球孢白僵菌兩種施用方式對(duì)侵染桔小實(shí)蠅的影響及田間的防治效果

潘志萍，李敦松，黃少華，曾 玲

(1.廣東省昆蟲(chóng)研究所，廣州 510260;2.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，廣州 510640;3.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)昆蟲(chóng)生態(tài)研究室，廣州 510642)

桔小實(shí)蠅Bactrocera dorsalis (Hendel)，又稱(chēng)東方實(shí)蠅，食性雜、寄主廣泛，可為害芒果、柑桔、柚子、番石榴、楊桃等250 多種水果和蔬菜，是東南亞及太平洋地區(qū)主要果蔬害蟲(chóng)之一(Bateman，1972;Shukla and Prasad，1985;Vargas and Janmes，1990)。由于其幼蟲(chóng)蛀食瓜果果肉而導(dǎo)致果實(shí)變質(zhì)腐爛，對(duì)熱帶、亞熱帶瓜果造成了嚴(yán)重的危害，被許多國(guó)家列為檢疫性害蟲(chóng)(Southwood and Comins，1976)。目前桔小實(shí)蠅的防治仍是一個(gè)難題，許多受害水果均必須套袋才能有收成，因此尋找防控桔小實(shí)蠅新的有效途徑迫在眉睫。

球孢白僵菌Beauveria bassiana Vuillemin 為一種重要的殺蟲(chóng)真菌，在害蟲(chóng)微生物防治的基礎(chǔ)與應(yīng)用研究中備受注目(Feng et al.，1994)。目前應(yīng)用白僵菌防治桔小實(shí)蠅尚處研究的初步階段(潘志萍等，2006;潘志萍等，2008;章玉蘋(píng)等，2009)。盡管室內(nèi)對(duì)球孢白僵菌B6 菌株對(duì)桔小實(shí)蠅成蟲(chóng)具有較強(qiáng)的致病力，對(duì)蛹與老熟幼蟲(chóng)也有明顯的致病作用，但果園溫、濕度條件與室內(nèi)差異較大，成蟲(chóng)飛翔能力強(qiáng)，菌液一般較難直接噴施到蟲(chóng)體，而老熟幼蟲(chóng)在果園土表或落果化蛹，菌液未必能接觸到蛹或老熟幼蟲(chóng)。因此，有必要對(duì)球孢白僵菌防治桔小實(shí)蠅的施菌方法和田間防效進(jìn)一步的研究，以探索施菌的最佳時(shí)間、最佳施藥方式和最佳方案。

1 材料與方法

1.1 供試蟲(chóng)源、菌種及試驗(yàn)地

從田間采集被桔小實(shí)蠅為害的楊桃、番石榴等果實(shí)，收集桔小實(shí)蠅幼蟲(chóng)，置于溫度 (25±3)℃，相對(duì)濕度75%-90%，光周期12 L∶12D的室內(nèi)養(yǎng)蟲(chóng)室用人工飼料飼養(yǎng)2 代后供試。

從蚊子上分離到的球孢白僵菌，由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)環(huán)境與可持續(xù)發(fā)展研究所真菌農(nóng)藥創(chuàng)制實(shí)驗(yàn)室提供，經(jīng)本研究用桔小實(shí)蠅成蟲(chóng)與蛹篩選確認(rèn)該菌對(duì)桔小實(shí)蠅具有較高的致病力。

冰箱保存的試管斜面菌種，移至新鮮的SDAY斜面培養(yǎng)基上，在25℃、L∶D=8 h∶16 h 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10-15 d 后備用。

新鮮孢子粉的準(zhǔn)備:新鮮培養(yǎng)的試管斜面孢子粉接種到廣口瓶斜面SDAY 培養(yǎng)基上擴(kuò)繁，在25℃、L∶D=8 h∶16 h 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)后備用。

試驗(yàn)材料:將室外采回的河沙過(guò)篩、洗凈后晾干，于150℃烘箱中消毒2 h，冷卻后調(diào)節(jié)含水量為5%備用。

試驗(yàn)地:位于廣東省博羅縣石龍鎮(zhèn)番石榴果園，面積約2000 m2，約有60-70 株番石榴果樹(shù)，樹(shù)高3-4 m。果樹(shù)周?chē)孛骈L(zhǎng)有一些雜草，周?chē)沁B片的番石榴林。

1.2 方法

1.2.1 球孢白僵菌誘集侵染桔小實(shí)蠅成蟲(chóng)的方式比較

在40 cm×40 cm×40 cm 的養(yǎng)蟲(chóng)籠中引入30頭羽化3-5 d 的成蟲(chóng)(♀∶=1∶1)，并做如下處理:

