乳鐵蛋白對原代大鼠成骨細胞IGFBP—3、IGFBP—4、IGFBP—5 mRNA表達的影響

王梅麗+侯建明+林帆+林慶明+藍旭華+薛英

[摘要] 目的 研究乳鐵蛋白對原代大鼠成骨細胞胰島素生長因子結合蛋白-3（IGFBP-3）、胰島素生長因子結合蛋白-4（IGFBP-4）、胰島素生長因子結合蛋白-5（IGFBP-5）mRNA表達的影響。 方法 用混合酶消化法分離大鼠顱骨成骨細胞，進行原代培養(yǎng)。細胞以6×103/cm2接種于六孔板內(nèi)，用不同濃度乳鐵蛋白即0 μg/ml（對照組）、0.1 μg/ml（乳鐵蛋白1組）、1 μg/ml（乳鐵蛋白2組）、10 μg/ml（乳鐵蛋白3組）、100 μg/ml（乳鐵蛋白4組）、1000 μg/ml（乳鐵蛋白5組）干預原代大鼠成骨細胞1、3、5、7 d后提取總RNA，采用熒光定量PCR技術分析IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5 mRNA的表達。 結果 與對照組比較，各濃度組及時間段對IGFBP-3 mRNA表達的影響不穩(wěn)定，時高時低。與對照組比較，除了乳鐵蛋白1組外，其他濃度對IGFBP-4 mRNA的表達呈濃度梯度的抑制（P<0.01）。與對照組比較，實驗干預第1天，呈濃度梯度抑制IGFBP-5 mRNA的表達（P<0.01），乳鐵蛋白4、5組在第5、7天表現(xiàn)為繼續(xù)抑制（P<0.01），而其他時間及濃度對IGFBP-5 mRNA的表達調(diào)控不穩(wěn)定。 結論 乳鐵蛋白影響原代大鼠成骨細胞IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5 mRNA的表達，其中乳鐵蛋白對IGFBP-3、IGFBP-5 mRNA表達的調(diào)控不穩(wěn)定，而乳鐵蛋白抑制IGFBP-4 mRNA的表達呈濃度依賴性，濃度越高抑制作用越強。

[關鍵詞] 乳鐵蛋白；成骨細胞；胰島素生長因子結合蛋白-3；胰島素生長因子結合蛋白-4；胰島素生長因子結合蛋白-5

[中圖分類號] R329.2+4 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2014）11（b）-0004-05

乳鐵蛋白是一種分子量為80 kDa的鐵結合蛋白，屬于轉(zhuǎn)鐵蛋白家族，主要存在于母乳、中性粒細胞及其次級顆粒中[1]。正常情況下，乳鐵蛋白在體內(nèi)的濃度為2×106～6×106 g/ml[2]，具有免疫調(diào)節(jié)、抑菌抗炎等作用，是一種多效應因子[3-4]。近年來，乳鐵蛋白被發(fā)現(xiàn)具有促進成骨細胞增殖和骨生長的作用。除了胰島素樣生長因子結合蛋白1（insulin-like growth factor binding protein 1，IGFBP-1），成骨細胞表達IGFBP-2～6，它們是六種同源異構物[5]。大量相似的研究發(fā)現(xiàn)，成骨的增殖和骨形成受胰島素生長因子結合蛋白的調(diào)控，其中IGFBP-3，4，5很可能是發(fā)揮作用的關鍵因子。本研究通過不同濃度乳鐵蛋白作用于原代鼠成骨細胞1、3、5、7 d后用實時熒光定量PCR檢測大鼠成骨細胞IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5 mRNA的表達，以探討乳鐵蛋白影響成骨細胞增殖及與IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5之間的關系機制。

