貴妃雞蛋色素的提取及初步鑒定

劉艷芳

(阜陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院，安徽阜陽 236031)

貴妃雞又名貴婦雞［1］，原產(chǎn)于英國皇室，其身披黑白花羽，天生麗質(zhì)，頭戴鳳冠，恰似歐洲貴婦人的帽子，又像古代皇妃的鳳冠，因此，被英國皇室定名為“貴妃雞”。貴妃雞體態(tài)玲瓏，裊娜多姿，外貌奇特，善通人性，在我國有著“皇家雞”之稱，其肉質(zhì)極為鮮美，既有土雞的香滑，又有野雞的結(jié)實(shí)，更有飛禽的美味，被美食界譽(yù)為“禽中極品”［2］，深受國內(nèi)外市場歡迎。隨著人們生活水平的提高，市場上出現(xiàn)了琳瑯滿目的禽蛋，貴妃雞蛋也逐漸進(jìn)入餐桌。貴妃雞蛋的價(jià)格比普通雞蛋高出數(shù)倍，多數(shù)人認(rèn)為貴妃雞蛋的蛋黃色度深，具有營養(yǎng)保健功能，較適宜老年人、兒童食用，但因其蛋黃色素成分未能確定，其功能價(jià)值缺乏理論性指導(dǎo)。目前，對貴妃雞的研究主要集中在肉的品質(zhì)上，而對于貴妃雞蛋的研究還比較少［3］，特別是對蛋黃部分色素的成分的研究更是未見報(bào)道。本文對貴妃雞蛋的色素成分進(jìn)行提取，并通過化學(xué)和光譜分析等方法對其組分進(jìn)行初步鑒定，旨在為貴妃雞蛋與普通雞蛋功能差異提供依據(jù)，為大眾餐桌禽蛋的選擇提供參考。

1 材料與方法

1.1 主要試劑、材料及儀器

貴妃雞蛋由安徽省阜陽市潁州區(qū)特種動(dòng)物養(yǎng)殖協(xié)會(huì)提供，均為32～35周齡的貴妃雞所產(chǎn);用于提取及純化的試劑均為分析純;色素標(biāo)準(zhǔn)品購自美國sigma公司;上海精科UV756紫外可見分光光度計(jì);BECO冷凍干燥機(jī);日立L-2000高效液相色譜儀。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 貴妃雞蛋色素的純化

1)貴妃雞蛋中脫脂色素的制備

先將貴妃雞蛋的蛋殼清洗干凈并晾干，用分蛋器將蛋清及蛋黃分離開來，再把蛋黃部分放入真空冷凍干燥機(jī)中，在-30℃冷凍干燥4 d后，收集凍干粉，充氮?dú)饷芊?，低溫避光保存?/p>

稱取蛋黃凍干粉25 g，在室溫下選擇石油醚∶丙酮溶劑(2∶1，體積比)200 mL為提取液，分3次攪拌浸提，每次浸提時(shí)間為70 min。而后將3次浸提液合并于500 mL分液漏斗中，反復(fù)用少量蒸餾水洗滌5次，靜置分層，棄去下層水相，把無水碳酸鈉加入上層的有機(jī)相中脫水、過濾。將收集液 真 空 濃 縮 (40℃ 以 下)［4］，濃 縮 物 上 柱(MgO∶硅藻土 =1∶2，質(zhì)量比)處理，用石油醚∶丙酮(95∶5，體積比)洗脫除去膽固醇和中性脂肪，最后用丙酮洗脫后收集色素組分，將色素組分用氮吹儀吹干，即得貴妃雞蛋脫脂色素。充氮?dú)饷芊?，低溫避光保存?/p>

2)貴妃雞蛋脫脂色素的純化［5-7］

貴妃雞蛋中色素組分的純化采用薄層色譜法。稱取3 g薄層色譜硅膠，加去離子水15 mL于小燒杯中，調(diào)成糊狀，而后將糊狀物均勻地鋪在長方形的玻璃片上，自然晾干后放入105～110℃烘箱中，60 min后取出冷卻，即可制得0.75 mm薄層色譜板。在薄層色譜板下端2 cm處輕劃一道樣線，將貴妃雞蛋黃色素組分用丙酮溶解后，使用微量進(jìn)樣針在樣線的某處點(diǎn)樣，要求點(diǎn)樣斑點(diǎn)直徑小于2 mm，待溶劑揮發(fā)后放入層析缸。用石油醚∶丙酮∶苯(7∶2∶l，體積比)作為展層劑。將薄層板傾斜放入封閉的層析缸中，在避光處展開。展開后，刮下并收集各明顯色素帶，先后兩次用石油醚∶丙酮(3∶7，體積比)洗脫液洗脫，再上分液漏斗萃取，真空濃縮即得貴妃雞蛋純化色素組分，充氮?dú)饷芊猓蜏乇芄獗４妗?/p>

1.2.2 貴妃雞蛋純化色素的光譜鑒定［8-10］

將貴妃雞蛋純化色素用丙酮稀釋為適宜濃度，用分光光度計(jì)對其在360～710 nm波長處進(jìn)行掃描，記錄UV-VIS掃描圖譜。

1.2.3 貴妃雞蛋純化色素的化學(xué)鑒定［11］

1)與濃硫酸的反應(yīng)

在貴妃雞蛋純化色素中加入10 mL的氯仿、2 mL的濃硫酸，并靜置10 min以上，觀察其顏色的變化。

2)與三氯化銻的反應(yīng)

