氣質(zhì)聯(lián)用法對艾納香中龍腦含量的測定

嚴(yán)敏+石成亮+湯洪敏

摘要：以艾納香（Blumea balsamifera L.）組織培養(yǎng)過程中的愈傷組織、組培苗以及羅甸野生苗為研究對象，以乙醇為溶劑提取艾納香中的龍腦，運(yùn)用氣質(zhì)聯(lián)用法分別測定艾納香組培愈傷組織、組培苗、羅甸野生苗中龍腦的相對百分含量。結(jié)果表明，艾納香組培愈傷組織中不含龍腦，組培苗、羅甸野生苗中龍腦的含量分別為3.216 7和3.620 0 mg/g。該方法簡便、精密度和重復(fù)性良好，龍腦在0.020 0～0.060 0 mg/mL內(nèi)線性關(guān)系良好。組培苗和羅甸野生苗的添加回收率分別為97.11%和97.78%。

關(guān)鍵詞：艾納香（Blumea balsamifera L.）;龍腦;氣質(zhì)聯(lián)用儀

中圖分類號：O657.63 ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A ? ? ? ?文章編號：0439-8114（2014）21-5256-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2014.21.054

Determinating Borneol in Blumea balsamifera L with GC-MS

YAN Min， SHI Cheng-liang， TANG Hong-min

（College of Chemistry and Environmental Science， Guizhou Minzhu University， Guiyang 550025， China）

Abstract： Using callus and somaclone of Blumea balsamifera L seed， Luodian wild seedlings as materials， borneol of Blumea balsamifera L was extracted by ethanol and analysed by GC-MS. The results showed that callus of of Blumea balsamifera L seed did not contain borneol. The borneol content in somaclone and Luodian wild plants were 3.216 7 and 3.620 0 mg/g， respectively. The method is simple， precise with good repeatability. Borneol content in the range of 0.020 0～0.060 0 mg/mL had good linear relationship. The recoveries of standard addition were 97.11% and 97.78% for borneol in somaclone and Luodian wild seedlings.

Key words：Blumea balsamifera L; borneol; GC-MS

艾納香（Blumea balsamifera L），別名管芽，假東風(fēng)草[1]、大風(fēng)艾、大艾、冰片艾等，屬于菊科艾納香屬多年生木質(zhì)草本植物，在我國主要產(chǎn)于廣西、貴州、云南、廣東等省[2]，以其全草或地上部分入藥，具有鎮(zhèn)痛、發(fā)汗、祛風(fēng)除濕、去痰止咳、通經(jīng)止血等功效，是一種重要的民間藥物。作為天然中草藥，艾納香含有多種有效成分，已經(jīng)鑒定的有黃酮類、有機(jī)酸、萜類等[3-5]。同時(shí)，艾納香是天然龍腦的重要來源，艾納香精油中含30%左右龍腦[6]，是名貴藥材、高級香料、化妝品的理想原料及食品保健品的添加劑。

艾納香屬多年生宿根植物，主要以宿根分株繁殖，分生苗移栽成活率低;艾納香利用種子育苗發(fā)現(xiàn)種子結(jié)實(shí)率低、休眠期長、發(fā)芽率低[7，8]。這些情況導(dǎo)致艾納香種苗短缺，嚴(yán)重制約了艾納香的規(guī)模化生產(chǎn)，因此必須研究艾納香的組織培養(yǎng)以快速獲得批量種苗，擴(kuò)大種植規(guī)模以滿足日益增長的市場需求。此外，在進(jìn)行組織培養(yǎng)時(shí)，直接以組織培養(yǎng)物替代原藥材是解決艾納香資源短缺的重要方法。對不同培養(yǎng)條件下的艾納香中龍腦含量進(jìn)行比較，有利于擴(kuò)寬艾納香藥材的應(yīng)用，使這一古老的中藥為人類健康發(fā)揮更大的作用。

1 ?材料與方法

1.1 ?儀器

7890A/5975C氣質(zhì)聯(lián)用儀（Agilent公司）。

1.2 ?試劑

龍腦對照品，無水乙醇。

1.3 ?供試材料

艾納香組培愈傷組織;艾納香組培苗由貴州民族大學(xué)化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)了7個(gè)月的組培苗;艾納香野生苗采自貴州羅甸縣。

