益氣活血方對(duì)實(shí)驗(yàn)性心肌梗死大鼠促血管新生機(jī)制研究

吳成哲， 黃朝忠， 紀(jì) 凱， 井傳強(qiáng)， 姜麗紅

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)， 吉林 長(zhǎng)春 130117)

1 現(xiàn)代中醫(yī)學(xué)對(duì)冠心病的認(rèn)識(shí)

由《諸病源候論·心病諸侯》中“心為諸臟主而藏神，其正經(jīng)不可傷，傷之而痛為真心痛”一句，可以推斷出，在中醫(yī)領(lǐng)域，冠心病心肌梗死隸屬于“胸痹心痛”，“厥心痛”等疾病?！凹毙孕募」Ｋ馈痹趪?guó)家標(biāo)準(zhǔn)《中醫(yī)臨床診療術(shù)語(yǔ)》中所對(duì)應(yīng)的中病名為“厥(真)心痛”，其病機(jī)主要由于內(nèi)因久患胸痹之疾，心氣虧虛，心陽(yáng)漸衰，心陰血不足，寒、痰、瘀血內(nèi)阻，外因寒冷、飽食、酗酒、勞累或喜怒不節(jié)等，徒生氣血逆亂，心脈猝然閉阻，營(yíng)氣不從，逆陷于心而成瘀血內(nèi)結(jié)，氣滯于內(nèi)致熱結(jié)不散，痰瘀互結(jié)，形成心體失營(yíng)，脈絡(luò)瘀阻，治療上“益氣化瘀通絡(luò)”是急性心肌梗死的重要治則。中醫(yī)認(rèn)為，氣血具有相關(guān)性，氣血相生，血脈同源。因此，心肌梗死后促心肌內(nèi)微血管新生的前提條件是保證氣血的流暢。

2 目前研究形式及發(fā)展趨勢(shì)

許多生長(zhǎng)因子參與到了血管新生這一過(guò)程，是目前研究的新趨勢(shì)。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)、等許多因素均可刺激新生血管的形成。

血管新生貫穿冠心病發(fā)生發(fā)展的整個(gè)過(guò)程，是一種對(duì)缺氧缺血損傷的代償機(jī)制，可以認(rèn)為與缺氧缺血、炎癥反應(yīng)、生長(zhǎng)因子和一氧化氮、血流動(dòng)力學(xué)變化、壓力梯度等有密切關(guān)系。其中生長(zhǎng)因子是血管新生的重要介質(zhì)，這些生長(zhǎng)因子絕大多數(shù)是肽類生長(zhǎng)因子家族的成員，主要包括血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)、血小板衍化生長(zhǎng)因子(PDGF)、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子p(TGFp)等。VEGF是特異的血管內(nèi)皮細(xì)胞促分裂物，以內(nèi)皮細(xì)胞為特異性靶細(xì)胞，具有強(qiáng)大的促內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂物，以內(nèi)皮細(xì)胞為特異性靶細(xì)胞，具有強(qiáng)大的促內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂和血管新生的作用。VEGF是一種具有高度生物活性的功能性糖蛋白，最早在牛垂體的腺泡細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)并提取。由于它具有很強(qiáng)的促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂增生的能力，并能增強(qiáng)毛細(xì)血管的通透性，所以又稱為血管通透性因子。VEGF在創(chuàng)傷修復(fù)，腫瘤形成，糖尿病視網(wǎng)膜病變等多重病理生理過(guò)程中均有表達(dá)。其又稱血管通透性因子，具有改變細(xì)胞外基質(zhì)，增加血管的通透性，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增生的生物學(xué)功能。是目前公認(rèn)最重要的促血管生成因子，選擇性作用于內(nèi)皮細(xì)胞，有特異的靶向性，和其他促血管生成因子比較，具有專一性。缺血導(dǎo)致局部組織缺氧是促進(jìn)VEGF分泌的主要因素。VEGF作用于相應(yīng)的受體，一方面高度特異地誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞的有絲分裂，直接刺激血管生成；另一方面又可使微血管的通透性增加，導(dǎo)致血管內(nèi)大分子物質(zhì)的滲出，為血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移及新血管形成提供基質(zhì)支架。Wojakowski等[1]研究發(fā)現(xiàn)，急性心肌梗死患者血漿 VEGF 水平明顯高于穩(wěn)定型心絞痛患者。體外和在體實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明 VEGF 可能介導(dǎo)了心肌缺血時(shí)的新生血管形成。

