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      復(fù)方一枝蒿片體內(nèi)外抗菌作用研究

      2014-12-04 11:54:00葛海濤王曉磊蘇愷琪陶元明唐俊
      關(guān)鍵詞:肉湯溶血性乙型

      葛海濤 王曉磊 蘇愷琪 陶元明 唐俊

      復(fù)方一枝蒿片為江蘇黃河藥業(yè)股份有限公司研制、生產(chǎn)的新型中草藥成品,其主要成分為一枝蒿、板藍(lán)根和大青葉,按照維醫(yī)理論,其具有清除“乃孜來”,解毒利咽,用于“乃孜來”所致的感冒、發(fā)燒、咽喉腫痛的功效;在中醫(yī)學(xué)中其具有解表祛風(fēng)、涼血解毒的療效。常用于邪毒所致的感冒發(fā)燒、咽喉腫痛、病毒性感冒見上述證候者。相對于復(fù)方一枝蒿顆粒,該產(chǎn)品能夠克服顆粒劑用輔料用量大、服用需用開水沖服、口味不佳等缺點(diǎn)。為了進(jìn)一步開發(fā)復(fù)方一枝蒿片,筆者對其在抗菌方面的藥效作用進(jìn)行了研究,以期為復(fù)方一枝蒿片的臨床應(yīng)用進(jìn)一步提供理論依據(jù)。

      1 材料與方法

      1.1 材料

      1.1.1 儀器 紫外分光光度計(UV-2201):日本島津公司;臺式高速冷凍離心機(jī)(5417R):艾本德中國有限公司(Eppendorf China Limited);電子分析天平(AG-204):瑞士Mettler Toledo公司;電熱恒溫培養(yǎng)箱(DNP-9082):上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;潔凈工作臺(SW-CJ):上海屹明凈化設(shè)備有限公司。

      1.1.2 試藥 地塞米松(湖北潛江制藥股份有限公司);MH肉湯培養(yǎng)基和MH瓊脂培養(yǎng)基(上海微晶生物技術(shù)有限公司);雙黃連口服液(河南福森藥業(yè)有限公司);復(fù)方一枝蒿片(江蘇黃河藥業(yè)股份有限公司,實(shí)驗(yàn)前用滅菌蒸餾水溶解配成所需濃度);MH血清肉湯培養(yǎng)基和MH血瓊脂平板培養(yǎng)基(分別為肉湯加滅活小牛血清,瓊脂培養(yǎng)基加脫纖維羊血)由本室制備。

      1.1.3 動物及菌種 Balb/c小鼠300只,雌雄兼半,6~7周齡,購自上海斯萊克動物公司;金黃色葡萄球菌ATCC 25923;大腸桿菌 ATCC 58922由江蘇省藥品檢驗(yàn)所提供;肺炎鏈球菌 ATCC 49619;乙型溶血性鏈球菌ATCC 6305。

      1.2 方法

      1.2.1 體外抗菌實(shí)驗(yàn) 采用試管法測最低抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)研究復(fù)方一枝蒿片的體外抗菌研究[1-3]。

      1.2.1.1 試驗(yàn)菌準(zhǔn)備 取復(fù)蘇的金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和大腸桿菌(Escherichia coli)MH肉湯24 h培養(yǎng)物分別接種至MH肉湯,37 ℃ 孵育6 h;取復(fù)蘇的肺炎鏈球菌(Pseudomonas aureginosa)和乙型溶血性鏈球菌(Streptococcus hemolytic-β)MH血清肉湯 24 h培養(yǎng)物分別接種至MH血清肉湯,37 ℃,6 h;分別取上述4種菌6 h培養(yǎng)液,用麥?zhǔn)媳葷岱ㄕ{(diào)至109/mL,再作100倍稀釋至107/mL,將107/mL定為工作濃度。通過傾注平板作菌落計數(shù),最終確定每1 mL液體培養(yǎng)基中加入0.1 mL菌液。

      1.2.1.2 復(fù)方一枝蒿水溶液制備 取復(fù)方一枝蒿片5 g加15 mL滅菌蒸餾水中,通過超聲處理,使復(fù)方一枝蒿片充分溶解,用1 % NaOH調(diào)至pH 7.0,用0.5 μm濾器濾過除菌,呈棕黃色透明液體。

      1.2.1.3 抗菌實(shí)驗(yàn) 復(fù)方一枝蒿水溶液1 mL,金黃色葡萄球菌和大腸桿菌用MH肉湯,乙型溶血性鏈球菌和肺炎鏈球菌用MH血清肉湯分別作倍比稀釋至第10管,第11管為菌液對照,第12管為MH肉湯無菌對照。1~10管藥液稀釋度分別為1:2,1:4~1:1024,共4排。每排1~11管分別加入4種試驗(yàn)菌液0.1 mL,第12管不加菌液,為MH肉湯無菌對照,37 ℃,24 h,觀察結(jié)果。

