八珍湯、六味地黃丸、自擬扶正解毒方劑對60Coγ-射線致大鼠生殖系統(tǒng)損傷的防治作用

李延暉，張 蓉，鄒 練，楊云霜，瞿 彬，魏會珍，劉曉晨

(中國人民解放軍第二炮兵總醫(yī)院，北京100088)

隨著放射線在臨床中的廣泛應用及核能在戰(zhàn)爭中逐漸凸顯的核心競爭力［1］，輻射損傷的防治越來越不容忽視。文獻報道［2，3］，輻射對機體免疫、造血等系統(tǒng)有一定程度損傷，而生殖系統(tǒng)亦對輻射源敏感［4］。睪丸間質(zhì)細胞作為雄激素分泌細胞，是激發(fā)和調(diào)控男性生殖生理的特有細胞，具有合成和分泌雄激素的功能，與精子產(chǎn)生和成熟、生殖器官的發(fā)育與分化、維持第二性征及性功能等有關，輻射致睪丸間質(zhì)細胞結構損傷可引起男性生理及性生活方面的問題，并顯著影響其生活質(zhì)量。2013年2月18日～2014年3月30日，我們觀察了中藥八珍湯、六味地黃丸、自擬扶正解毒方劑對60Coγ-射線致大鼠生殖系統(tǒng)損傷的防治作用?，F(xiàn)將結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物、主要儀器及藥物 健康雄性Wister大鼠150只，體質(zhì)量180～200 g，購自北京華阜康生物技術有限公司，合格證號為 SCKX(京)2009-0007。飼養(yǎng)于采光充足、室溫可控的動物房，室溫22℃，自由攝取水及普通鼠全價顆粒飼料。日月神伽馬刀來自西安一體醫(yī)療科技有限公司。八珍湯出自《正體類要》，由當歸10 g、川芎6 g、白芍10 g、熟地黃10 g、人參5 g、炒白術10 g、茯苓10 g、炙甘草10 g組成;六味地黃丸出自《小兒藥證直訣》，由熟地黃20 g、山茱萸 12 g、山藥10 g、澤瀉 10 g、茯苓 10 g、牡丹皮10 g組成;自擬扶正解毒方劑由人參10 g、冬蟲夏草3 g、麥冬20 g、白花蛇舌草15 g、丹參20 g組成。上述中藥由三九藥業(yè)顆粒劑配置而成，按人體給藥量換算成大鼠等效劑量作為大鼠給藥量，給藥劑量依次為9.94、10.08、9.52 g/(kg·d)。

1.2 動物分組、給藥及60Coγ-射線照射方法 150只Wistar雄性大鼠隨機分為空白對照組、輻射組、輻射八珍湯組、輻射六味地黃丸組、輻射自擬扶正解毒方劑組，各30只;后三組每天上午8:00分別給予八珍湯、六味地黃丸、自擬扶正解毒方劑灌胃2.5 mL，前兩組給予等容積生理鹽水灌胃，連續(xù)10 d;第11天，輻射組、輻射八珍湯組、輻射六味地黃丸組、輻射自擬扶正解毒方劑組分別接受一次性7 Gy的60Coγ-射線照射(大鼠四肢展開，固定于自制木板，置于伽馬刀可照射區(qū)域內(nèi)，給予一次性7 Gy的60Coγ-射線照射，劑量率1.614 Gy/min，總時長約4 min 38 s)，空白對照組不接受照射，之后繼續(xù)上述方法灌胃14 d。

1.3 實驗動物的一般情況觀察 輻射后對各組大鼠的精神狀況、活躍程度、反應、毛色、進食量、體質(zhì)量等一般情況進行觀察。

1.4 實驗動物睪丸指數(shù)的計算、精子相對計數(shù)、睪丸組織形態(tài)學觀察 各組大鼠分別于輻射后第1、14、30天取材:第1天，每組10只大鼠取材;第14天，每組取存活大鼠數(shù)量的1/2取材;第30天，余下大鼠全部取材。10%水合氯醛腹腔麻醉取材大鼠，腹主動脈采血;放血處死后迅速將睪丸切除，取雙側睪丸，用冷生理鹽水沖洗，除去血液，濾紙濾干，電子天平稱重，計算平均睪丸質(zhì)量，并計算睪丸指數(shù)，睪丸指數(shù)=睪丸質(zhì)量/輻射后30 d小鼠體質(zhì)量。雙側睪丸稱重后沿縱軸切為兩半。隨機選擇一半睪丸組織投入液氮中固定，于-80℃冰箱保存?zhèn)溆?另一半睪丸組織用中性甲醛固定，4 μm厚切片，HE染色，光鏡下觀察睪丸組織結構。

取輻射后第14天各組大鼠的左側附睪，放入盛有3 mL生理鹽水的平皿中，用眼科剪充分剪碎，并輕壓組織塊，使精子溢出，用單層擦鏡紙過濾，濾液4 000 r/min離心10 min，沉淀物加入1 mL精子固定液，充分混勻，固定2 h后，滴入血細胞計數(shù)板，計數(shù)4個方格內(nèi)精子數(shù)，并計為R，R×4 000×固定液體積/附睪質(zhì)量即為精子相對計數(shù)。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件。輻射前后各組體質(zhì)量比較用重復測量方差分析;各組睪丸指數(shù)、精子相對計數(shù)比較用單因素方差分析。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組實驗動物的一般情況 空白對照組大鼠在整個實驗階段毛色光滑、食欲正常。其余四組在輻射后出現(xiàn)精神萎靡、毛發(fā)枯槁并散亂豎起、反應遲鈍、食欲下降等，輻射八珍湯組、輻射六味地黃丸組、輻射自擬扶正解毒方劑組程度較輕，其中輻射自擬扶正解毒方劑組程度最輕。輻射前后各組大鼠體質(zhì)量變化比較見表1。

