miR－181a對(duì)乳腺癌耐藥蛋白表達(dá)調(diào)控作用的研究

林 姝，焦旭陽(yáng)，趙 琳，魏敏杰

(中國(guó)醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥理學(xué)教研室，遼寧沈陽(yáng) 110001)

乳腺癌是最常見(jiàn)的女性惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅患者生命和生活質(zhì)量?；熢谌橄侔┑木C合治療中起著不可替代的作用，但治療中出現(xiàn)的多藥耐藥性(multidrug resistance，MDR)嚴(yán)重影響了臨床療效及患者預(yù)后。在 MDR形成的過(guò)程中，P-gp、MRP、BCRP和LRP作為轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在腫瘤MDR產(chǎn)生中發(fā)揮重要作用［1］。乳腺癌耐藥蛋白(breast cancer resistant protein，BCRP)作為一種重要的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，是從耐藥的人乳腺癌細(xì)胞株MCF7/Adr中用RNA指紋分析法分離出的一種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，包含有2.4kb mRNA翻譯的655個(gè)氨基酸殘基，含有1個(gè)ATP結(jié)合域和1個(gè)疏水性跨膜結(jié)構(gòu)域，其基因定位于人染色體4q22［2］。BCRP能夠通過(guò)水解ATP供能將轉(zhuǎn)運(yùn)底物(化療藥物)從細(xì)胞內(nèi)逆濃度梯度泵到細(xì)胞外，特異性使乳腺癌細(xì)胞內(nèi)MX(米托蒽醌)、topotecan(拓?fù)涮婵?等濃度下降，從而導(dǎo)致細(xì)胞對(duì)藥物抵抗，誘導(dǎo)耐藥性產(chǎn)生。研究發(fā)現(xiàn)，BCRP在乳腺癌MDR 中發(fā)揮重要作用，在 MX、topotecan［3］等乳腺癌耐藥細(xì)胞中均發(fā)現(xiàn)BCRP過(guò)表達(dá);上調(diào)乳腺癌細(xì)胞中BCRP表達(dá)可誘導(dǎo)細(xì)胞對(duì)tamoxifen(他莫昔芬)、BMS-554417(IGF-1R inhibitor)等藥物的耐藥性［4］。乳腺癌患者BCRP mRNA水平與患者對(duì)于蒽環(huán)類(lèi)抗生素治療的反應(yīng)性相關(guān)，而且，BCRP是乳腺癌干細(xì)胞的分子標(biāo)記物之一［5］。因此，研究BCRP表達(dá)的靶向調(diào)控機(jī)制對(duì)于影響乳腺癌MDR具有很重要的意義。

微小RNA(microRNA，miRNA)是長(zhǎng)度約22nt的內(nèi)源性短鏈RNA，通過(guò)與目標(biāo)mRNA分子的3'端非編碼區(qū)域(3'UTR)特異結(jié)合后，通過(guò)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的方式抑制目的基因的翻譯和表達(dá)。由于BCRP mRNA-3'UTR長(zhǎng)度約為2kb，遠(yuǎn)長(zhǎng)于人類(lèi)mRNAs-3'UTR 的平均長(zhǎng)度700bp［6］，提示 BCRP mRNA-3'UTR可能存在miRNA調(diào)控BCRP表達(dá)的作用靶點(diǎn)。