1 材料與方法

1.1 材料

出生24 h內(nèi)的SD乳鼠（吳氏動物），牛源乳鐵蛋白（恒天然 Fonterra，純度>90%），胎牛血清（GIBCO），DMEM（GIBCO），0.25%Trypsin-EDTA（GIBCO），雙抗（青霉素、鏈霉素，Hyclon公司），堿性磷酸酶染色試劑盒（南京建成生物公司），SABC免疫組織化學試劑盒（武漢博士德公司），Ⅰ型膠原酶（Invitrogen）DMSO（GIBCO），TRIZOL（美國Invitrogen公司），RNAiso Plus（TAKARA），Primescript RT reagent kit（TAKARA：DRR037A），dH2O，引物（TAKARA），SYBR？誖 Premix Ex TaqTM Ⅱ（Perfect Real Time）（Takara Code：DRR081），反轉(zhuǎn)錄儀（Takara），實時熒光定量PCR儀（Takara），紫外分光光度計（NanoDrop ND-1000）。

1.2 方法

1.2.1 原代大鼠成骨細胞的培養(yǎng)

取出生24 h內(nèi)的SD乳鼠6只，頸部脫臼處死消毒，剪下頭顱浸泡于75%乙醇5 min。將頭顱置于裝有PBS的培養(yǎng)皿中，剔除顱骨的結締組織及其骨膜。用PBS沖洗骨片至發(fā)白后將其剪成1 mm×1 mm×1 mm的組織片。3 ml 0.25%胰酶（含EDTA）磁粒子37℃恒溫攪拌15 min，去上清后加入0.25%胰酶和Ⅰ型膠原酶（1 ml∶4 ml）混合物，再次37℃恒溫攪拌消化60 min。取上清，1000 r/min離心10 min后棄上清。取10%完全培養(yǎng)液6 ml重懸，一分為二置于兩個培養(yǎng)瓶中，10 min差速貼壁分離成纖維細胞兩次后置于37℃、濕度5%的細胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

1.2.2 成骨細胞的鑒定

1.2.2.1 細胞形態(tài)學觀察 在倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)結構及生長狀況。

1.2.2.2 堿性磷酸酶染色 采用偶氮偶聯(lián)法，將二代細胞接種于5 cm×5 cm無菌蓋玻片上，置于6孔板培養(yǎng)。固定：取出細胞爬片用固定液固定3 min左右；加底物應用液：在固定后的細胞爬片上滴加新鮮配制的底物應用液并蓋滿樣本部分，加蓋疏水膜，放置濕盒中，避光37℃孵育15 min，水洗；復染：用蘇木素或甲基綠染3 min，水洗，鏡檢，拍照。

1.2.2.3 Ⅰ型膠原免疫組織化學（SABC法） 取出提前制備好的密度均勻的細胞爬片，PBS洗3遍，5 min/次，用多聚甲醛固定30 min；吸出固定用的多聚甲醛，用PBS洗3遍，5 min/次，用蒸餾水洗3次，2 min/次；用3%H2O2去離子水室溫孵育10 min，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性；蒸餾水浸泡沖洗5 min；滴加封閉山羊血清工作液，室溫下孵育15 min，甩去多余液體勿洗；滴加稀釋的一抗，即兔抗大鼠的Ⅰ型膠原抗體，濃度為1∶100，37℃孵育2～3 h或4℃過夜（對照組不加一抗，用蒸餾水代替）；PBS沖洗3 min×3次，加入生物素標記山羊抗兔二抗；20～37℃孵育20 min，用PBS洗2 min×3次；滴加試劑SABC，20～37℃孵育20 min，PBS洗5 min×4次；DAB顯色：取1 ml蒸餾水，加入試劑盒中A、B、C液各1滴，混勻后加至細胞爬片，室溫下顯色，鏡下控制反應時間（5～30 min），蒸餾水沖洗；鏡下觀察染色情況并拍照。

1.2.3 實驗分組

實驗根據(jù)乳鐵蛋白濃度共分為6組，分別為對照組（0 μg/ml）、乳鐵蛋白1組（0.1 μg/ml）、乳鐵蛋白2組（1 μg/ml）、乳鐵蛋白3組（10 μg/ml）、乳鐵蛋白4組（100 μg/ml）、乳鐵蛋白5組（1000 μg/ml）。

1.2.4 實時熒光定量PCR測定IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5 mRNA的相對表達量

