羊脆木樹皮的化學成分研究（Ⅰ）＊

吳云飛， 羅蕾， 李祖強， 潘明俊， 吳煥， 馬國義

（1.云南師范大學 化學化工學院，云南 昆明650092；2.云南大學 化學科學與工程學院，云南 昆明650092；3.密西西比大學 藥學系，美國）

羊脆木（PittosporumkerriiCraib）為海桐花科 （Pittosporaceae）海桐花屬 （pittosporumBank）植物，該屬植物約150種，本屬一些種的根及果實常供藥用，根皮治毒蛇咬傷，有鎮(zhèn)痛、消炎等作用.羊脆木根皮及樹皮可入藥，具有疏風、解表、止瘧功效［1］.本研究小組已對羊脆木枝葉的化學成分作過報道［2］，本文則對其樹皮化學成分及細胞毒活性進行研究.

對羊脆木樹皮的氯仿和甲醇部位進行化學成分分離純化，得到7個單體，通過波譜分析，分別鑒 定 為：β－stigmsterol（1）、β－stigmasterol－3－O－β－D－glucopyranoside（2）、ethyl caffeate（3）、2，6－dimethoxy－1，4－benzoquinone（4）、3－h(huán)ydroxy－4－methoxybenzoic acid（5）、syringaresinol－4，4′－di－O－β－D－glucoside（6）、3，4，5－trimethoxyphenol－1－O－β－D－glucopyranoside（7），化合物1－7的結構見圖1.其中化合物4、5為首次從該屬中分離得到.細胞毒試驗表明氯仿提取物以及從其中分離出來的化合物3、4具有明顯的細胞毒活性，對K562細胞的IC50分別為3.7、4.0、3.0μg／mL.

1 實驗部分

1.1 儀器和材料

熔點用北京泰克儀器有限公司XT－4型顯微熔點測定儀測定，溫度未校正.NMR用Bruker公司 Avance 500型核磁共振儀測定，TMS為內(nèi)標.MS用Waters公司Xevo TQ－S質譜儀測定.Agilent 1200制備型高效液相色譜儀，Eclipse XDB－C18（9.4×250mm，5μm）（美國安捷倫公司）.柱層析用粗硅膠（37～75μm），為青島海洋化工廠產(chǎn)品；細硅膠（40～60μm）及TLC硅膠片（F254）為Merck公司產(chǎn)品.羊脆木樹皮采自云南省石屏縣，由云南大學胡志浩教授鑒定，植物拉丁學名為PittosporumkerriiCraib.

1.2 分離提取

取20kg干燥的羊脆木樹皮用95%乙醇冷浸30d，減壓濃縮提取液，得粗提物浸膏Y0（1 200g），對浸膏進行處理后，加入填充劑，再分別用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮和甲醇等溶劑依次萃取，得組分 Y1（80g）、Y2（70g）、Y3（80g）、Y4（150g）、Y5（330g）.其中氯仿組分經(jīng)過反復硅膠柱層析及多次重結晶的方法，分離、純化、鑒定了5個單體（化合物1－5）.甲醇組分通過半制備高壓液相色譜分離得到2個單體（化合物6、7）.

1.3 細胞毒性試驗

分別稱取10～15mg的 Y0、Y1、Y2、Y3、Y4、Y5及化合物（1－7）12個樣品，用二甲亞砜溶解配成0、1、10、100μg／mL等4種濃度，置于培養(yǎng)瓶中，分別加入含有等同數(shù)目K562（人白血病）細胞的RPMI1640培養(yǎng)基（10%小牛血清），保存在5%CO2的37℃的恒溫箱內(nèi).分別在12、24、48、72小時觀察細胞生長情況，最后用染料排斥試驗法計算對K562細胞生長抑制率.體外試驗由美國密西西比大學藥學系藥理實驗室負責人馬國義合作完成.

2 結果與討論

2.1 細胞毒活性

羊脆木樹皮的粗提物（Y0）及其分步提取組分（Y1、Y2、Y3、Y4、Y5）對 K562細胞的IC50分別為6.6、23.0、3.7、6.2、40.0、50.0μg／mL，化合物（1－7）對 K562細胞的IC50分別為30.0、40.0、4.0、3.0、35.0和20.0μg／mL.結果表明，氯仿及乙酸乙酯提取組分及化合物3、4有明顯的細胞毒活性.