本研究通過(guò)RNAhybrid和 miRBase Targets分析，發(fā)現(xiàn)miR-181a的“種子區(qū)”，即5'端2～8或1～7核苷酸區(qū)與BCRP的3'UTR序列有配對(duì)，表明miR-181a可能與乳腺癌耐藥細(xì)胞BCRP表達(dá)負(fù)相關(guān)。因此，本研究選擇miR-181a作為研究對(duì)象，檢測(cè)乳腺癌耐藥細(xì)胞MCF-7/MX和敏感細(xì)胞MCF-7中miR-181a的表達(dá)水平差異;通過(guò)熒光素酶報(bào)告基因分析檢測(cè)miR-181a與BCRP-3'UTR的結(jié)合作用;在乳腺癌耐藥細(xì)胞MCF-7/MX中誘導(dǎo)miR-181a高表達(dá)，檢測(cè)BCRP表達(dá);最后，在乳腺癌敏感細(xì)胞MCF-7中抑制miR-181a表達(dá)，反向驗(yàn)證miR-181a對(duì)BCRP表達(dá)的影響。通過(guò)以上研究，擬探討miR-181a對(duì)乳腺癌細(xì)胞BCRP的調(diào)控作用及機(jī)制，為發(fā)現(xiàn)乳腺癌耐藥性形成與逆轉(zhuǎn)的新切入點(diǎn)提供理論與實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞 人類(lèi)乳腺癌細(xì)胞MCF-7購(gòu)自美國(guó)經(jīng)典細(xì)胞庫(kù)(ATCC)，由本實(shí)驗(yàn)室自行凍存。MCF-7/MX是對(duì)米托蒽醌(MX)耐藥的乳腺癌細(xì)胞，由本實(shí)驗(yàn)室誘導(dǎo)。

1.2 主要試劑 高糖DMEM培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)Gibco公司;胎牛血清(FBS)購(gòu)自天津市灝洋生物制品科技有限責(zé)任公司;TaKaRa RNA PCR Kit(AMV)ver 3.0試劑盒購(gòu)自寶生物工程有限公司;TRIzol和LipofectamineTM2000均購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司。鼠抗人BCRP、MRP、LRP、P-gp等單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Abcom公司;辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG二抗購(gòu)自北京中衫金橋生物公司;PVDF膜購(gòu)自寶信生物公司。miR-181a mimic、NC mimic、miR-181a inhibitor、NC inhibitor、miR-181a agmir、NC agmir等購(gòu)于廣州銳博生物制劑有限公司。膜蛋白提取試劑盒購(gòu)自于Thermo公司。

1.3 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染 MCF-7、MCF-7/MX細(xì)胞用含抗生素質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%FBS的高糖DMEM培養(yǎng)基，于37℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)傳代。轉(zhuǎn)染前1天，胰酶消化MCF-7及MCF-7/MX細(xì)胞，接種在6孔板(3×105個(gè)/孔)或10 cm培養(yǎng)皿(2×106個(gè))中培養(yǎng)，24 h后，用不含抗生素的無(wú)血清培養(yǎng)基饑餓培養(yǎng)1 h，之后按LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染試劑盒操作步驟分別轉(zhuǎn)染miR-181a mimic，及其非特異性的陰性對(duì)照質(zhì)粒NC mimic或miR-181a inhibitor及其陰性對(duì)照質(zhì)粒NC inhibitor，終濃度為20 nmol·L－1。4 h后，用新鮮的含有體積分?jǐn)?shù)10%FBS的DMEM培養(yǎng)基替換原培養(yǎng)基培養(yǎng)48 h，備用。

1.4 Luciferase熒光素酶報(bào)告分析 應(yīng)用Luciferase熒光素酶報(bào)告分析，對(duì) miRNA-181a是否與BCRP mRNA-3'UTR有結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。首先，采用PCR擴(kuò)增BCRP mRNA-3'UTR序列片段以及miRNA-181a序列片段，插入 Luc表達(dá)載體 pGL3(Promega)，構(gòu)建pEGFP-BCRP 3'UTR與pcDNA3.3-miR-181a重組質(zhì)粒。應(yīng)用 Lipofectamine 2000將pEGFP-BCRP 3'UTR與pcDNA3.3-miR-181a或pcDNA3.3空質(zhì)粒(陰性對(duì)照)共轉(zhuǎn)染入293T細(xì)胞48 h后，熒光檢測(cè)儀檢測(cè)熒光強(qiáng)度。