處理1:在飼料(酵母∶白糖=1∶3)中加適量的桔小實(shí)蠅性引誘劑和2mL 孢子懸浮液，混勻。

處理2:在飼料(酵母∶白糖=1∶3)中加入2 mL 孢子懸浮液，混勻。

CK:在飼料(酵母∶白糖=1∶3)中加入2 mL清水，混勻。

每個(gè)處理重復(fù)3 次，置于培養(yǎng)箱25± 1℃，RH ＞70%條件下培養(yǎng)，每5 d 更換一次飼料，記錄，并將死蟲(chóng)移出進(jìn)行保濕培養(yǎng)，以蟲(chóng)體表面長(zhǎng)出菌絲為有效致死，觀察20 d，統(tǒng)計(jì)死亡率。

1.2.2 三種施用方式侵染桔小實(shí)蠅幼蟲(chóng)的效果比較

將100 頭的桔小實(shí)蠅老熟幼蟲(chóng)挑入盛有高度為5 cm 細(xì)沙的36 cm×50 cm 托盤(pán)中，采取以下方式進(jìn)行處理:

處理1:噴施500 mL 1.2×108孢子/mL 的球孢白僵菌孢子懸浮液。

處理2:在細(xì)沙表面放置新鮮的表面長(zhǎng)有菌絲的僵蟲(chóng)30 頭，然后噴施500 mL 清水。

處理3:在細(xì)沙表面施用麥麩培養(yǎng)的白僵菌菌粉50 g，然后噴施500 mL 清水。

CK:噴施500 mL 清水。

處理完畢后覆蓋上一層報(bào)紙，并噴施清水保濕，置于60 cm×80 cm 籠子中，置于室外自然變溫為15-28℃中培養(yǎng)。每處理3 次重復(fù)。每天保濕，觀察20 d，記錄并統(tǒng)計(jì)各處理中的化蛹率、羽化率及成蟲(chóng)死亡率。

1.3 施用球孢白僵菌果園噴施效果調(diào)查

在果實(shí)掛果中后期，選取4 個(gè)處理區(qū)進(jìn)行試驗(yàn)，每個(gè)小區(qū)選5 株果樹(shù)，在每株樹(shù)上按東、南、西、北、中五個(gè)方位隨機(jī)選取生長(zhǎng)較一致的30 個(gè)果實(shí)，進(jìn)行掛牌，分別對(duì)小區(qū)做以下處理:

處理1:噴施濃度約2.0×108孢子/mL 球孢白僵菌孢子懸浮液進(jìn)行防治，除了對(duì)樹(shù)冠進(jìn)行噴施外，還對(duì)果樹(shù)周?chē)牡孛孢M(jìn)行噴施，再覆蓋干草進(jìn)行保濕。

處理2:對(duì)樹(shù)冠及周?chē)M(jìn)行噴施40%樂(lè)斯本2500 倍進(jìn)行防治;

處理3:對(duì)樹(shù)冠及周?chē)M(jìn)行噴施4.5%高效氯氰菊酯2500 倍進(jìn)行防治;

對(duì)照區(qū):對(duì)樹(shù)冠及周?chē)M(jìn)行噴施清水。

處理后，每隔3 d 調(diào)查一次番石榴被害率，持續(xù)20 d。同時(shí)在果園四周離地面1.5 m 的地方掛誘集瓶10 個(gè)，每隔3 d 調(diào)查一次，監(jiān)測(cè)桔小實(shí)蠅成蟲(chóng)種群動(dòng)態(tài)。

1.4 評(píng)價(jià)方法與數(shù)據(jù)分析

采用簡(jiǎn)化后的干擾作用控制指數(shù)(Interference Index of Population Control，IIPC)作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。當(dāng)IIPC＜1 時(shí)，表明施菌方式對(duì)桔小實(shí)蠅實(shí)驗(yàn)種群有一定的影響，影響作用的大小可以用IIPC 值的大小進(jìn)行估計(jì)，IIPC 越小，表明對(duì)桔小實(shí)蠅實(shí)驗(yàn)種群的影響作用就越大;IIPC=1 時(shí)，表明與對(duì)照作用一致;IIPC ＞1 時(shí)，表明施菌方式對(duì)桔小實(shí)蠅實(shí)驗(yàn)種群有促進(jìn)的作用。其計(jì)算方法如式(1)或式(2):

式(1)中N0tr、N0ck分別為處理及對(duì)照成蟲(chóng)起始卵量。

式(2)中I 為種群趨勢(shì)指數(shù)，I'為受作用因式分解干擾i 后的種群趨勢(shì)指數(shù)。

對(duì)于處理小區(qū)分別按下式公式計(jì)算防治效果:

2 結(jié)果與分析

2.1 球孢白僵菌不同施用方式對(duì)侵染桔小實(shí)蠅的影響

2.1.1 不同施菌方式球孢白僵菌侵染桔小實(shí)蠅成蟲(chóng)的效果

據(jù)表1 可知，在兩種誘集感染方式處理下，桔小實(shí)蠅成蟲(chóng)存活率分別為40%、41.7%，但差異不顯著，說(shuō)明添加了性引誘劑在白僵菌侵染桔小實(shí)蠅的過(guò)程中并沒(méi)有起到明顯地促進(jìn)地桔小實(shí)蠅感病的作用。IIPC 處于0.41-0.44，說(shuō)明這兩種誘集感染方式對(duì)桔實(shí)蠅成蟲(chóng)有一定的控制作用。

表1 兩種施用方式球孢白僵菌侵染桔小實(shí)蠅成蟲(chóng)的效果Table 1 Infecting effect of B.bassiana to B.dorsalis adults at two types of spraying

2.1.2 不同施菌方式球孢白僵菌侵染桔小實(shí)蠅成蟲(chóng)的速效性比較

從桔小實(shí)蠅成蟲(chóng)被侵染到死亡時(shí)間來(lái)看，處理1 (飼料+性誘劑+白僵菌菌液)成蟲(chóng)發(fā)病的時(shí)間明顯地比處理2 (飼料+白僵菌菌液)成蟲(chóng)發(fā)病時(shí)間提前(見(jiàn)圖1)。也就是說(shuō)性引誘劑有吸引桔小實(shí)蠅成蟲(chóng)取食的作用，并加速了白僵菌B6 菌株進(jìn)入昆蟲(chóng)體內(nèi)的時(shí)間，導(dǎo)致桔小實(shí)蠅成蟲(chóng)發(fā)病死亡，從而縮短了病程。

圖1 不同施菌方式球孢白僵菌侵染桔小實(shí)蠅成蟲(chóng)的速效性比較Fig.1 Comparison of infecting speeds of Beauveria bassiana to Bactrocera dorsalis adults when two spraying methods used

2.1.3 三種施菌方式下球孢白僵菌侵染桔小實(shí)蠅幼蟲(chóng)的效果

除了處理1 與對(duì)照在化蛹率方面差異不顯著，三種施菌方式在羽化率、成蟲(chóng)存活率方面與對(duì)照差異均顯著(見(jiàn)表2)。因此可知，噴施孢子懸浮液、接入新鮮的僵蟲(chóng)與施用麥麩培養(yǎng)的菌粉這三種施菌方式均可明顯地降低桔小實(shí)蠅種群的數(shù)量，減輕其為害，但處理組之間差異均不顯著。

以IIPC 為評(píng)價(jià)指標(biāo)，施菌方式對(duì)各因子的影響大小順序?yàn)?成蟲(chóng)存活率 ＞羽化率＞化蛹率，其中以對(duì)成蟲(chóng)存活率的影響最大。

2.2 應(yīng)用球孢白僵菌田間防治桔小實(shí)蠅的效果

從噴施球孢白僵菌B6 菌株的孢子懸浮液至試驗(yàn)結(jié)束的這段期間，溫度變化范圍為14.8-31.9℃，最低日均溫16.5℃，最高日均溫28.3℃，平均日均溫21.9℃。從降雨情況看，共有10 個(gè)降雨日，其中日降雨不超過(guò)10 mm 的小雨日7 d，10-25 mm 中雨日2 d，25-50 mm 大雨日1 d，總降雨量為93.9 mm，日最大降雨量為26.5 mm，日均降雨量為4.7 mm，日均相對(duì)濕度為85.3%。

表2 三種施菌方式下球孢白僵菌侵染桔小實(shí)蠅幼蟲(chóng)的效果Table 2 Effect of three spaying ways on Beauveria bassiana in fection to Bactrocera dorsalis larvae

各處理的果實(shí)平均被害率隨時(shí)間變化的觀察值見(jiàn)表3 所示。在果實(shí)開(kāi)始成熟的初期，各處理區(qū)的防治效果差異不明顯，但隨著時(shí)間的推移，各處理區(qū)的果實(shí)被害率明顯地低于對(duì)照區(qū)，說(shuō)明三種處理方法均對(duì)番石榴果園中桔小實(shí)蠅種群具有明顯的控制作用。

用不同處理方法進(jìn)行防治，取得的效果也明顯不同。從表3 防治效果可知，效果最好的是用樂(lè)斯本進(jìn)行噴霧防治的小區(qū)，持效期長(zhǎng)，控制作用明顯;其次是噴施球孢白僵菌孢子懸浮液與施用高效氯氰菊酯的小區(qū)。后兩種處理防治情形相似，前期防治效果基本一致，但是隨著時(shí)間的推移與雨水的沖刷，白僵菌防治的優(yōu)點(diǎn)變得更為突出，防治效果時(shí)間更長(zhǎng)。這說(shuō)明在適宜的溫、濕度條件下，桔小實(shí)蠅接觸球孢白僵菌分生孢子后便能很快地侵入蟲(chóng)體，不易被雨水沖冼失效，從而保證了球孢白僵菌的防治效果。