1.2.4.1 引物的設計和合成 引物詳細信息從GenBank獲取，引物合成由TAKARA Biotechnology （Dalian）Co.，Ltd.完成。引物序列和分子量見表1。

1.2.4.2 總RNA的提取和cDNA的合成 貼壁細胞總RNA的提取按照RNAiso Plus（Takara code：D9108A）的操作說明書提取，用紫外分光光度計檢測濃度和純度，并經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳鑒定完整性。參照Primescript RT reagent kit （Takara公司）說明書配制反轉(zhuǎn)錄反應體系，在反轉(zhuǎn)錄儀上進行cDNA的合成。

1.2.4.3 實時熒光定量Real Time PCR反應 根據(jù)說明書配制PCR反應液后在擴增儀上進行PCR反應。PCR擴增標準程序：Stage one：預變性（Repeat 1），95℃ 30 s。Stage two：PCR 反應（Repeat 40），95℃ 5 s；60℃ 30 s（熒光信號采集）。Stage three：融解曲線分析（Repeat 1），95℃ 15 s；60℃ 30 s；95℃，15 s熒光信號采集。

根據(jù)Real Time PCR反應結果中的Ct值，進行mRNA的相對表達量計算，每組設3個平行孔，實驗分別重復3次。mRNA的相對表達量計算：設定對照組相對表達量為1，表達差異計算：=2-ΔΔCt。ΔΔCt=（Ct目的基因-Ct管家基因）實驗組-（Ct目的基因-Ct管家基因）對照組。2-ΔΔCt表示的是實驗組目的基因的表達相對于對照組的變化倍數(shù)。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計學分析軟件處理數(shù)據(jù)，符合正態(tài)分布的計量資料用均數(shù)±標準差（x±s）表示，采用重復測量設計的方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 相差顯微鏡下的原代大鼠成骨細胞（染色前）

在相差顯微鏡下觀察細胞，發(fā)現(xiàn)細胞狀態(tài)良好，細胞完全伸展，折光性好，可見胞核及胞質(zhì)，體積較大，胞質(zhì)豐富，多為單核，有多邊形、長梭型及三角形，呈“鋪路石樣”排列，胞質(zhì)向外伸展，并伸出突觸，符合成骨細胞的特征（圖1）。

2.2 成骨細胞鑒定

2.2.1 SABC：Ⅰ型膠原酶免疫組織化學結果

免疫組織化學染色結果陽性，胞質(zhì)被染成棕黃色，符合成骨細胞特征（圖2）。

2.2.2 ALP鑒定結果

倒置相差顯微鏡下可見細胞呈典型成骨細胞特征，貼壁生長，體積較大，胞質(zhì)豐富，形態(tài)不規(guī)則，多為單核，有1～3個核仁，細胞呈三角形、多邊形、長梭形等，呈“鋪路石樣”排列，胞質(zhì)向外伸展，并伸出突觸。堿性磷酸酶染色結果顯示，細胞呈陽性反應，細胞核呈藍紫色，胞質(zhì)中有咖啡色顆粒，有少量顆粒分散在細胞周圍，符合成骨細胞特征（圖3）。

2.3 不同濃度乳鐵蛋白干預原代大鼠成骨細胞1、3、5、7 d后對IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5 mRNA表達的影響

2.3.1 IGFBP-3 mRNA的表達

第1天，乳鐵蛋白1～5組與對照組比較，乳鐵蛋白4、5組抑制了IGFBP-3 mRNA的表達；第3天差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；第5天，乳鐵蛋白1～4組與對照組比較，抑制了IGFBP-3 mRNA的表達，而乳鐵蛋白5組又促進了其表達，但是促進趨勢不高；第7天，乳鐵蛋白3、4組與對照組比較，抑制了IGFBP-3 mRNA的表達，而乳鐵蛋白5組又促進了其表達（表2）?？梢?，乳鐵蛋白對IGFBP-3 mRNA表達的調(diào)控不穩(wěn)定，與時間和濃度不呈一定規(guī)律性。