1.5 qRT-PCR 檢測(cè) P-gp、MRP、LRP 和 BCRP 的相對(duì)表達(dá)水平以及miR-181a的表達(dá)水平 MCF-7/MX及 MCF-7細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染 miR-181a mimic或miR-181a inhibitor后，按照RNA提取試劑盒步驟，提取 RNA，按 10 μl體系(DEPC H2O 0.45 μl，5 ×

buffer 2 μl，RRI 0.25 μl，M-MLV 0.3 μl，RT-primmer 1 μl，dNTP 1 μl，RNA 5 μl)，反應(yīng)條件為:30℃，10 min;42℃，1 h，85℃，5 min;5℃，5 min;4℃，2 h，逆轉(zhuǎn)錄得 cDNA。再按 25 μl體系(去離子水 9 μl，2 ×SYBR Green 12.5 μl，Rox 0.5 μl，上游引物 0.5 μl，下游引物 0.5 μl，cDNA 2 μl)進(jìn)行 qRT-PCR 實(shí)驗(yàn)，反應(yīng)條件為:95℃，2 min(預(yù)變性);95℃，15 s;60℃，30 s，40 循環(huán);95℃，1 min;55℃，30 s;95℃，30 s。實(shí)驗(yàn)最少重復(fù)3次，對(duì)miRNA-181a細(xì)胞內(nèi)表達(dá)量以及幾種耐藥蛋白的mRNA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.6 Western blot檢測(cè) BCRP、P-gp、LRP、MRP蛋白的表達(dá) MCF-7和MCF-7/MX細(xì)胞培養(yǎng)24 h后，將細(xì)胞用預(yù)冷的PBS洗1遍，按照膜蛋白提取試劑盒(Thermo，89826)操作，用BCA法(碧云天，P0012)進(jìn)行蛋白定量。取等量蛋白樣品(25 μg)，加5×上樣緩沖液(20%甘油，4%十二烷基硫酸鈉，10%β-巰基乙醇，0.05% 溴酚藍(lán)，1.25 mol·L－1Tris-HCl，pH 6.8)，金屬浴 95℃ 變性 10 min 后，用8%SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，用含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%脫脂奶粉、體積分?jǐn)?shù)1%吐溫20的Tris-HCl緩沖鹽溶液(TBST)封閉2 h，TBST沖洗3次，每次10 min，添加5種蛋白抗體:ABCG2/BCRP(Abcam，ab3380)、P-gp(Abcam，ab3366)、LRP(Santa Cruz，sc23916)、MRP(Abcam，ab24102)、βactin(Santa Cruz，sc47778)，稀釋500 倍，室溫孵育2 h，4℃過(guò)夜，TBST沖洗3次，每次10 min，添加二抗(中杉金橋，ZB2305)，1∶3 000稀釋?zhuān)覝胤跤?.5 h，TBST沖洗3次，ECL發(fā)光。實(shí)驗(yàn)最少重復(fù)3次，測(cè)定灰度值，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所得結(jié)果數(shù)據(jù)用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件SSPSS 16.0分析處理，數(shù)值用±s表示，實(shí)驗(yàn)最少重復(fù)3次，并用單因素方差分析方法(ANOVA)統(tǒng)計(jì)比較組間差異，之后用LSD事后檢驗(yàn)。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 qRT-PCR檢測(cè) MCF-7細(xì)胞及 MCF-7/MX細(xì)胞中miR-181a表達(dá)水平 通過(guò)qRT-PCR檢測(cè)MCF-7細(xì)胞及MCF-7/MX兩種細(xì)胞中miR-181a表達(dá)水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與MCF-7細(xì)胞(BCRP低表達(dá))相比，MCF-7/MX(BCRP高表達(dá))細(xì)胞中miR-181a表達(dá)明顯降低(Fig 1，P＜0.05)，表明 miR-181a的高表達(dá)與BCRP的低表達(dá)相關(guān)，提示miR-181a可能是負(fù)性調(diào)控BCRP表達(dá)的重要miRNA。

Fig 1 miR-181a expression in MCF-7 and MCF-7/MX cells(detected by qRT-PCR)*P＜0.05 vs MCF-7