FGF(FibroblastGrowthFactor，成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子)：FGF是另一類具有強(qiáng)烈促血管生成作用的因子。FGF受體表達(dá)于內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、成肌細(xì)胞，并刺激這些細(xì)胞的增殖和分化。FGF通過(guò)與其特異性的受體結(jié)合發(fā)揮作用。FGF促血管形成的作用主要有：(1)促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖；(2)促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的遷移；(3)促進(jìn)具有降解基底膜作用的蛋白激酶的釋放；(4)促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞形成管腔；(5)促進(jìn)平滑肌細(xì)胞的增殖。FGF家族研究較多的為酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(aFGF)及堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)。bFGF是一種多功能的細(xì)胞因子，對(duì)中胚層來(lái)源的細(xì)胞(成纖維母細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞)有強(qiáng)烈促增殖和分化作用。廣泛分布于腦、垂體、心、肝、腎、血管壁等組織器官中，參與創(chuàng)傷修復(fù)過(guò)程。在心血管系統(tǒng)中，血管內(nèi)皮細(xì)胞、心肌細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞均有合成bFGF的能力。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)急性心梗的患者，血漿 bFGF 的水平在心梗后 10 d升高，30 d時(shí)回到正常水平，也平行于側(cè)支血管形成[2]。血小板衍化生長(zhǎng)因子(PDGF)是一種重要的促細(xì)胞分裂劑，存在于血小板、成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞中。其基因家族包括：PDGF-A、B、C、D，其中PDGF-B與血管新生密切相關(guān)。PDGF受體含有N-乙酸氨基葡萄糖和半乳糖殘基，具有蛋白酶的性質(zhì)。PDGF亞基與細(xì)胞膜相應(yīng)受體結(jié)合后發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)：促進(jìn)細(xì)胞增殖、血管新生及進(jìn)行組織修復(fù)等[3]。

肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)，在肝臟大量合成，并分泌至人體血液循環(huán)中，是一種源于間葉細(xì)胞的蛋白質(zhì)，是一種多功能的細(xì)胞因子。具有促有絲分裂、促血管生成、抗調(diào)亡、抗纖維化、抑制炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)免疫等多種生物學(xué)功能[4]。其對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和上皮細(xì)胞的促有絲分裂作用和抗凋亡作用在各種血管生長(zhǎng)因子中是最強(qiáng)大的。 HGF主要通過(guò)與其受體c-Met結(jié)合而直接作用于內(nèi)皮細(xì)胞從而產(chǎn)生生血管作用。血管新生主要包括毛細(xì)血管周圍基底膜的局部降解、內(nèi)皮細(xì)胞移行及內(nèi)皮細(xì)胞增殖，這些過(guò)程導(dǎo)致三維毛細(xì)血管網(wǎng)的形成。HGF基因可明顯促進(jìn)大鼠缺血心肌微小血管生成[5]；在小鼠和兔的缺血模型中，HGF能刺激血管新生，并且其血管生成活性被證實(shí)比堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)更為強(qiáng)大[6]。新生血管數(shù)量(microvessel density，MVD)是評(píng)價(jià)血管生長(zhǎng)因于促進(jìn)血管生成研究中的一個(gè)可靠指標(biāo)，HGF的表達(dá)和MVD呈明顯正相關(guān)[7]，HGF其過(guò)度表達(dá)刺激血管新生及側(cè)支血管形成。姜麗紅等[8]測(cè)定了心肌梗死大鼠心肌梗死面積及 VEGF、bFGF、Ⅷ表達(dá)量，初步證實(shí)了益氣活血方新藥參紅通絡(luò)飲對(duì)促血管新生作用有重要意義。韓麗華等[9]通過(guò)測(cè)定益氣活血方作用后實(shí)驗(yàn)性急性心肌梗死大鼠心肌血管梗死邊緣區(qū)心肌組織中PDGF—B蛋白的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)隨該因素的表達(dá)效果增強(qiáng)，反映新生血管強(qiáng)度的 MVC、MVD 也呈現(xiàn)正相關(guān)的趨勢(shì)，因此初步得出益氣活血方促血管新生作用的分子學(xué)機(jī)制之一可能是PDGF-B蛋白的表達(dá)。探討益氣活血方對(duì)心梗后大鼠缺血心肌局部血管新生的影響及其分子學(xué)機(jī)制。方法：建立心梗模型并分為5組(益氣活血方大劑量組、益氣活血方小劑量組、麝香保心丸組、假手術(shù)組、模型組)，灌胃6周后把存活的大鼠處死，免疫組化法測(cè)定心梗邊緣區(qū)新生血管數(shù)及微血管面密度；檢測(cè)缺血心肌血小板源性生長(zhǎng)因子-B(PDGF-B)蛋白的表達(dá)。結(jié)果：與假手術(shù)組相比，模型組大鼠心梗邊緣區(qū)新生血管數(shù)、微血管面密度及PDGF-B蛋白表達(dá)明顯升高(P<0.05)；大劑量組和麝香保心丸組的新生血管數(shù)、微血管面密度及PDGF-B蛋白表達(dá)均有明顯的升高，與模型組比較均有顯著差異(P<0.05)，小劑量組也有不同程度表達(dá)。PDGF-B蛋白表達(dá)與微血管數(shù)增多呈一致性。結(jié)論：益氣活血方能夠促進(jìn)心梗后大鼠缺血心肌局部血管新生，對(duì)缺血心肌具有保護(hù)作用，上調(diào)心肌局部PDGF-B蛋白表達(dá)可能是其作用機(jī)制之一。張淑娟等[10]探討葛根素注射液對(duì)心肌梗死后大鼠缺血心肌血管新生及VEGFmRNA表達(dá)及灰度值明顯增加，證實(shí)葛根注射液對(duì)大鼠缺血心肌血管新生起著促進(jìn)作用。邢之華等[11]將82例臨床穩(wěn)定型心絞痛患者隨機(jī)分為中藥組與常規(guī)組對(duì)照實(shí)驗(yàn)，通過(guò)測(cè)定血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vEGF)和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bF-GF)這2種因子的濃度以探討保心湯的作用。檢測(cè)血漿VEGF，bFGF濃度均提高，證明保心湯可以通過(guò)促進(jìn)建立冠脈側(cè)支循環(huán)，促進(jìn)梗死血管再生，治療冠心病。張宗綮等[12]通過(guò)檢測(cè)患者血清血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的濃度在保心湯配合介入治療心肌梗死與對(duì)照組的差異，證明了可以建立缺血區(qū)側(cè)支循環(huán)，促進(jìn)恢復(fù)心功能。李艷芬等[13]通過(guò)建立大鼠梗死模型，給予復(fù)方丹參滴丸作為誘導(dǎo)劑。結(jié)果表明復(fù)方丹參滴丸能促進(jìn)骨髓基質(zhì)細(xì)胞移植治療心肌梗死后的心功能，改善梗死面積，減少左心室重構(gòu)，使心臟功能恢復(fù)，能保護(hù)缺血心肌。有利于梗死后的恢復(fù)。王振濤[14]研究表明了血塞通膠囊可對(duì)大鼠心肌梗死邊緣面積MVC減少、平均血管密度也明顯增加，表明了血塞通膠囊使缺血心肌血管新生。殷惠軍等[15]通過(guò)了用芪丹液對(duì)急性心梗大鼠模型進(jìn)行干預(yù)，與消心痛組進(jìn)行對(duì)照。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，缺血心肌微血管密度MvD與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子VEGF和bFGF基因表達(dá)量密切有關(guān)，呈現(xiàn)出正相關(guān)的趨勢(shì)。芪丹液能促進(jìn)建立心肌側(cè)支循環(huán)。王振濤[16]經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)，使用優(yōu)于其他標(biāo)記物的血管內(nèi)皮細(xì)胞表面標(biāo)志CD34檢測(cè)丹參注射液干預(yù)后的大鼠模型，發(fā)現(xiàn)大鼠梗死邊緣區(qū)可見(jiàn)明顯增生的毛細(xì)血管，同時(shí)，平均血管面密度MVD明顯增加，缺血心肌VEGF，bFGF的表達(dá)量增加，進(jìn)而丹參注射液能促進(jìn)或誘導(dǎo)缺血心肌血管新生，表明丹參注射液具有促血管再生作用并伴隨上調(diào)VEGF，bFGF的表達(dá)。孟君等[17]通過(guò)臨床46例急性心肌梗塞患者隨機(jī)分組對(duì)照試驗(yàn)，觀察得出中藥復(fù)方心脈通膠囊(由人參、三七、大黃、枳殼等組成)干預(yù)下，VEGF因子表達(dá)量明顯增高。表明心脈通膠囊可能具有誘導(dǎo)新生血管形成的作用，進(jìn)而保護(hù)缺血心肌，且進(jìn)一步證實(shí)人參、三七具有促進(jìn)血循環(huán)中VEGF表達(dá)的作用。

