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    補腎活血湯對激素性股骨頭缺血壞死成骨與破骨的影響

    2014-12-08 05:33:34陳漢堯齊振熙吳敏瑞周李學
    福建中醫(yī)藥 2014年6期
    關鍵詞:小梁灌胃股骨頭

    陳漢堯 ,齊振熙,吳敏瑞 ,周李學

    (1.福建中醫(yī)藥大學骨傷學院,福建 福州 350122;2.福建中醫(yī)藥大學中西醫(yī)結合學院,福建 福州350122)

    由激素導致的股骨頭缺血壞死已成為非創(chuàng)傷性骨壞死的首要病因,研究認為超生理劑量的激素對破骨細胞和成骨細胞調節(jié)的影響是研究該病理機制的關鍵。臨床及實驗研究均表明中醫(yī)藥可有效地防治此病,補腎活血化瘀法被廣泛地應用于該病的治療。

    補腎活血湯源于《傷科大成》,以“腎主骨生髓”“血行則瘀自去”為依據(jù)組方,具有補腎益肝、活血化瘀的功效。本實驗通過檢測SD大鼠體內血清骨堿性磷酸酶(BALP)含量高低,光鏡下觀察SD大鼠股骨頭形態(tài)改變,探討補腎活血湯對激素性股骨頭缺血壞死成骨與破骨的影響,評價補腎活血湯促進激素性股骨頭缺血壞死修復的作用。

    1 材料與方法

    1.1 實驗動物 實驗所需60只SD大鼠購于上海斯萊克實驗動物有限公司,許可證號碼SCXK(滬):2012-0002,飼養(yǎng)及造模在福建中醫(yī)藥大學實驗動物中心SPF級實驗室完成,合格證編號:2007000555040。

    1.2 實驗試劑及儀器 補腎活血湯由福建中醫(yī)藥大學中西醫(yī)結合研究院中藥提取平臺制備,藥物組成:熟地黃 9 g,杜仲 3 g,枸杞子 3 g,補骨脂 9 g,菟絲子 10 g,歸尾 3 g,沒藥 3 g,山茱萸 3 g,紅花 1.5 g,獨活3 g,肉蓯蓉3 g,藥物濃縮,制成含生藥濃度為1.0 g/mL的制劑,密封保存?zhèn)溆?;脂多糖(北京鼎國昌盛生物技術有限責任公司);甲強龍(甲潑尼龍琥珀酸鈉注射液,Pfizer);BALP檢測試劑盒(上海西唐生物科技有限公司)。

    1.3 實驗方法 購買成年SD大鼠60只,雌雄各半,標準飼料喂養(yǎng),自由進水,適應性喂養(yǎng)1周后,按隨機數(shù)字表法隨機分為5組:正常組、模型組和補腎活血湯高、中、低劑量組,每組12只。實驗第1周,模型組和補腎活血湯高、中、低劑量組連續(xù)注射20 μg/kg脂多糖2次,每次間隔24 h,24 h后立即注射甲強龍40 mg/kg,連續(xù)注射3次,每次間隔24 h。實驗第2~6周,注射甲強龍用量減至20 mg/kg,每周1次,連續(xù)5周。正常組注射相同劑量相同頻次的生理鹽水[1]。

    1.4 實驗給藥 實驗第7~10周,按人與大鼠體表面積用藥量的換算,計算出每只大鼠所需的劑量,補腎活血湯高、中、低劑量組給予含生藥濃度分別為2.5 g/kg、5 g/kg、10 g/kg 的補腎活血湯灌胃,每天早晚各1次;正常組和模型組在第7~10周,以5 g/(kg/d)的生理鹽水灌胃,每天早晚各 1 次[2]。 用含生藥濃度為1.0 g/mL補腎活血湯制劑計算,低劑量組灌胃劑量為2.5 mL/kg,中劑量組灌胃劑量為5 mL/kg,高劑量組灌胃劑量為 10 mL/kg。

    1.5 指標檢測

    1.5.1 實驗第11周,采用10%水合氯醛10 mL/kg腹腔麻醉,成功后,經(jīng)腹腔動脈采血5~6 mL,放入肝素抗凝試劑管中,采用全自動離心機以3000 r/min,離心10 min,取上清液,置于-20℃冰箱分裝保存,用時按大鼠BALP檢測試劑盒檢測步驟進行指標的檢測。

    1.5.2 麻醉后,取雙側股骨頭,4%甲醛溶液固定24 h,10%乙二胺四乙酸(EDTA)4℃脫鈣 2 月,經(jīng)梯度乙醇脫水,石蠟包埋切片,切片厚5 μm,蘇木-伊紅(HE)染色,光鏡下觀察股骨頭骨組織變化情況。

    1.6 統(tǒng)計學處理 本研究使用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù),計數(shù)資料采用χ2檢驗,計量資料符合正態(tài)分布的用±s表示,采用單因素方差分析。