2.2 結構鑒定

化合物1，白色針晶（石油醚－乙酸乙酯），m.p.145～146℃.分 子 式：C29H48O.ESI－MS（m／z）：413［M ＋ H］＋.1H－NMR（500MHz，CDCl3）δ：5.38（1H，d，J＝4.7Hz，H－6），5.19（1H，dd，J＝15.1，8.7Hz，H－22），5.04（1H，dd，J＝15.1，8.6Hz，H－23），3.56（1H，m，H－3），1.06（3H，d，J＝6.6Hz），1.04（3H，s），0.89（6H，d，J＝6.4Hz），0.83（3H，d，J＝6.4Hz），0.74（3H，s）；13C－NMR（125MHz，CDCl3）δ：37.3（t ，C－1），31.7（t，C－2），71.8（d，C－3），42.3（t，C－4），140.8（s，C－5），121.7（d，C－6），31.9（t，C－7），31.8（d，C－8），50.2（d，C－9），36.5（s，C－10），21.1（t，C－11），39.7（t，C－12），42.2（s，C－13），56.9（d，C－14），24.4（t，C－15），28.9（t，C－16），56.0（d，C－17），12.2（q，C－18），19.4（q，C－19），40.5（d，C－20），21.2（q，C－21），138.3（t，C－22），129.3（t，C－23），51.3（d，C－24），31.9（d，C－25），19.0（q，C－26），21.1（q，C－27），25.4（t，C－28），12.1（q，C－29）.以上數(shù)據(jù)與文獻［2］對照，鑒定為β－stigmsterol.

化合物2，白色粉末（氯仿－甲醇），m.p.275～277℃.分子式：C35H58O6.ESI－MS（m／z）：573

［M－H］－

.1H－NMR（500MHz，C5D5N）δ：5.33（1H，d，J＝4.7Hz，H－6），5.18（1H，d，J＝15.1，8.7Hz，H－22），5.06（1H，dd，J＝15.1，8.6Hz H－23），5.03（1H，d，J＝7.8Hz，H－1′of Glc），4.57（1H，dd，J＝12.0，1.5Hz，Ha－6′），4.42（1H，dd，J＝12.0，5.6Hz，Hb－6′），4.31（2H，m，H－3′，4′），4.07（1H，t，J＝7.8Hz，H－2′），3.98（1H，m，H－5′），3.98（1H，m，H－3），1.05（3H，d，J＝7.0Hz），0.92（3H，s），0.90（3H，d，J＝6.5Hz），0.87（3H，t，J＝7.0Hz），0.84（3H，d，J＝6.5Hz），0.65（3H，s）；13C－NMR（125MHz，C5D5N）δ：37.3（t，C－1），30.1（t，C－2），78.4（d，C－3），39.1（t，C－4），140.7（s，C－5），121.7（d，C－6），32.0（t，C－7），31.8（d，C－8），50.1（d，C－9），36.7（s，C－10），21.1（t，C－11），39.6（t，C－12），42.1（s，C－13），56.7（d，C－14），24.3（t，C－15），29.1（t，C－16），55.9（d，C－17），11.9（q，C－18），19.2（q，C－19），40.6（d，C－20），21.1（q，C－21），138.6（t，C－22），129.2（t，C－23），51.2（d，C－24），32.0（d，C－25），19.0（q，C－26），21.3（q，C－27），25.5（t，C－28），12.3（q，C－29），102.4（d，C－1′），75.1（d，C－2′），78.3（d，C－3′），71.5（d，C－4′），77.9（d，C－5′），62.6（t，C－6′）.上述數(shù)據(jù)與文獻［2］對照，鑒定為β－stigmasterol－3－O－β－D－glucopyranoside.

化合物3，白色針晶（石油醚－乙酸乙酯），分子式：C11H12O4.ESI－MS（m／z）：209［M＋H］＋，231 ［M＋Na］＋，439［2M＋Na］＋.m.p.145～147℃.1H－NMR（500MHz，（CD3）2CO）δ：7.55（1H，d，J＝16.0Hz，H－3），7.18（1H，d，J＝2.0Hz，H－5），7.06（1H，dd，J＝8.2，2.0Hz，H－9），6.89（1H，d，J＝8.2Hz，H－8），6.30（1H，d，J＝15.9Hz，H－2），4.20（2H，q，J＝7.1Hz，－OCH2－），1.29（3H，t，J＝7.1Hz，－CH3），13CNMR（125MHz，（CD3）2CO）δ：166.5（s，C－1），115.5（s，C－2），145.4（d，C－3），126.8（s，C－4），115.5（d，C－5），145.4（d，C－6），147.8（d，C－7），116.5（d，C－8），121.7（s，C－9），59.6（t，－OCH2－），13.8（q，－CH3）.上述波譜數(shù)據(jù)與文獻［3］對照，鑒定為ethyl caffeate.