1.4 ?龍腦對照品溶液的制備

精確稱取龍腦對照品10 mg，置于10 mL的容量瓶中，加無水乙醇溶解并加至刻度，搖勻，即可得到濃度為1 mg/mL的溶液，作為標(biāo)準(zhǔn)品貯備液;另取200、300、400、500、600 μL的貯備液，分別置于10 mL容量瓶中加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液備用，濃度分別為0.02、0.03、0.04、0.05、0.06 mg/mL。

1.5 ?氣質(zhì)聯(lián)用條件

1.5.1 ?色譜條件 ?采用HP-5MS氣相色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）;進(jìn)樣口溫度為280 ℃，采用程序升溫，柱溫起始溫度為90 ℃，以5 ℃/min升溫至100 ℃，維持3 min;再以5 ℃/min升溫至150 ℃，維持2 min;分流比為40∶1;載氣為高純氦氣，載流速度為1.0 mL/min;進(jìn)樣量為1.0 μL。

1.5.2 ?質(zhì)譜條件 ?電子轟擊粒子源，電離能量為70 eV;離子源溫度為230 ℃;傳輸線溫度為210 ℃;四級桿溫度為150 ℃。

1.6 ?樣品的處理

分別將艾納香愈傷組織、艾納香組培苗、野生苗3種樣品用研缽粉碎，準(zhǔn)確稱取粉碎樣品8 g，放至250 mL的錐形瓶中，加無水乙醇100 mL，進(jìn)行超聲提?。ǔ晻r(shí)間為120 min，頻率為59 Hz，功率為80%），冷卻、搖勻、過濾，濾液置于100 mL容量瓶中，放冷，加無水乙醇至刻度，搖勻，從100 mL容量瓶中再取1 mL溶液，置10 mL容量瓶中，加無水乙醇至刻度，搖勻，即為樣品溶液。

1.7 ?龍腦對照品的氣質(zhì)聯(lián)用分析

分別從0.03 mg/mL的龍腦對照品溶液及樣品溶液中精密量取1 μL溶液，運(yùn)用氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行測定。

1.7.1 ?標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 ?分別精密吸取濃度為0.02、0.03、0.04、0.05、0.06 mg/mL的龍腦對照品溶液各1 μL，依次進(jìn)樣，運(yùn)用氣質(zhì)聯(lián)用儀分別測定其峰面積，以龍腦對照品的峰面積為縱坐標(biāo)，龍腦對照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.7.2 ?精密度測定 ?取濃度為0.03 mg/mL的龍腦對照品溶液1 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，根據(jù)峰面積計(jì)算其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

1.7.3 ?重復(fù)性試驗(yàn) ?取艾納香野生苗，按照樣品溶液制備方法配制6份100 mL的溶液，根據(jù)氣質(zhì)聯(lián)用法依次對6份供試品溶液進(jìn)行測定，記錄樣品的峰面積，計(jì)算其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

1.7.4 ?加標(biāo)回收率試驗(yàn) ?分別稱取艾納香組培苗和貴州羅甸野生苗各0.04 g，制備成樣品溶液，從中各取出6份，先測出藥材中龍腦的含量，再向每份中加入0.300 mg龍腦對照品，由氣質(zhì)聯(lián)用儀測定6個(gè)樣品峰面積，計(jì)算平均回收率以及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

1.7.5 ?樣品含量的測定 ?分別量取愈傷組織供試品溶液、組培苗供試品溶液和野生苗供試品溶液各1 μL依次進(jìn)樣，測定出峰面積，計(jì)算供試品溶液中龍腦的含量，每份平行測定3次。

2 ?結(jié)果與分析

2.1 ?龍腦對照品溶液及樣品溶液氣質(zhì)聯(lián)用分析

從0.03 mg/mL的對照品溶液及樣品溶液中精密量取1 μL溶液進(jìn)樣，從圖1至4可以看出，龍腦標(biāo)準(zhǔn)品的出峰時(shí)間在7.621 min;樣品色譜圖在7.621 min有一吸收峰與龍腦標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間一致;質(zhì)譜圖檢索結(jié)果為龍腦成分。