2.3.2 IGFBP-4 mRNA的表達

第1、5天，與對照組比較，除了乳鐵蛋白1組外，其他各組對IGFBP-4 mRNA的表達呈一定濃度梯度的抑制（P<0.05）；第3天，乳鐵蛋白1～5組較對照組均抑制mRNA的表達（P<0.01），呈一定濃度梯度的抑制；第7天乳鐵蛋白1～3組較對照組差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），而乳鐵蛋白4、5組較對照組有抑制mRNA表達的趨勢（P<0.05），乳鐵蛋白5組抑制作用最強（P<0.01）（表3）?？芍殍F蛋白抑制了IGFBP-4 mRNA的表達，呈濃度依賴性。

2.3.3 IGFBP-5 mRNA的表達

第1天，與對照組比較，乳鐵蛋白1～5組對IGFBP-5 mRNA的表達主要起抑制作用（P<0.01）；第3天，與對照組比較，乳鐵蛋白1、2組促進了IGFBP-5 mRNA的表達，但是趨勢較弱；第5天，乳鐵蛋白4、5組與對照組比較，抑制了IGFBP-5 mRNA的表達（P<0.01）；第7天，與對照組比較，除了乳鐵蛋白3組，各組抑制了IGFBP-5 mRNA的表達（P<0.01）（表4）。可知，乳鐵蛋白對IGFBP-5 mRNA的表達主要為抑制作用，呈一定濃度依賴性，但是調(diào)控不穩(wěn)定，沒有一定的規(guī)律性。

3 討論

乳鐵蛋白是一種鐵結合蛋白，主要存在于母乳、中性粒細胞及其次級顆粒中[1]，近年來被發(fā)現(xiàn)有促進成骨細胞增殖的作用[5-6]。Cornish等[7]利用培養(yǎng)3周的原代大鼠成骨細胞研究以評估骨小結形成，骨小結形成包括分化的成骨細胞的兩種骨形成活動即骨基質(zhì)沉積和礦化，研究發(fā)現(xiàn)乳鐵蛋白劑量依賴性地增加骨小結數(shù)量及骨礦化區(qū)。同時，本課題前期研究[8]發(fā)現(xiàn)不同濃度乳鐵蛋白干預原代大鼠成骨細胞1、3、5、7 d后具有促進成骨細胞增殖的作用。目前，乳鐵蛋白作用的分子機制大部分仍未清楚。最近，有研究用芯片技術研究乳鐵蛋白對成骨細胞基因表達的改變，發(fā)現(xiàn)上調(diào)了人原代成骨細胞胰島素樣生長因子1（IGF-1）mRNA的表達[9]，成骨細胞IGF-1表達上調(diào)后，與IGF-1受體（IGF-1R）結合，引起胰島素受體底物1（IRS-1）磷酸化，再激活PI3K依賴的Akt，最后促進成骨細胞增殖和存活。但是，激活這條信號通路的前提是IGF-1與胰島素生長因子結合蛋白（IGFBPs）分離，這樣游離的IGF-1才能與IGF-1R結合[10]。并且生理條件下，IGFBPs比IGF-1更加嚴密調(diào)控著成骨細胞的增殖與骨形成[11]。故而，關于IGFBPs與成骨細胞增殖和骨形成的相關研究不斷涌出。有研究指出持續(xù)過表達IGFBP-3的轉(zhuǎn)基因小鼠，被發(fā)現(xiàn)破骨細胞數(shù)量和骨吸收明顯增加，而抑制了成骨細胞的增殖和骨形成[12]。同時，有研究用rhIGF-1/IGFBP-3復合物發(fā)現(xiàn)有促進骨形成的作用[13]。與骨相鄰的腫瘤細胞可以釋放IGFBP-4，其可能抑制IGF-1促進成骨細胞增殖的作用，并且導致骨形成減少[14]。也有研究指出IGFBP-5可促進IGF-1對成骨細胞的刺激作用[11]。分別向敲除IGF-1的成骨細胞和野生型小鼠成骨細胞內(nèi)添加IGFBP-5后，發(fā)現(xiàn)成骨細胞增殖以及骨形成標記的ALP活性和骨鈣素的表達增加。同樣的，分別在敲除IGF-1和野生型小鼠顱骨外骨膜上局部注射rhIGFBP-5后，骨形成系數(shù)和標志ALP以及骨鈣素增加[15]。有體外研究發(fā)現(xiàn)，過表達IGFBP-5的小鼠成骨細胞株MC3T3卻發(fā)現(xiàn)成骨細胞功能降低，骨形成標記和骨基質(zhì)形成減少[16]?？梢?，IGFBPs在影響成骨細胞增殖和骨形成的作用上存在爭議。但是，不可否認的是IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5在調(diào)控骨量和影響成骨細胞增殖方面可能發(fā)揮著重要作用。