      將上述各管(1~6)分別作10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7稀釋,每管不同稀釋度分別取1mL培養(yǎng)液加10 mL營養(yǎng)瓊脂,乙型溶血性鏈球菌和肺炎鏈球菌用血平板,混勻,每管每個濃度混合液均傾注3塊平板,37 ℃ 孵育24 h。

      1.2.2 體內(nèi)抗菌實(shí)驗(yàn) 取Balb/c小鼠20只, 隨機(jī)均分為10組:1、2組為生理鹽水(20 mL/kg); 3、4 組為雙黃連口服液組(10 mL/kg);5、6 組為復(fù)方一枝蒿低劑量組(L組,15.1 g/kg);7、8 組為復(fù)方一枝蒿中劑量組(M 組,30.2 g/kg);9、10組為復(fù)方一枝蒿高劑量組(H組,60.4 g/kg)。 各組藥物劑量為 20 mL/kg,ig,1 次 /d, 連續(xù) 3 d 。末次給藥后 1 h,ip 大腸桿菌培養(yǎng)液( 1、3、5、7、9 組) 和變形桿菌培養(yǎng)液( 2、4、6、8、10組) ,每只0.5 mL,觀察72 h內(nèi)動物死亡情況,并進(jìn)行生物學(xué)統(tǒng)計分析[4-5]。

      1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用PEMS 3.1軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計數(shù)

      數(shù)據(jù)采用 字2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

      2 結(jié)果

      MH肉湯結(jié)果顯示金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌和乙型溶血性鏈球菌感染的肉湯都有一定程度的變澄清,復(fù)方一枝蒿片對、肺炎鏈球菌和乙型溶血性鏈球菌有抑制和殺滅作用,見表1。MH平板結(jié)果見表2。

      表1 復(fù)方一枝蒿抗菌實(shí)驗(yàn)MH肉湯培養(yǎng)結(jié)果

      表2 復(fù)方一枝蒿抗菌實(shí)驗(yàn)MH平板培養(yǎng)結(jié)果

      分別計算4種細(xì)菌的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC),見表3。

      復(fù)方一枝蒿片對大腸桿菌和變形桿菌感染小鼠的保護(hù)作用詳見表4。由表4可知,復(fù)方一枝蒿片對大腸桿菌感染小鼠死亡的保護(hù)作用不顯著;在較高的劑量(60.4 g/kg)時,復(fù)方一枝蒿片使變形桿菌感染小鼠死亡率顯著下降,顯示有顯著的保護(hù)作用。

      表3 復(fù)方一枝蒿片的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)

      表4 復(fù)方一枝蒿片對大腸桿菌和變形桿菌感染小鼠的保護(hù)作用

      3 討論

      上述研究顯示,復(fù)方一枝蒿片劑能夠明顯抑制和殺滅金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌,對乙型溶血性鏈球菌有一定的抑制和殺滅作用,而對大腸桿菌無作用。同為上呼吸道感染常見病原菌的金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌和乙型溶血性鏈球菌都可以被復(fù)方一枝蒿片所抑制和殺滅,這可以解釋臨床上常用復(fù)方一枝蒿片治療咽炎、喉炎和氣管炎等上呼吸道感染的原因。上述三種病原菌均為革蘭陽性球菌,而大腸桿菌屬于革蘭陰性菌,而革蘭陽性球菌和革蘭陰性菌具有不同的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)[6],復(fù)方一枝蒿片對前述各菌抑制和殺滅作用的確切作用機(jī)制是否與其阻止細(xì)胞壁合成有關(guān)[7],還有待于進(jìn)一步研究。復(fù)方一枝蒿片對大腸桿菌感染小鼠死亡的保護(hù)作用不顯著,但是高劑量的復(fù)方一枝蒿片能使變形桿菌感染小鼠的死亡率顯著下降,表明復(fù)方一枝蒿片對感染的小鼠具有明顯的保護(hù)作用。綜上所述,一枝蒿片具有良好的抗菌作用,但其作用機(jī)制未知,有待于進(jìn)一步研究。

      [1]劉錫光.現(xiàn)代診斷微生物學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社, 2002:688-703.

      [2]張炳華,王亞男,張彥瓊.復(fù)方一枝蒿顆粒劑的體外抗菌作用[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志, 2005, 15(13): 1968-1969.

      [3]黃慶,方蕓.復(fù)方荔枝草顆粒體內(nèi)外抗菌消炎作用研究[J].中國藥房, 2008, 19(9): 657-658.

      [4]徐叔云,卞如滾,陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].第3 版.北京: 人民衛(wèi)生出版社,2003 :1657-1666.

      [5]常翠,董淳,楊宏圖,等.清喉口含片動物體內(nèi)、外抑菌實(shí)驗(yàn)研究[J].中國藥房,2006,17(5):336.

      [6]沈關(guān)心.微生物學(xué)與免疫學(xué)[M].第5版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2003:127.

      [7]周正任, 李凡.醫(yī)學(xué)微生物學(xué)[M].第6版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2003: 7- 9.

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