2.2 ?線性關(guān)系分析

以龍腦的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見表1、圖5，計(jì)算回歸方程為：y=173.602 5 x，R2為0.997 01。結(jié)果表明，龍腦在0.02～0.06 mg/mL內(nèi)線性關(guān)系良好（n=5）。

2.3 ?精密度測定結(jié)果

由精密度試驗(yàn)方法，用氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行分析，結(jié)果見表2，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.44%。表明方法的精密度良好。

2.4 ?重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)重復(fù)性試驗(yàn)考察方法，由氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行測定，結(jié)果見表3。

由表3可得，6份供試品溶液中龍腦平均含量為3.621 6 mg/g，RSD為0.16%，表明方法的重復(fù)性好。

2.5 ?加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果

測得組培苗中龍腦的平均回收率97.11%，RSD為1.14%;野生苗中龍腦的平均回收率97.78%，RSD為0.67%，表明該方法的準(zhǔn)確度高（表4）。

2.6 ?樣品含量的測定

從表5可以得出艾納香組培苗中龍腦的平均含量為3.216 7 mg/g，貴州羅甸艾納香野生苗中龍腦的平均含量為3.620 0 mg/g。

3 ?小結(jié)與討論

在擬定的色譜條件下，以無水乙醇作為艾納香中龍腦的提取溶劑，采用超聲提取，簡化了樣品的制備方法，而且艾納香中龍腦的含量測定沒有受到其他成分的干擾。氣質(zhì)聯(lián)用儀用于檢測揮發(fā)性物質(zhì)靈敏度高、準(zhǔn)確度好。運(yùn)用該方法，在對照品標(biāo)準(zhǔn)溶液中，色譜圖中龍腦出峰的時(shí)間在7.621 min，愈傷組織的色譜分析顯示，在該時(shí)間處沒有吸收峰，這說明愈傷組織中不存在龍腦。組培苗、羅甸野生苗質(zhì)譜圖分析確定是龍腦，其中組培苗中龍腦的含量較野生苗低，但差異不大，原因可能是組培苗培養(yǎng)時(shí)間較短，龍腦在植物體內(nèi)有一個(gè)逐步累積的過程。但組培苗可以人工快速培育繁殖，縮短培育周期，為艾納香藥材應(yīng)用提供大量的苗木，以滿足日益增長的市場需求。

參考文獻(xiàn)：

[1] 中國科學(xué)院中國植物編輯委員會.中國植物志[M].北京：科學(xué)出版社，1979.

[2] 全國中草藥匯編編寫組.全國中草藥匯編（上冊）[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1996.

[3] 郝小燕，余 ?珍，丁智慧.黔產(chǎn)艾納香揮發(fā)油化學(xué)成分研究[J].貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2000，25（2）：121-122.

[4] 王治平，孟祥平，樊 ?華.滇桂艾納香揮發(fā)油化學(xué)成分的GC-MS分析[J].中草藥，2005，36（8）：1138-11.

[5] 周 ?欣，楊小生，趙 ?超.艾納香揮發(fā)油化學(xué)成分的氣相色譜-質(zhì)譜分析[J].分析測試學(xué)報(bào)，2001，20（5）：76-78.

[6] 方 ?燦，陳 ?琳.氣相色譜法測定艾納香油中左旋龍腦的含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2006，26（9）：1166-1167.

[7] 江興龍，潘俊鋒，司 ?健，等.艾納香人工栽培技術(shù)[J].林業(yè)科技開發(fā)，2005，19（2）：68-70.

[8] 何元農(nóng)，丁 ?映，曾令祥，等.影響艾納香移栽成活率的因素分析及技術(shù)對策[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005，33（3）：40-43.