2.2 生物信息學(xué)分析miR-181a靶向結(jié)合BCRP mRNA-3'UTR區(qū) 為了驗(yàn)證miR-181a對(duì)BCRP表達(dá)的負(fù)性調(diào)控是否與miR-181a和BCRP mRNA-3'UTR的結(jié)合作用相關(guān)，我們首先應(yīng)用miRBase Targets Database(www.microrna.sanger.ac.uk)理論預(yù)測(cè)，發(fā)現(xiàn)包括miR-181a在內(nèi)的15個(gè)microRNAs可與BCRP mRNA-3'UTR結(jié)合。進(jìn)一步通過(guò)Targetscan發(fā)現(xiàn)BCRP mRNA-3'UTR存在miR-181a的結(jié)合位點(diǎn)，其中①3003bp-3025bp和②3651bp-3673bp是關(guān)鍵結(jié)合位點(diǎn)(Fig 2)。

Fig 2 Binding sites of miR-181a were predicted by Targetscan in BCRP mRNA-3'UTR

2.3 熒光素酶報(bào)告基因分析miR-181a靶向作用于BCRP mRNA-3'UTR區(qū) 進(jìn)一步通過(guò)構(gòu)建BCRP 3'UTR熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒，共轉(zhuǎn)染miR-181a與BCRP 3'UTR至293T細(xì)胞中，進(jìn)行熒光素酶報(bào)告基因分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn):與陰性轉(zhuǎn)染組(NC mimic與PGL3-BCRP 3'UTR共轉(zhuǎn)染組)相比，miR-181a mimic與PGL3-BCRP 3'UTR共轉(zhuǎn)染后，熒光素酶活性明顯降低(Fig 3，P＜0.05)，表明miR-181能夠與BCRP mRNA-3'UTR區(qū)靶向結(jié)合。

Fig 3 Binding of miR-181a and BCRP mRNA-3'UTR region(detected by Luciferase reporter assay)

2.4 qRT-PCR、Western blot檢測(cè)誘導(dǎo) MCF-7/MX細(xì)胞中miR-181a過(guò)表達(dá)后BCRP等耐藥蛋白mRNA及蛋白表達(dá)水平變化 接下來(lái)，通過(guò)誘導(dǎo)miR-181a高表達(dá)，檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞BCRP表達(dá)的變化，考察miR-181a對(duì)BCRP表達(dá)的負(fù)性調(diào)控作用。首先，我們將miR-181a mimic轉(zhuǎn)染到MCF7/MX耐藥細(xì)胞中，48h后，通過(guò)qRT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與NC mimic轉(zhuǎn)染組相比，轉(zhuǎn)染 miR-181a mimic后導(dǎo)致miR-181a低表達(dá)的MCF-7/MX細(xì)胞中miR-181a的表達(dá)增加約100倍(Fig 4，P＜0.05)，表明轉(zhuǎn)染miR-181a mimic成功誘導(dǎo)MCF-7/MX細(xì)胞miR-181a高表達(dá)。觀察miR-181a過(guò)表達(dá)的MCF-7/MX細(xì)胞中BCRP、MRP、LRP、P-gp的 mRNA 及蛋白表達(dá)水平變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與NC mimic轉(zhuǎn)染組相比，miR-181a mimic轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)miR-181a過(guò)表達(dá)后，可抑制BCRP表達(dá)，通過(guò)qRT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，miR-181a過(guò)表達(dá)的MCF-7/MX細(xì)胞BCRP mRNA表達(dá)明顯下降(Fig 5，P＜0.05)。進(jìn)一步通過(guò) Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，BCRP蛋白表達(dá)亦明顯下降(Fig 6A、B，P＜0.05)，而MRP、P-gp、LRP等耐藥蛋白的mRNA表達(dá)和蛋白水平均無(wú)明顯改變(Fig 5、Fig 6，P＞0.05)，說(shuō)明miR-181a具有選擇性靶向抑制BCRP表達(dá)的作用。