表1 輻射前后各組大鼠體質(zhì)量變化比較(g，±s)

表1 輻射前后各組大鼠體質(zhì)量變化比較(g，±s)

注:與同時間點空白對照組相比，*P＜0.01;與同組輻射前1 d相比，△P＜0.01

組別30 d輻射組 267.17 ± 6.37 242.67 ± 6.39△體質(zhì)量輻射前1 d 輻射后1 d 輻射后14 d 輻射后273.67 ±19.77 341.00 ±21.42輻射八珍湯組 262.00 ±12.64 245.83 ±10.63△ 277.83 ±13.26 343.67 ±13.75輻射六味地黃丸組 260.17 ± 7.94 241.17 ± 4.49＊△ 260.67 ±15.85 324.50 ±30.30輻射自擬扶正解毒方劑組 258.50± 9.31 246.17± 5.14△ 262.67± 8.44 326.17±21.39空白對照組 257.17 ±10.65 270.17 ± 5.19 300.00 ± 6.57 374.50 ± 3.84

2.2 各組實驗動物睪丸指數(shù)及精子相對計數(shù)比較各組動物睪丸指數(shù)及精子相對計數(shù)比較見表2。

表2 各組動物睪丸指數(shù)及精子相對計數(shù)比較(±s)

表2 各組動物睪丸指數(shù)及精子相對計數(shù)比較(±s)

注:與輻射組相比，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01

組別 睪丸指數(shù)(mg/g) 精子相對計數(shù)(×105/g)8.289 ±0.324 4.398 ±0.496輻射八珍湯組 8.461 ±0.417 4.787 ±0.745輻射六味地黃丸組 8.453 ±0.410 4.932 ±1.062*輻射自擬扶正解毒方劑組 8.637±0.352＊＊ 6.048±0.983＊＊空白對照組輻射組8.856 ±0.456 5.912 ±0.705

2.3 各組動物睪丸間質(zhì)細胞病理學變化 空白對照組睪丸間質(zhì)細胞多呈橢圓形，細胞大，胞質(zhì)豐富;細胞核呈圓形或橢圓形，核內(nèi)染色質(zhì)分布均勻，染色較淡(圖1左)。輻射組睪丸間質(zhì)細胞呈多邊形或梭形，較稀疏，散在分布，胞質(zhì)減少，細胞核皺縮，染色質(zhì)濃集，深染(圖1中)。輻射自擬扶正解毒方劑組睪丸間質(zhì)細胞損傷現(xiàn)象較輻射組有所恢復，形態(tài)接近正常(圖1右)。

圖1 空白對照組(左)、輻射組(中)、輻射自擬扶正解毒方劑組(右)大鼠睪丸間質(zhì)細胞形態(tài)(×400)

3 討論

《內(nèi)經(jīng)》謂，正氣存內(nèi)，邪不可干。正氣能抵御外邪入侵，防止疾病的發(fā)生，并且有利于病后恢復或自愈，核輻射也是一種外來致病邪氣，可通過提高機體抗病能力，維持陰陽平衡自穩(wěn)定態(tài)而對抗邪氣對機體的損害［5］。祖國醫(yī)學認為，核輻射為一種熱毒、火毒之邪，易耗氣傷津，核輻射損傷，起病急驟，病勢危重，變化多端。由于輻射作用的特點，其毒邪兼具火熱邪氣的特點，熱毒蘊于體內(nèi)，充斥三焦［6］。腎藏精主骨生髓，腎精匱乏，生髓乏源，可降低機體免疫能力;腎屬水，水克火，唐·王冰注解《素問·至真要大論》提出:“壯水之主，以制陽光”，在火熱之邪傷陰的情況下可滋補腎精，陰得陽生則泉源不竭而解火毒。從腎生理功能而言，腎主骨，藏精生髓，能防治核輻射對機體造血和免疫系統(tǒng)的損害;從五行特性而言，腎屬水，水克火，能減輕具有火熱之性的核輻射射線對機體的燒灼傷。由此可見，從腎論治的角度來研發(fā)抗核輻射損傷的中藥防護劑有豐富的中醫(yī)基礎理論支持［7］。

我們選擇具有代表性的補氣益血八珍湯、滋陰補腎六味地黃丸、自擬扶正解毒方劑進行實驗，觀察上述中藥的核輻射防護作用，篩選防護作用最強的中藥方劑，并根據(jù)實驗結果對中藥組成進行調(diào)整。自擬扶正解毒方劑中，人參根的多糖提取物人參皂苷能夠刺激內(nèi)源性細胞因子如 IL-1、IL-6的產(chǎn)生［8～10］。冬蟲夏草具有補肺益腎、止血化痰之效，既取其“陽中求陰，陰得陽生而泉源不絕”之意，增加六味地黃丸滋陰清熱之力，又能抑制機體病理產(chǎn)物生成，且冬蟲夏草的多種有效成分，如蟲草多糖等［11］，對網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)及巨噬細胞有明顯激活作用［12，13］，能促進淋巴細胞轉(zhuǎn)化，是一種非特異性免疫增強及調(diào)節(jié)劑，具有促進造血功能、提高免疫力、抗癌、降血糖、降血脂等功效［14］。白花蛇舌草具有清熱解毒、消癰散結、利尿除濕之功［15］，善清火熱毒邪，減輕輻射的火熱之性，防止癰癤疔瘡生成，并通過“下法”促進病理代謝產(chǎn)物的排出。本研究結果表明，自擬扶正解毒方劑對60Coγ-射線輻射對大鼠生殖系統(tǒng)造成的損傷有一定的防治作用。

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