    2 結 果

    2.1 各組骨組織光鏡下形態(tài)變化情況 ① 正常組:軟骨厚度均勻,同源軟骨細胞數(shù)量正常,骨小梁結構連續(xù)無斷裂,空骨陷窩較少,骨髓腔內造血組織豐富,脂肪組織較少。②模型組:同源軟骨細胞及基質大量減少甚至消失,可見大片云片狀的壞死細胞,潮線不連續(xù)甚至撕裂;骨小梁斷裂、消失,骨質分解成黑色云片狀的壞死組織。③高劑量組:軟骨細胞排列紊亂,軟骨基質不均勻可見大量致密結締組織增生;軟骨層內富含充血擴張的血管或靜脈竇,部分栓塞或機化,管腔內炎性細胞聚集,機化的血管周圍可新生類骨質,骨小梁基本連續(xù),骨髓腔內可見少量脂肪細胞。④中劑量組:可見同源軟骨細胞及基質減少,軟骨內骨髓腔形成,可見破骨性軟骨吸收,骨小梁稀疏或斷裂,骨髓腔內有較多的脂肪細胞堆積,造血組織減少,可見少量因骨質壞死分解成的黑色壞死物。⑤低劑量組:同源軟骨細胞及基質大量減少,可見較多的破骨性軟骨吸收陷窩,骨髓組織較少,可見分解為黑色的壞死組織,骨小梁稀疏斷裂,壞死分解為片狀,骨髓腔內填充大量的脂肪細胞,融合成大泡,有較多的空骨陷窩。

    2.2 各組血清BALP含量比較 見表1。

    表1 各組血清BALP含量比較(±s)pg/mL

    表1 各組血清BALP含量比較(±s)pg/mL

    注:與正常組比較,1) P<0.05;與模型組比較,2) P<0.05。

    組別正常組高劑量組中劑量組低劑量組模型組n 1212121212 BALP 0.835±0.0232)0.826±0.0252)0.776±0.0291)0.758±0.5601)0.755±0.0841)

    3 討 論

    祖國醫(yī)學認為激素性股骨頭缺血壞死屬痹證范疇。本病的發(fā)生以正虛為本,邪實為標?!端貑枴の迮K生成篇》載“骨痹不已,復感于邪,內舍于腎?!敝嗅t(yī)學認為“痹者,閉也”,閉阻不通,則為疼痛,即“不通則痛”?!动冡t(yī)大全》曰:“跌打骨折…宜活血祛瘀為先,血不活則瘀不去,瘀不去則骨不能接也”。故治療本病以補腎為本,配合活血化瘀藥物,從而達到標本兼治的目的。

    補腎活血湯中入熟地黃、杜仲、枸杞子、補骨脂、菟絲子,以填精補髓,壯陽生精,使“陽得陰生,陰得陽化,而泉源不絕”;再入紅花、沒藥、歸尾以活血化瘀、行氣止痛,使“瘀血去,新血生”,筋骨得養(yǎng),血脈通暢,而痛自除;再佐以山茱萸以健脾生血,使氣血生化有源;使以肉蓯蓉潤燥、滑腸,使散中有收,收中有散,補瀉同施。本方具有補腎、活血、化瘀之功,理論上符合上述原則。

    藥理學研究表明補腎藥物可增強機體內分泌功能,增加機體內激素水平,從而抑制骨吸收,增加骨形成。經(jīng)菟絲子黃酮灌胃的去卵巢骨質疏松大鼠血Ca、BALP值均明顯升高,枸杞子多糖可增強非特異性免疫作用和促進造血功能,減弱激素類藥物的免疫抑制作用[3]。動物實驗研究證明活血化瘀藥物能改善血液微循環(huán),糾正脂質代謝紊亂,改善毛細血管通透性,降低骨內壓,從而抑制骨內壓增高、微循環(huán)障礙致缺血性壞死的惡性循環(huán)。紅花黃色素可明顯延長大鼠血漿的TT、PT和APTT的效應時間,明顯降低Fib含量,并可顯著抑制由二磷酸腺苷引起的SD大鼠血小板聚集[4]。獨活抗炎鎮(zhèn)痛的主要成分蛇床子素,能使血清中IGF-1濃度值升高,使股骨骨小梁面積明顯增加,礦化沉積率增高[5]。

    本實驗表明:高劑量組大鼠體內BALP水平較高,軟骨層可見新生類骨質,骨小梁基本連續(xù),骨髓腔內脂肪細胞較少,未見因骨質壞死分解成的黑色壞死物。表明高劑量補腎活血湯可以提高雌激素依賴BALP的活性,增強非特異性免疫作用,抑制骨量丟失。補腎活血湯的活血化瘀功效,可抑制股骨頭內因骨內壓增高、微循環(huán)障礙導致的股骨頭缺血性壞死的惡性循環(huán),從而起壞死修復作用。

    [1]楊衛(wèi)強,蔣振剛,黃昌林.激素性股骨頭壞死模型兔骨組織病理及功能變化[J].中國組織工程研究與臨床康復,2011,15(50):9319-9322.

    [2]魏弘.醫(yī)學實驗動物學[M].成都:四川科學技術出版社,1998:174.

    [3]蔡西國.菟絲子黃酮干預去卵巢大鼠骨代謝研究[J].中藥藥理與臨床,2007,23(6):27-29.

    [4]趙金明,秦文艷,齊越,等.紅花黃色素抗凝血作用及對血小板聚集影響的研究[J].實驗動物科學,2009,26(6):30-32.

    [5]MING L G,ZHOU J,CHENG G Z,et al.Osthol,a coumarin isolated from common cnidium fruit,enhancesthe differentiation and maturation of osteoblasts in vitro[J].Pharmacology,2011,88(1-2):33-43.

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