（責(zé)任編輯 ?胡西洲）

1.5.2 ?質(zhì)譜條件 ?電子轟擊粒子源，電離能量為70 eV;離子源溫度為230 ℃;傳輸線溫度為210 ℃;四級桿溫度為150 ℃。

1.6 ?樣品的處理

分別將艾納香愈傷組織、艾納香組培苗、野生苗3種樣品用研缽粉碎，準(zhǔn)確稱取粉碎樣品8 g，放至250 mL的錐形瓶中，加無水乙醇100 mL，進(jìn)行超聲提?。ǔ晻r(shí)間為120 min，頻率為59 Hz，功率為80%），冷卻、搖勻、過濾，濾液置于100 mL容量瓶中，放冷，加無水乙醇至刻度，搖勻，從100 mL容量瓶中再取1 mL溶液，置10 mL容量瓶中，加無水乙醇至刻度，搖勻，即為樣品溶液。

1.7 ?龍腦對照品的氣質(zhì)聯(lián)用分析

分別從0.03 mg/mL的龍腦對照品溶液及樣品溶液中精密量取1 μL溶液，運(yùn)用氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行測定。

1.7.1 ?標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 ?分別精密吸取濃度為0.02、0.03、0.04、0.05、0.06 mg/mL的龍腦對照品溶液各1 μL，依次進(jìn)樣，運(yùn)用氣質(zhì)聯(lián)用儀分別測定其峰面積，以龍腦對照品的峰面積為縱坐標(biāo)，龍腦對照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.7.2 ?精密度測定 ?取濃度為0.03 mg/mL的龍腦對照品溶液1 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，根據(jù)峰面積計(jì)算其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

1.7.3 ?重復(fù)性試驗(yàn) ?取艾納香野生苗，按照樣品溶液制備方法配制6份100 mL的溶液，根據(jù)氣質(zhì)聯(lián)用法依次對6份供試品溶液進(jìn)行測定，記錄樣品的峰面積，計(jì)算其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

1.7.4 ?加標(biāo)回收率試驗(yàn) ?分別稱取艾納香組培苗和貴州羅甸野生苗各0.04 g，制備成樣品溶液，從中各取出6份，先測出藥材中龍腦的含量，再向每份中加入0.300 mg龍腦對照品，由氣質(zhì)聯(lián)用儀測定6個(gè)樣品峰面積，計(jì)算平均回收率以及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

1.7.5 ?樣品含量的測定 ?分別量取愈傷組織供試品溶液、組培苗供試品溶液和野生苗供試品溶液各1 μL依次進(jìn)樣，測定出峰面積，計(jì)算供試品溶液中龍腦的含量，每份平行測定3次。

2 ?結(jié)果與分析

2.1 ?龍腦對照品溶液及樣品溶液氣質(zhì)聯(lián)用分析

從0.03 mg/mL的對照品溶液及樣品溶液中精密量取1 μL溶液進(jìn)樣，從圖1至4可以看出，龍腦標(biāo)準(zhǔn)品的出峰時(shí)間在7.621 min;樣品色譜圖在7.621 min有一吸收峰與龍腦標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間一致;質(zhì)譜圖檢索結(jié)果為龍腦成分。

2.2 ?線性關(guān)系分析

以龍腦的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見表1、圖5，計(jì)算回歸方程為：y=173.602 5 x，R2為0.997 01。結(jié)果表明，龍腦在0.02～0.06 mg/mL內(nèi)線性關(guān)系良好（n=5）。

2.3 ?精密度測定結(jié)果

由精密度試驗(yàn)方法，用氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行分析，結(jié)果見表2，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.44%。表明方法的精密度良好。

2.4 ?重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)重復(fù)性試驗(yàn)考察方法，由氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行測定，結(jié)果見表3。

由表3可得，6份供試品溶液中龍腦平均含量為3.621 6 mg/g，RSD為0.16%，表明方法的重復(fù)性好。

2.5 ?加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果

測得組培苗中龍腦的平均回收率97.11%，RSD為1.14%;野生苗中龍腦的平均回收率97.78%，RSD為0.67%，表明該方法的準(zhǔn)確度高（表4）。