經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)與研究證實(shí)了益氣活血通絡(luò)中藥對(duì)缺血心肌血管的促新生作用，可減少梗死面積，抗缺血抗缺氧作用，增加人體免疫力，減少了血小板聚集，阻斷促使左心肥厚和反應(yīng)性纖維化，抗心律失常，抑制心室重構(gòu)的作用，可以廣泛應(yīng)用于心血管疾病的治療中。目前治療性血管新生的研究領(lǐng)域逐漸趨成熟并繼續(xù)發(fā)展。對(duì)VEGF、bFGF、PDGF及HGF等幾種因子的臨床研究比較廣泛，因此，本文對(duì)于益氣活血方可能促進(jìn)缺血心肌血管新生成作用機(jī)制的研究將重點(diǎn)對(duì)這幾種促血管生長(zhǎng)因子進(jìn)行考察。

3 小結(jié)

關(guān)于中藥對(duì)促進(jìn)血管生成的研究已進(jìn)行了漫長(zhǎng)的求索。經(jīng)過(guò)大量科學(xué)研究以及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，中藥單體、方劑及中成藥的促進(jìn)血管新生作用已得到了證實(shí)。目前，中醫(yī)藥促進(jìn)缺血心肌血管新生機(jī)制的研究已得到了普遍重視和廣泛關(guān)注。隨著研究方法和手段的不斷進(jìn)步，明確中藥促進(jìn)血管新生的機(jī)制，發(fā)揮中藥在血管新生領(lǐng)域的作用，深化和發(fā)展中醫(yī)經(jīng)典理論，指導(dǎo)傳統(tǒng)醫(yī)藥的開(kāi)發(fā)及臨床應(yīng)用。

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