2.5 抑制MCF-7中miR-181a表達(dá)可增加BCRP表達(dá) 以上研究結(jié)果提示，誘導(dǎo)miR-181a高表達(dá)可靶向抑制MCF-7/MX乳腺癌耐藥細(xì)胞BCRP表達(dá)。為了驗(yàn)證抑制乳腺癌藥物敏感細(xì)胞MCF-7(miR-181a高表達(dá))中內(nèi)源性miR-181a表達(dá)，能否會(huì)增加BCRP表達(dá)，我們將miR-181a inhibitor轉(zhuǎn)染至MCF-7細(xì)胞，構(gòu)建miR-181a低表達(dá)的MCF-7細(xì)胞模型，檢測(cè)BCRP表達(dá)，反向驗(yàn)證miR-181a對(duì)BCRP表達(dá)及功能的靶向調(diào)控作用。轉(zhuǎn)染48 h后，我們通過(guò)qRT-PCR法檢測(cè)miR-181a在MCF-7中的表達(dá)水平，與NC inhibitor轉(zhuǎn)染組相比，miR-181a inhibitor轉(zhuǎn)染的MCF-7細(xì)胞中，miR-181a的表達(dá)降低了5倍左右(Fig 7，P＜0.05)，說(shuō)明 miR-181a inhibitor轉(zhuǎn)染可抑制MCF-7細(xì)胞中內(nèi)源性miR-181a表達(dá)。通過(guò)qRT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，使MCF-7細(xì)胞miR-181a低表達(dá)后，BCRP mRNA表達(dá)明顯增加(Fig 8，P＜0.05)。進(jìn)一步通過(guò)Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，BCRP蛋白表達(dá)亦明顯增加(Fig 9A、B，P＜0.05)，而 MRP、P-gp、LRP等耐藥蛋白的mRNA表達(dá)和蛋白水平均無(wú)明顯改變(Fig 8、Fig 9，P＞0.05)，說(shuō)明抑制乳腺癌藥物敏感細(xì)胞MCF-7內(nèi)源性miR-181a的表達(dá)，可特異性增加BCRP表達(dá)。

Fig 4 Expression of miR-181a in MCF-7/MX cells(detected by qRT-PCR)

Fig 5 mRNA expressions of BCRP，MRP，LRP，P-gp in MCF-7/MX cells(detected by qRT-PCR)

3 討論

研究表明，miRNA可與靶基因互補(bǔ)結(jié)合，從而負(fù)性調(diào)控靶基因的表達(dá)與功能，因此，發(fā)現(xiàn)并研究具有與BCRP靶向結(jié)合及負(fù)性調(diào)控作用的miRNA，對(duì)于逆轉(zhuǎn)BCRP介導(dǎo)的MDR具有重要意義。為了發(fā)現(xiàn)參與BCRP表達(dá)負(fù)性調(diào)控的miRNA，選取合適的細(xì)胞模型十分重要。以往研究發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)BCRP高表達(dá)的細(xì)胞系都可由MX誘導(dǎo)，因此，有人把BCRP稱(chēng)為MX耐藥蛋白?；诖耍狙芯窟x取了乳腺癌耐藥細(xì)胞MCF-7/MX和乳腺癌敏感細(xì)胞MCF-7進(jìn)行研究。

Fig 6 Protein expression levels of BCRP，MRP，LRP，P-gp in MCF-7/MX cells(detected by Western blot)

Fig 7 Expression of miR-181a in MCF-7 cells(detected by qRT-PCR)

Fig 8 mRNA expressions of BCRP，MRP，LRP，P-gp in MCF-7 cells with low expression of miR-181a(detected by qRT-PCR)

Fig 9 Protein expressions of BCRP，MRP，LRP，P-gp in MCF-7 cells with low expression of miR-181a(detected by Western blot)