2.6 ?樣品含量的測定

從表5可以得出艾納香組培苗中龍腦的平均含量為3.216 7 mg/g，貴州羅甸艾納香野生苗中龍腦的平均含量為3.620 0 mg/g。

3 ?小結(jié)與討論

在擬定的色譜條件下，以無水乙醇作為艾納香中龍腦的提取溶劑，采用超聲提取，簡化了樣品的制備方法，而且艾納香中龍腦的含量測定沒有受到其他成分的干擾。氣質(zhì)聯(lián)用儀用于檢測揮發(fā)性物質(zhì)靈敏度高、準(zhǔn)確度好。運(yùn)用該方法，在對照品標(biāo)準(zhǔn)溶液中，色譜圖中龍腦出峰的時(shí)間在7.621 min，愈傷組織的色譜分析顯示，在該時(shí)間處沒有吸收峰，這說明愈傷組織中不存在龍腦。組培苗、羅甸野生苗質(zhì)譜圖分析確定是龍腦，其中組培苗中龍腦的含量較野生苗低，但差異不大，原因可能是組培苗培養(yǎng)時(shí)間較短，龍腦在植物體內(nèi)有一個(gè)逐步累積的過程。但組培苗可以人工快速培育繁殖，縮短培育周期，為艾納香藥材應(yīng)用提供大量的苗木，以滿足日益增長的市場需求。

參考文獻(xiàn)：

[1] 中國科學(xué)院中國植物編輯委員會.中國植物志[M].北京：科學(xué)出版社，1979.

[2] 全國中草藥匯編編寫組.全國中草藥匯編（上冊）[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1996.

[3] 郝小燕，余 ?珍，丁智慧.黔產(chǎn)艾納香揮發(fā)油化學(xué)成分研究[J].貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2000，25（2）：121-122.

[4] 王治平，孟祥平，樊 ?華.滇桂艾納香揮發(fā)油化學(xué)成分的GC-MS分析[J].中草藥，2005，36（8）：1138-11.

[5] 周 ?欣，楊小生，趙 ?超.艾納香揮發(fā)油化學(xué)成分的氣相色譜-質(zhì)譜分析[J].分析測試學(xué)報(bào)，2001，20（5）：76-78.

[6] 方 ?燦，陳 ?琳.氣相色譜法測定艾納香油中左旋龍腦的含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2006，26（9）：1166-1167.

[7] 江興龍，潘俊鋒，司 ?健，等.艾納香人工栽培技術(shù)[J].林業(yè)科技開發(fā)，2005，19（2）：68-70.

[8] 何元農(nóng)，丁 ?映，曾令祥，等.影響艾納香移栽成活率的因素分析及技術(shù)對策[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005，33（3）：40-43.

（責(zé)任編輯 ?胡西洲）

1.5.2 ?質(zhì)譜條件 ?電子轟擊粒子源，電離能量為70 eV;離子源溫度為230 ℃;傳輸線溫度為210 ℃;四級桿溫度為150 ℃。

1.6 ?樣品的處理

分別將艾納香愈傷組織、艾納香組培苗、野生苗3種樣品用研缽粉碎，準(zhǔn)確稱取粉碎樣品8 g，放至250 mL的錐形瓶中，加無水乙醇100 mL，進(jìn)行超聲提取（超聲時(shí)間為120 min，頻率為59 Hz，功率為80%），冷卻、搖勻、過濾，濾液置于100 mL容量瓶中，放冷，加無水乙醇至刻度，搖勻，從100 mL容量瓶中再取1 mL溶液，置10 mL容量瓶中，加無水乙醇至刻度，搖勻，即為樣品溶液。

1.7 ?龍腦對照品的氣質(zhì)聯(lián)用分析

分別從0.03 mg/mL的龍腦對照品溶液及樣品溶液中精密量取1 μL溶液，運(yùn)用氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行測定。

1.7.1 ?標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 ?分別精密吸取濃度為0.02、0.03、0.04、0.05、0.06 mg/mL的龍腦對照品溶液各1 μL，依次進(jìn)樣，運(yùn)用氣質(zhì)聯(lián)用儀分別測定其峰面積，以龍腦對照品的峰面積為縱坐標(biāo)，龍腦對照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.7.2 ?精密度測定 ?取濃度為0.03 mg/mL的龍腦對照品溶液1 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，根據(jù)峰面積計(jì)算其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

