不同產地祖師麻藥材中祖師麻甲素的含量測定

王二兵(太原科技大學化學與生物工程學院，太原 030021)

祖師麻為瑞香科植物黃瑞香(Daphne giraldii Nitsche)、陜甘瑞香(Daphne tangutica Maxim).和凹葉瑞香(Daphne retusa Hemsl).的干燥根皮與莖皮。民間廣泛用于治療疼痛、跌打損傷、風濕性關節(jié)炎和支氣管炎等癥，俗稱“打得地上爬，離不開祖師麻”［1，2］。且近年來研究發(fā)現(xiàn)，祖師麻藥材具有多方面的藥理作用，如鎮(zhèn)痛作用、抗炎作用、對心臟的作用、降壓、免疫調節(jié)作用、抗缺氧作用、抗缺血再灌注損傷作用、抗菌作用、殺蚜蟲作用、抗腫瘤作用、抗瘧作用、抗病毒活性、抗腫瘤活性、抗生育活性［3-6］等。祖師麻藥材中含有多種有效成分，如瑞香苷(daphnin)［7］、祖師麻甲素(daphnetin)［8］、7- 羥基香豆素(umbelliferone)［9］等。其中祖師麻甲素為其主要的有效成分，因此實驗選擇測定祖師麻甲素的含量，以比較不同產地祖師麻藥材的差別。實驗采用了具有檢測靈敏、準確、快速、操作簡便、重現(xiàn)性好等特點的高效液相色譜法(HPLC)法對祖師麻藥材中祖師麻甲素的含量進行了測定。

1 儀器與試劑

Agilent Technologies 1200 series高效液相色譜儀;祖師麻甲素對照品 (購于中國藥品生物制品鑒定所，批號為110900-201006);祖師麻藥材(共10批，主要是陜西省和甘肅省);甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 實驗方法與結果

2.1 檢測波長的選擇

制備祖師麻甲素的50%甲醇溶液，在200-400 nm波長范圍內進行紫外掃描，發(fā)現(xiàn)祖師麻甲素在327 nm和260 nm附近均有吸收，其中327 nm波長處吸收較強，故選擇327 nm作為祖師麻甲素的檢測波長，結果見圖1。

2.2 色譜條件

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為色譜柱;流動相:甲醇 -0.5%冰醋酸溶液(30∶70);流速:1.0 ml/min;檢測波長:327 nm;柱溫:40℃;進樣量:20 μl。理論塔板數(shù)按祖師麻甲素計算應不低于2 000。試驗表明:在此條件下，基線得以分離，未見明顯干擾，祖師麻甲素與其他組分分離良好(見圖2)。

2.3 對照品溶液的制備

取祖師麻甲素對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1 ml含0.30 mg的溶液，即得。

圖1 祖師麻甲素溶液紫外光譜圖Figure 1 Ultraviolet spectroscopy of daphnetin solution

圖2 祖師麻甲素對照品與祖師麻藥材供試品色譜圖Figure 2 HPLC of daphnetin control and Chinese traditional herb Zushima

2.4 供試品溶液的制備

取本品粗粉約1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇100 ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率25 kHz)45 min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得［10-12］。

2.5 線性關系考察

取祖師麻甲素對照品約20 mg，精密稱定，置10 ml棕色容量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度(2.04 mg/ml)，精密吸取該溶液 5，2.5，1.0，0.6，0.3 ml，分別置于10 ml棕色容量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻。在上述色譜條件下分別進樣20 μl。以峰面積(Y)為縱坐標，濃度(X，mg/ml)為橫坐標，繪制標準曲線?；貧w方程為:Y=-33.102 8+10 503.5 X(r=0.999 9)。結果 表明祖師麻甲素在0.06-2.04 mg/ml范圍內具有良好的線性關系。

圖3 祖師麻甲素標準曲線Figure 3 The calibration curve of daphnetin in Chinese traditional herb Zushima

2.6 精密度考察

精密吸取祖師麻甲素對照品溶液(C=0.51 mg/ml)20 μl，在上述色譜條件下重復進樣6次，測定峰面積，計算精密度，結果RSD(%)=0.72，結果表明:該方法的精密度良好。

2.7 重復性考察

取同一批號的祖師麻藥材各約1 g，精密稱定，平行制備6份供試品溶液，分別進樣20 μl，測得峰面積值，計算相對標準偏差。結果 祖師麻甲素的平均含量為 31.2 mg/g，RSD=1.87%，樣品的 RSD 小于3%，說明此方法重復性良好。