故而，根據(jù)一系列研究，本研究提出乳鐵蛋白是否可以通過影響IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5的表達而達到調(diào)控骨量和影響成骨細胞增殖的作用這一問題。然而要證明這點，首先得探索乳鐵蛋白是否影響了IGFBPs的表達。正如本研究結果顯示乳鐵蛋白影響原代大鼠成骨細胞IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5 mRNA的表達。其中，乳鐵蛋白對IGFBP-3、IGFBP-5 mRNA的表達的調(diào)控不穩(wěn)定，不同時間及濃度的干預對其的表達沒有一定的規(guī)律性。對IGFBP-4 mRNA的表達的影響呈時間和濃度的依賴性，濃度越高抑制作用越強，故而進一步猜測乳鐵蛋白影響胰島素生長因子結合蛋白的表達可能在乳鐵蛋白調(diào)控骨量和影響成骨細胞增殖方面可能發(fā)揮著重要作用。但是，IGFBP-3、-4、-5在蛋白水平是否受到影響未可知。其次，是否體內(nèi)研究也同樣受到影響。因乳鐵蛋白可上調(diào)IGF-1[9]，那么要證明乳鐵蛋白是通過調(diào)控IGFBPs來促進成骨細胞增殖的前提得先排除IGF-1的影響。此外，IGFBPs具有獨立作用[10]，即不依賴IGF-1的影響成骨細胞的作用，那乳鐵蛋白是否只是通過影響IGFBP單條途徑影響成骨細胞的增殖也未可知。想要回答以上問題，可繼續(xù)進行體外研究乳鐵蛋白對IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5蛋白表達的影響，另外通過體內(nèi)研究進一步佐證。實驗發(fā)現(xiàn)，乳鐵蛋白抑制了IGFBP-4 mRNA的表達，則可通過腺病毒過表達IGFBP-4以進一步確定IGFBP-4乳鐵蛋白是否通過抑制其表達而達到促進成骨細胞增殖的作用。此外，為排除IGF-1促成骨細胞的作用，可利用基因沉默技術，沉默IGF-1來證實。

綜上所述，本研究證實乳鐵蛋白影響IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5 mRNA的表達，若能進一步研究出乳鐵蛋白調(diào)控骨量和影響成骨細胞增殖與IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5之間的關系，將給臨床提供更多治療骨質(zhì)疏松的藥物靶點。

[參考文獻]

