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:不同的洗脫溶劑對9種甘油醚的回收率差異較大。其中乙腈的洗脫回收率較低,9種甘油醚的回收率在40.1%~71.9%之間。堿性甲醇對BADGE的回收率為58.2%;對BFDGE的回收率為50.4%;對其他幾種甘油醚的回收率在77.3%~86.5%之間。叔丁基甲醚對BADGE、BFDGE及BFDGE·2HCl的回收率較低,分別為52.6%、52.7%和65.4%。乙酸乙酯對9種甘油醚的回收率在65.7%~107.9%之間,洗脫回收率高于其他3種溶劑。因此,本實(shí)驗(yàn)選擇乙酸乙酯作為洗脫溶劑。

    2.5 方法的線性范圍與檢測限

    圖3 不同溶劑提取罐頭食品中雙酚-二環(huán)氧甘油醚的回收率Fig.3 Recoveries of bisphenol diglycidyl ethers in the canned foodstuffs by different extraction solvent

    圖4 不同溶劑洗脫罐頭食品中雙酚-二環(huán)氧甘油醚的回收率Fig.4 Recoveries of bisphenol diglycidyl ethers in the canned foodstuffs by different elution solvent

    在上述優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下,用空白基質(zhì)溶液配制一系列雙酚-二環(huán)氧甘油醚質(zhì)量濃度分別為0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0 ng/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,進(jìn)行添加實(shí)驗(yàn)分析。結(jié)果表明9種環(huán)氧甘油醚的質(zhì)量濃度x(ng/mL)和峰面積y之間均有良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)在0.992 2~0.999 6之間(見表 2);其中 BADGE·2H2O、BFDGE·2HCl的線性范圍為 0.5~50.0 ng/mL;BADGE·2HCl和BFDGE·2H2O的線性范圍為5.0~100.0 ng/mL;其他5種的線性范圍為2.0~100.0 ng/mL。 分析物最低檢測限(LOQ)根據(jù)其響應(yīng)值大于或等于基線響應(yīng)值的3倍(S/N≥3)且準(zhǔn)確度和精密度RSD<20%來確定。采用實(shí)際樣品添加法進(jìn)行分析,確定方法的最低定量檢測限,見表2。

    2.6 方法的回收率與精密度

    采用5 g不同罐頭基質(zhì),分別按低(線性低限)、中、高3個濃度進(jìn)行9種環(huán)氧甘油醚標(biāo)準(zhǔn)混合溶液的添加回收分析。每個加標(biāo)濃度水平平行測定6份樣品,計算平均回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差,見表3。9種環(huán)氧甘油醚在橘片罐頭樣品中的平均添加回收率為65.4%~111.3%,肉類罐頭中的平均添加回收率為60.0%~97.6%。相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于20%,方法重復(fù)性較好。

    2.7 實(shí)際樣品的測定

    用本法對不同種類及不同生產(chǎn)日期的同類罐頭作實(shí)樣測定,對陽性樣品多重測定,結(jié)果表明靈敏度高、重復(fù)性好。圖5為實(shí)樣MRM色譜圖。

    表2 9種雙酚-二環(huán)氧甘油醚的回歸方程、線性范圍、相關(guān)系數(shù)和檢測限Table 2 Regression equations,linear ranges,correlation coefficients and LODs of 9 bisphenol diglycidyl ethers

    表3 不同罐頭樣品中9種環(huán)氧甘油醚添加平均回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)Table 3 Recoveries and relative standard detiation(RSDs) of 9 bisphenol diglycidyl ethers in can food(n=6)

    圖5 實(shí)際樣品MRM色譜圖Fig.5 MRM chromatograms of real samples

    魚罐頭樣品檢出 220.0 μg/kg的 BADGE·HCl和 139.0 μg/kg 的 BADGE·H2O·HCl; 牛肉罐頭樣品檢 出 222.0 μg/kg 的 BADGE·HCl,47.2 μg/kg 的BADGE·H2O和49.2μg/kg 的 BADGE·H2O·HCl。

    3 結(jié)語

    通過優(yōu)化改進(jìn)樣品前處理條件,以實(shí)際樣品為檢測對象,建立了罐頭食品接觸材料中9種雙酚-二環(huán)氧甘油醚遷移量的石墨烯固相萃取凈化HPLC-MS/MS檢測方法。該方法操作簡單,靈敏度高,使用石墨烯作為固相萃取柱回收率高、重復(fù)性好,為食品接觸材料中內(nèi)分泌干擾物的遷移動力學(xué)研究提供了檢測技術(shù)基礎(chǔ),對食品安全有著重要的意義。

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