2.8 穩(wěn)定性考察

精密稱取祖師麻藥材，按含量測定項下方法制備成供試品溶液，分別于0 h，6 h，12 h及24 h進樣20 μl，測得峰面積值，計算相對標準偏差。結果 RSD(%)=1.54。表明在試驗條件下，供試品溶液在24 h內穩(wěn)定性良好。

2.9 回收率試驗

取6份已知含量的本品適量，精密稱定，將一定量祖師麻甲素對照品，分別加入6份供試品中，按供試品溶液制備項下操作，用上述試驗條件進行HPLC分析，計算回收量，并以下列公式計算回收率，結果見表1。回收率(%)=(測得量-取樣藥材中祖師麻甲素的量)/添加對照品量×100%。

由表1結果可知，回收率在95%-105%之間，RSD小于5%，表明方法準確度良好。

2.10 含量測定

取10個批次的祖師麻藥材，每批樣品平行處理2份供試品溶液，依法測定，結果顯示，不同產地祖師麻甲素不同(見表2)。

表1 祖師麻藥材供試回收率測定結果Table 1 Recovery test results of Chinese traditional herb Zushima

表2 10批樣品的含量測定結果Table 2 Contents of daphnetin in 10 batches of Chinese traditional herb Zushima

3 討論

在供試品溶液的處理中，曾考察過40%甲醇、50%甲醇、60%甲醇、70%甲醇、80%甲醇、50%乙醇、60%乙醇等作為提取溶劑，結果表明50%甲醇提取效率最高。也考察了不同超聲提取的時間(30 min，45 min，60 min)，經對比發(fā)現(xiàn)，超聲提取 45 min后，隨著超聲時間的增加，祖師麻甲素的含量幾乎無變化，所以超聲時間選為45 min。另外考察了不同的提取溶劑量(40 ml、60 ml、80 ml、100 ml)，結果表明100 ml的甲醇溶液提取效果最好。所以最終確定了供試品溶液的處理方法為:50%的甲醇80 ml超聲提取45 min。

從以上的的實驗結果可以看出，不同產地的祖師麻藥材，其有效成分祖師麻甲素的含量范圍為2.11%-4.46%。因此不同產地的祖師麻藥材，其藥用功效可能相同，但作為處方藥時，投料前應嚴格檢查祖師麻甲素的含量，祖師麻甲素含量較低的祖師麻藥材，建議不作為藥材使用。

［1］ 江蘇新醫(yī)學院.中藥大辭典:下冊［M］.上海:上海人民出版社，1977:1739.

［2］王明時，于明，張元君.祖師麻化學成分的研究［J］.中草藥通訊，1976，7(10):13.

［3］劉國卿，王秋娟，楊思新，等.祖師麻甲素的藥理研究［J］.中草藥通訊，1977，8(3):21.

［4］張薇，柳潤輝，張川，等.瑞香屬植物化學成分及其藥理與臨床作用的研究［J］.藥學進展，2005，29(1):22-27.

［5］張明發(fā)，沈雅琴.祖師麻甲素的抗整體小鼠缺氧作用［J］.天然產物研究與開發(fā)，1994，6(3):21-23.

［6］姜秀蓮，曲淑巖，潘光，等.祖師麻甲素對中樞神經系統(tǒng)的抑制作用［J］.中藥通報，1986，11(3):封二.

［7］王明時，于明，張元君.祖師麻化學成分的研究［J］.中草藥通訊，1976，7(10):13.

［8］任春青，尹斌.中西醫(yī)結合治療類風濕性關節(jié)炎［J］.醫(yī)藥論壇雜志，2010，31(12):102-103.

［9］ 王明時，瑪萊娜·戈加澤.祖師麻化學成分的研究(第二報)［J］.中草藥，1980，11(2):49.

［10］劉冰，呂曙華，吳貴華，等.高效液相色譜法測定祖師麻藥材中祖師麻甲素［J］.中草藥，2010，41(5):832-834.

［11］湯迎爽，康阿龍.高效液相色譜法測定祖師麻葉中祖師麻甲素含量［J］.中國藥業(yè)，2012，21(12):22-23.

［12］盛華剛.祖師麻中香豆素類成分的提取工藝研究［J］.山東中醫(yī)藥大學學報，2012，36(4):354-356.