在貴妃雞蛋純化色素中加入10 mL的氯仿、2 mL的三氯化銻氯仿溶液，并靜置反應(yīng)10 min以上，觀察其顏色的變化。

1.2.4 貴妃雞蛋純化色素的色譜分析

1)貴妃雞蛋純化色素的薄層色譜分析［12-14］

稱取1g薄層色譜硅膠，按照本文的方法制備0.25 mm的薄層色譜板。在薄層色譜板下端2 cm處輕劃一道樣線，將貴妃雞蛋黃色素組分用丙酮溶解后，使用微量進(jìn)樣針在樣線的某處點(diǎn)樣，要求點(diǎn)樣斑點(diǎn)直徑小于2 mm。與此同時(shí)，將葉黃素、β-胡蘿卜素和α-胡蘿卜素3種標(biāo)準(zhǔn)品用適量丙酮溶解后，按同種方法進(jìn)行點(diǎn)樣。點(diǎn)樣完畢，待溶劑揮發(fā)后將薄層板放入層析缸，展開樣品，進(jìn)行薄層色譜對比。

2)貴妃雞蛋純化色素的高效液相色譜分析［15-18］

采用反相高效液相色譜法。色譜柱:Dvelosil C30柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);紫外檢測器;流動(dòng)相A為乙腈∶甲醇(70∶30，體積比)，流動(dòng)相B為MTBE;流速為0.8 mL/min;檢測波長為460 nm;進(jìn)樣量為20 μL;梯度洗脫50 min，從100%流動(dòng)相A到100%流動(dòng)相B［5］。

2 結(jié)果與分析

2.1 貴妃雞蛋純化色素的光譜鑒定

由圖1可見，對貴妃雞蛋純化后的色素在360～710nm波長進(jìn)行掃描，光譜吸收峰呈現(xiàn)典型類胡蘿卜素的“三指狀”峰［19］，可初步判斷該色素物質(zhì)為類胡蘿卜素，450 nm為最大吸收波長。

圖1 貴妃雞蛋純化色素的光譜鑒定

2.2 貴妃雞蛋純化色素的化學(xué)鑒定

貴妃雞蛋純化色素組分中加入10 mL的氯仿、2 mL的濃硫酸，靜置10 min后，溶液的顏色呈現(xiàn)為藍(lán)綠色。貴妃雞蛋純化色素組分溶于10 mL的氯仿、2 mL的三氯化銻氯仿溶液，靜置反應(yīng)10 min后，溶液顏色呈現(xiàn)為藍(lán)色。這2個(gè)反應(yīng)皆為多烯烴類胡蘿卜素物質(zhì)的特征性顏色反應(yīng)［20］，表明貴妃雞蛋純化色素組分中含有多烴類胡蘿卜素。

2.3 貴妃雞蛋純化色素的色譜分析

2.3.1 貴妃雞蛋純化色素的薄層色譜分析［21］

貴妃雞蛋純化色素與α-胡蘿卜素、葉黃素、β-胡蘿卜素薄層色譜圖見圖2。由圖2可以看出，貴妃雞蛋純化色素由石油醚∶丙酮∶苯(7∶2∶1，體積比)展層劑點(diǎn)樣展開后，可分離出3個(gè)明顯的色帶，且這3個(gè)色帶與葉黃素、玉米黃素及β-胡蘿卜素薄層色譜分別具有對應(yīng)關(guān)系。葉黃素、玉米黃素及β-胡蘿卜素3個(gè)組分均屬于多烯烴類胡蘿卜素，這與本文的結(jié)論一致。因此，通過薄層色譜法對比分析，確定了貴妃雞蛋純化色素中含有葉黃素、玉米黃素及β-胡蘿卜素3種類胡蘿卜素組分，Rf值依次分別為0.62，0.72，0.78。

圖2 貴妃雞蛋純化色素與α-胡蘿卜素、葉黃素、β-胡蘿卜素薄層色譜圖

2.3.2 貴妃雞蛋純化色素的高效液相色譜分析

貴妃雞蛋純化色素的高效液相色譜見圖3、4。比較圖3、4可見:貴妃雞蛋色素純化物的組分1與葉黃素的保留時(shí)間一致;組分2與玉米黃素的保留時(shí)間一致;組分3與β-胡蘿卜素的保留時(shí)間一致。因此，貴妃雞蛋高效液相色譜的測定進(jìn)一步證實(shí)了貴妃雞蛋中含有葉黃素、玉米黃素及β-胡蘿卜素3種類胡蘿卜素。

圖3 葉黃素、玉米黃素、β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相色譜圖1

圖4 葉黃素、玉米黃素、β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相色譜圖2

3 結(jié)束語

本文以凍干蛋黃粉為原料，通過有機(jī)試劑提取、洗脫，薄層色譜純化獲取貴妃雞蛋純化色素，并通過光譜分析、化學(xué)反應(yīng)、色譜分析等方法，對貴妃雞蛋純化色素組分進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明:貴妃雞蛋色素純化物經(jīng)紫外可見分光光度計(jì)測定后，UV-VIS圖譜呈現(xiàn)出“三指狀”峰，且具備類胡蘿卜素的特征性化學(xué)反應(yīng)，證明貴妃雞蛋色素中含有多烯烴類胡蘿卜素;采用薄層色譜分析，初步鑒定出貴妃雞蛋純化色素中含有葉黃素、玉米黃素及β-胡蘿卜素3種類胡蘿卜素。此結(jié)論經(jīng)過高效液相色譜分析進(jìn)一步得到證實(shí)。

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