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（收稿日期：2014-08-06 本文編輯：郭靜娟）

故而，根據(jù)一系列研究，本研究提出乳鐵蛋白是否可以通過影響IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5的表達而達到調(diào)控骨量和影響成骨細胞增殖的作用這一問題。然而要證明這點，首先得探索乳鐵蛋白是否影響了IGFBPs的表達。正如本研究結果顯示乳鐵蛋白影響原代大鼠成骨細胞IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5 mRNA的表達。其中，乳鐵蛋白對IGFBP-3、IGFBP-5 mRNA的表達的調(diào)控不穩(wěn)定，不同時間及濃度的干預對其的表達沒有一定的規(guī)律性。對IGFBP-4 mRNA的表達的影響呈時間和濃度的依賴性，濃度越高抑制作用越強，故而進一步猜測乳鐵蛋白影響胰島素生長因子結合蛋白的表達可能在乳鐵蛋白調(diào)控骨量和影響成骨細胞增殖方面可能發(fā)揮著重要作用。但是，IGFBP-3、-4、-5在蛋白水平是否受到影響未可知。其次，是否體內(nèi)研究也同樣受到影響。因乳鐵蛋白可上調(diào)IGF-1[9]，那么要證明乳鐵蛋白是通過調(diào)控IGFBPs來促進成骨細胞增殖的前提得先排除IGF-1的影響。此外，IGFBPs具有獨立作用[10]，即不依賴IGF-1的影響成骨細胞的作用，那乳鐵蛋白是否只是通過影響IGFBP單條途徑影響成骨細胞的增殖也未可知。想要回答以上問題，可繼續(xù)進行體外研究乳鐵蛋白對IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5蛋白表達的影響，另外通過體內(nèi)研究進一步佐證。實驗發(fā)現(xiàn)，乳鐵蛋白抑制了IGFBP-4 mRNA的表達，則可通過腺病毒過表達IGFBP-4以進一步確定IGFBP-4乳鐵蛋白是否通過抑制其表達而達到促進成骨細胞增殖的作用。此外，為排除IGF-1促成骨細胞的作用，可利用基因沉默技術，沉默IGF-1來證實。

綜上所述，本研究證實乳鐵蛋白影響IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5 mRNA的表達，若能進一步研究出乳鐵蛋白調(diào)控骨量和影響成骨細胞增殖與IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5之間的關系，將給臨床提供更多治療骨質(zhì)疏松的藥物靶點。

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（收稿日期：2014-08-06 本文編輯：郭靜娟）

故而，根據(jù)一系列研究，本研究提出乳鐵蛋白是否可以通過影響IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5的表達而達到調(diào)控骨量和影響成骨細胞增殖的作用這一問題。然而要證明這點，首先得探索乳鐵蛋白是否影響了IGFBPs的表達。正如本研究結果顯示乳鐵蛋白影響原代大鼠成骨細胞IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5 mRNA的表達。其中，乳鐵蛋白對IGFBP-3、IGFBP-5 mRNA的表達的調(diào)控不穩(wěn)定，不同時間及濃度的干預對其的表達沒有一定的規(guī)律性。對IGFBP-4 mRNA的表達的影響呈時間和濃度的依賴性，濃度越高抑制作用越強，故而進一步猜測乳鐵蛋白影響胰島素生長因子結合蛋白的表達可能在乳鐵蛋白調(diào)控骨量和影響成骨細胞增殖方面可能發(fā)揮著重要作用。但是，IGFBP-3、-4、-5在蛋白水平是否受到影響未可知。其次，是否體內(nèi)研究也同樣受到影響。因乳鐵蛋白可上調(diào)IGF-1[9]，那么要證明乳鐵蛋白是通過調(diào)控IGFBPs來促進成骨細胞增殖的前提得先排除IGF-1的影響。此外，IGFBPs具有獨立作用[10]，即不依賴IGF-1的影響成骨細胞的作用，那乳鐵蛋白是否只是通過影響IGFBP單條途徑影響成骨細胞的增殖也未可知。想要回答以上問題，可繼續(xù)進行體外研究乳鐵蛋白對IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5蛋白表達的影響，另外通過體內(nèi)研究進一步佐證。實驗發(fā)現(xiàn)，乳鐵蛋白抑制了IGFBP-4 mRNA的表達，則可通過腺病毒過表達IGFBP-4以進一步確定IGFBP-4乳鐵蛋白是否通過抑制其表達而達到促進成骨細胞增殖的作用。此外，為排除IGF-1促成骨細胞的作用，可利用基因沉默技術，沉默IGF-1來證實。

綜上所述，本研究證實乳鐵蛋白影響IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5 mRNA的表達，若能進一步研究出乳鐵蛋白調(diào)控骨量和影響成骨細胞增殖與IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5之間的關系，將給臨床提供更多治療骨質(zhì)疏松的藥物靶點。

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（收稿日期：2014-08-06 本文編輯：郭靜娟）