1.7.3 ?重復(fù)性試驗(yàn) ?取艾納香野生苗，按照樣品溶液制備方法配制6份100 mL的溶液，根據(jù)氣質(zhì)聯(lián)用法依次對6份供試品溶液進(jìn)行測定，記錄樣品的峰面積，計(jì)算其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

1.7.4 ?加標(biāo)回收率試驗(yàn) ?分別稱取艾納香組培苗和貴州羅甸野生苗各0.04 g，制備成樣品溶液，從中各取出6份，先測出藥材中龍腦的含量，再向每份中加入0.300 mg龍腦對照品，由氣質(zhì)聯(lián)用儀測定6個(gè)樣品峰面積，計(jì)算平均回收率以及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

1.7.5 ?樣品含量的測定 ?分別量取愈傷組織供試品溶液、組培苗供試品溶液和野生苗供試品溶液各1 μL依次進(jìn)樣，測定出峰面積，計(jì)算供試品溶液中龍腦的含量，每份平行測定3次。

2 ?結(jié)果與分析

2.1 ?龍腦對照品溶液及樣品溶液氣質(zhì)聯(lián)用分析

從0.03 mg/mL的對照品溶液及樣品溶液中精密量取1 μL溶液進(jìn)樣，從圖1至4可以看出，龍腦標(biāo)準(zhǔn)品的出峰時(shí)間在7.621 min;樣品色譜圖在7.621 min有一吸收峰與龍腦標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間一致;質(zhì)譜圖檢索結(jié)果為龍腦成分。

2.2 ?線性關(guān)系分析

以龍腦的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見表1、圖5，計(jì)算回歸方程為：y=173.602 5 x，R2為0.997 01。結(jié)果表明，龍腦在0.02～0.06 mg/mL內(nèi)線性關(guān)系良好（n=5）。

2.3 ?精密度測定結(jié)果

由精密度試驗(yàn)方法，用氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行分析，結(jié)果見表2，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.44%。表明方法的精密度良好。

2.4 ?重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)重復(fù)性試驗(yàn)考察方法，由氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行測定，結(jié)果見表3。

由表3可得，6份供試品溶液中龍腦平均含量為3.621 6 mg/g，RSD為0.16%，表明方法的重復(fù)性好。

2.5 ?加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果

測得組培苗中龍腦的平均回收率97.11%，RSD為1.14%;野生苗中龍腦的平均回收率97.78%，RSD為0.67%，表明該方法的準(zhǔn)確度高（表4）。

2.6 ?樣品含量的測定

從表5可以得出艾納香組培苗中龍腦的平均含量為3.216 7 mg/g，貴州羅甸艾納香野生苗中龍腦的平均含量為3.620 0 mg/g。

3 ?小結(jié)與討論

在擬定的色譜條件下，以無水乙醇作為艾納香中龍腦的提取溶劑，采用超聲提取，簡化了樣品的制備方法，而且艾納香中龍腦的含量測定沒有受到其他成分的干擾。氣質(zhì)聯(lián)用儀用于檢測揮發(fā)性物質(zhì)靈敏度高、準(zhǔn)確度好。運(yùn)用該方法，在對照品標(biāo)準(zhǔn)溶液中，色譜圖中龍腦出峰的時(shí)間在7.621 min，愈傷組織的色譜分析顯示，在該時(shí)間處沒有吸收峰，這說明愈傷組織中不存在龍腦。組培苗、羅甸野生苗質(zhì)譜圖分析確定是龍腦，其中組培苗中龍腦的含量較野生苗低，但差異不大，原因可能是組培苗培養(yǎng)時(shí)間較短，龍腦在植物體內(nèi)有一個(gè)逐步累積的過程。但組培苗可以人工快速培育繁殖，縮短培育周期，為艾納香藥材應(yīng)用提供大量的苗木，以滿足日益增長的市場需求。

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（責(zé)任編輯 ?胡西洲）