化合物4，黃棕色針晶（石油醚－乙酸乙酯），分子 式：C8H8O4.ESI－MS（m／z）：359［2M ＋Na］＋.1H－NMR（500MHz，CDCl3）δ：5.88（2H，s，H－3，5），3.85（6H，s）.13C－NMR（125MHz，CDCl3）δ：186.83（s，C－4），176.66（s，C－1），157.34（s，C－2，6），107.42（d，C－3，5），56.47（q，2，6－OCH3）.以上數(shù)據(jù)與文獻報道［4］對照，鑒定為2，6－dimethoxy－1，4－benzoquinone.

化合物5，白色粉末（石油醚－乙酸乙酯），分子式：C8H8O4.ESI－MS（m／z）：167［M－H］－.1HNMR（500MHz，（CD3）2CO）δ：7.61（1H，dd，J＝8.2，1.9Hz），7.58（1H，d，J＝1.9Hz），6.93（1 H，d，J＝8.2Hz），3.92（3H，s）.以上數(shù)據(jù)與文獻報 道 ［5］對 照，鑒 定 為 3－h(huán)ydroxy－4－methoxybenzoic acid.

化合物6，白色粉末（氯仿－甲醇），分子式：C34H46O18.ESI－MS（m／z）：765［M＋Na］＋.1H－NMR（500MHz，C5D5N）δ：6.93（4H，s，H－2，6，2′，6′），4.95（2H，s，H－1″），4.33（2H，s，H－7，7′），4.04（2H，d，J＝8.8Hz，Hb－9，9′），3.94（2H，brs，Ha－9，9′），3.15（2H，m，H－8，8′），3.79（12H，s，3，5，3，5′－OCH3），5.82（2H，d，J＝6.8Hz，H－1″）；13C－NMR（125MHz，C5D5N）δ：153.8（s，C－3，5，3′，5′）138.1（s，C－4，4′），135.1（s，C－1，1′），104.7（d，C－2，6，2′，6′），86.0（d，C－7，7′），72.1（t，C－9，9′），54.6（d，C－8，8′），56.6（q，3，5，3′，5′－OCH3），104.9（d，C－1″），78.5（d，C－5″），78.2（d，C－3″），75.9（d，C－2″）71.4（d，C－4″），62.4（t，C－6″）.上述波譜數(shù)據(jù)與文獻［3］對照，鑒定為syringaresinol－4，4′－di－O－β－D－glucoside.

化合物7，白色晶粒（氯仿－甲醇），分子式：C15H22O9.1H－NMR（500MHz，CD3OD）δ：6.77（2H，s，H－2，6），4.62（1H，d，J＝7.0Hz，H－1′），3.82（3H，s，4－OCH3），3.70（6H，s，3，5－OCH3）；13C－NMR（125MHz，CD3OD）δ：156.0（s，C－1），96.2（d，C－2，6），154.8（s，C－3，5），134.5（s，C－4），103.2（d，C－1′），74.9（d，C－2′），78.4（d，C－3′），71.7（d，C－4′），78.1（d，C－5′），62.7（t，C－6′），56.5（q，3，5－OCH3），61.2（q，4－OCH3）.上述波譜數(shù)據(jù)與文獻［6］對照，鑒定為3，4，5－trimethoxyphenol－1－O－β－D－glucopianoside.

2.3 討論

對有細胞毒活性的羊脆木樹皮氯仿部分進行分離純化，鑒定出5個化合物（1－5），其中化合物4、5為首次從該屬中分離得到.由于化合物5獲得量較少，所以只對化合物1－4做了細胞毒試驗，通過試驗發(fā)現(xiàn)苯丙素類化合物3及苯醌類化合物4具有明顯的細胞毒活性.需要對該部位繼續(xù)進行分離純化、單體結構鑒定和細胞毒藥理試驗，以望獲得更多的活性成分.

由于甲醇部位的得率相對較高，遂對非活性的甲醇部位進行分離純化，鑒定出2個單體（6、7）.通過細胞毒試驗發(fā)現(xiàn)這兩個化合物也表現(xiàn)出一定的細胞毒活性，表明從非活性部位也可以獲得含有活性的單體，繼續(xù)分離該部位有望獲得其他活性成分.

圖1 化合物1－7的結構Fig.1 Structures of compounds 1－7

［1］江蘇省植物研究所，中國醫(yī)學科學院藥物研究所等編著.新華本草綱要（第三冊）［M］.上海：上?？茖W技術出版，1990.

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［6］李翠紅，周紅嬌，羊曉東，等.棒柄花的化學成分研究［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2004，16（6）：514－515.