miR-181a最初發(fā)現(xiàn)于人惡性膠質(zhì)瘤，發(fā)揮抑癌miRNA 功能［7］。在乳腺癌［8］、胃癌［9］miR-181a 表達(dá)升高，發(fā)揮類(lèi)似癌基因的功能。此外，miR-181a與腫瘤細(xì)胞多種表型相關(guān)，如增殖［10］、凋亡［11］和耐藥［12］等。有研究發(fā)現(xiàn)，血清中 miR-181a表達(dá)水平可用于乳腺癌的早期診斷與轉(zhuǎn)移［12］和患者預(yù)后的生物標(biāo)志物［13］。然而，miR-181a在乳腺癌耐藥中的作用如何，目前尚不清楚。我們發(fā)現(xiàn)，miR-181a在MCF-7/MX耐藥細(xì)胞中(BCRP高表達(dá))下調(diào)，提示miR-181a可能參與BCRP表達(dá)的負(fù)性調(diào)控。生物信息學(xué)是預(yù)測(cè)miRNA與靶基因是否具有結(jié)合位點(diǎn)的有效方法，我們通過(guò)Targetscan預(yù)測(cè)miR-181a靶基因，發(fā)現(xiàn)BCRP是眾多靶基因之一，且miR-181a與BCRP-3'UTR區(qū)具有結(jié)合位點(diǎn)，進(jìn)一步提示miR-181a可能是負(fù)性調(diào)控BCRP表達(dá)的miRNA。

接下來(lái)我們通過(guò)qRT-PCR發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌耐藥細(xì)胞MCF-7/MX(BCRP高表達(dá))中miR-181a表達(dá)水平明顯低于乳腺癌敏感細(xì)胞MCF-7(BCRP低表達(dá))，進(jìn)一步表明miR-181a表達(dá)可能與BCRP表達(dá)負(fù)相關(guān)。進(jìn)一步通過(guò)熒光素酶報(bào)告基因分析，證實(shí)了miR-181a可與BCRP-3'UTR靶向結(jié)合，進(jìn)而提示了miR-181a可能通過(guò)PTGS(post-transcriptional regulation)方式抑制BCRP表達(dá)。為了證實(shí)miR-181a與BCRP-3'UTR結(jié)合后是否可抑制BCRP表達(dá)，我們首先以BCRP過(guò)表達(dá)的MCF-7/MX乳腺癌耐藥細(xì)胞為研究對(duì)象，發(fā)現(xiàn)給予miR-181a mimic誘導(dǎo)MCF-7/MX中miR-181a過(guò)表達(dá)后，可抑制BCRP表達(dá)。研究結(jié)果首次證實(shí)了miR-181a對(duì)BCRP表達(dá)的靶向調(diào)控作用。以往研究發(fā)現(xiàn)miR-181a一些靶基因，例如 p27［14］、RalA［10］、K-ras［15］等。我們的研究結(jié)果證實(shí)，BCRP亦是miR-181a的新的功能靶基因。那么，miR-181a對(duì)其他耐藥蛋白作用如何?對(duì)BCRP表達(dá)的抑制作用是否特異?我們發(fā)現(xiàn)，MCF-7/MX中miR-181a過(guò)表達(dá)后，對(duì)P-gp、MRP、LRP的表達(dá)無(wú)明顯影響。這些結(jié)果證實(shí)了誘導(dǎo)miR-181a表達(dá)可特異性抑制BCRP表達(dá)。

以上研究結(jié)果表明，miR-181a可使BCRP過(guò)表達(dá)的MCF-7/MX乳腺癌耐藥細(xì)胞中BCRP表達(dá)被特異性抑制，那么，在BCRP低表達(dá)的乳腺癌敏感性細(xì)胞中(miR-181a高表達(dá))，抑制miR-181a的表達(dá)水平，是否會(huì)引起B(yǎng)CRP表達(dá)變化?我們發(fā)現(xiàn)，乳腺癌敏感性細(xì)胞MCF-7轉(zhuǎn)染 miR-181a inhibitor，使miR-181a表達(dá)下調(diào)后，細(xì)胞中BCRP表達(dá)升高。同時(shí)，與MCF-7/MX結(jié)果類(lèi)似，抑制miR-181a表達(dá)，對(duì)P-gp、MRP、LRP的表達(dá)無(wú)明顯影響。這個(gè)研究結(jié)果從反方向進(jìn)一步證實(shí)了miR-181a對(duì)乳腺癌中BCRP表達(dá)的調(diào)控作用。

綜上，我們的研究證明，miR-181a可靶向抑制乳腺癌細(xì)胞BCRP表達(dá)，提示miR-181a可能成為影響B(tài)CRP介導(dǎo)的乳腺癌MDR的關(guān)鍵靶點(diǎn)。

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