表3 果園球孢白僵菌防治桔小實(shí)蠅的試驗(yàn)結(jié)果Table 3 Results of treatment on Beauveria bassiana control Bactrocera dorsalis in orchard

3 結(jié)論與討論

對(duì)于實(shí)蠅類(lèi)害蟲(chóng)來(lái)說(shuō)，均有落地化蛹的習(xí)性。這時(shí)害蟲(chóng)處于靜止期，是利用蟲(chóng)生真菌防治的理想時(shí)期。應(yīng)用球孢白僵菌防治桔小實(shí)蠅，因幼蟲(chóng)為鉆蛀為害，與釋放菌株接觸機(jī)會(huì)更多的是成蟲(chóng)或蛹，因此尋找適宜的球孢白僵菌施菌方式，合理地評(píng)價(jià)其對(duì)桔小實(shí)蠅田間防效是非常必要的。在白僵菌侵染寄主的影響因素中，溫濕度是至關(guān)重要的(林華峰等，1999)。在田間施用白僵菌時(shí)，應(yīng)充分地考慮到分生孢子易受溫濕度、紫外線等因素的影響而失活。本試驗(yàn)中用麥麩培養(yǎng)的菌粉，孢子能在麥麩上保存一段時(shí)間，不易分解失活且有保濕的作用，加上雨水沖冼沉淀，使分生孢子容易接觸到桔小實(shí)蠅的蛹，因此防治效果較好;在接入了新鮮的僵蟲(chóng)時(shí)，除了分生孢子能在僵蟲(chóng)體內(nèi)存活一段時(shí)間外，僵蟲(chóng)還能不斷地產(chǎn)生新的分生孢子，加上雨水沖冼沉淀在沙土中，也較易接觸到在沙土中化蛹的桔小實(shí)蠅，但費(fèi)時(shí)工作量大，不宜提倡田間使用。而直接噴施白僵菌孢子懸子浮液時(shí)，由于分生孢子直接裸露在大氣中，易受溫濕度、紫外線等因素的影響使孢子失活，因此，應(yīng)采用適宜的保護(hù)劑如熒光素鈉、七葉靈和小孽堿等，與適當(dāng)?shù)妮d體如滑石粉、高嶺土、凹凸棒土、硅藻土等來(lái)增加孢子在環(huán)境中的穩(wěn)定性，才能取得良好的防治效果。

球孢白僵菌分生孢子萌發(fā)和侵染的適宜溫度為20-25℃，對(duì)其他環(huán)境條件的要求較高，如濕度較低，孢子不能正常萌發(fā)，致病效果較差;如果連續(xù)降雨或噴藥后一次性較大的降雨也可直接影響白僵菌孢子粉的附著，降低田間防治效果(應(yīng)盛華和馮明光，2001;許壽濤等，2002;濮小英等，2004)。本試驗(yàn)中，氣溫始終既適合桔小實(shí)蠅的繁衍，也適宜球孢白僵菌侵染，而且噴施球孢白僵菌孢子懸浮液后多為陰雨天氣，有利于桔小實(shí)蠅感染發(fā)病，因而獲得了較為理想的防治效果。尤其值得關(guān)注的是，本試驗(yàn)田間防治在完全自然的條件下進(jìn)行，證實(shí)了使用球孢白僵菌防治桔小實(shí)蠅為害的可能性。廣東省春季溫度較高、水雨較多，是多種作物的生長(zhǎng)季節(jié)和害蟲(chóng)的盛發(fā)季節(jié)，也正是最適合使用球孢白僵菌控制這些害蟲(chóng)的季節(jié)。

本試驗(yàn)結(jié)果表明白僵菌能在土壤保持較穩(wěn)定的致病力，能侵染土壤中落地化蛹的桔小實(shí)蠅，這對(duì)尤其是具有土壤生活史的實(shí)蠅的控制具有重要的意義。因此，適宜的溫濕度條件下，在桔小實(shí)蠅化蛹高峰期，適時(shí)施用白僵菌與高效低毒殺蟲(chóng)劑混用、輪用或與其它防治措施配合使用，有利于控制該蟲(chóng)發(fā)生。果園的小氣候相對(duì)較穩(wěn)定，噴施的白僵菌較容易定殖，不易散失，而且果園的環(huán)境條件可人為地創(chuàng)造，形成一個(gè)有利于白僵菌流行的環(huán)境，提高白僵菌可持續(xù)的防治效果。

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