基層醫(yī)院TPPA與RPR聯(lián)合檢測對梅毒患者的診治價(jià)值

金淑芳

(薊縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,天津 薊縣301900)

梅毒是由梅毒螺旋體感染引起的慢性全身性性傳播疾病。近年來，在全球范圍內(nèi)發(fā)病率逐年提高，且有不斷蔓延的趨勢，尤其在東南亞等發(fā)展中國家發(fā)病率更高[1]。梅毒早期的臨床表現(xiàn)比較復(fù)雜，呈多樣性，再加上有些患者陳述的病史缺乏真實(shí)性及不正當(dāng)?shù)氖褂每股?，給醫(yī)生的診斷造成困擾，容易造成漏診或誤診。因此，血清學(xué)檢查就成了梅毒診斷的重要依據(jù)。梅毒螺旋體感染人體后，體內(nèi)能產(chǎn)生兩種類型的抗體，一類是針對梅毒螺旋體產(chǎn)生的特異性抗體-IgG和IgM；另一類是非特異性抗體-反應(yīng)素，是梅毒螺旋體感染后宿主細(xì)胞釋放的類脂質(zhì)和螺旋體表面脂質(zhì)的抗體。本組對370例疑似梅毒患者的血清分別進(jìn)行梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn) (treponema pallidum particle assay，TPPA)和快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(rapid plasma reagin circle card test，RPR)， 以探討二者聯(lián)合檢測在梅毒的診斷、療效觀察和判斷預(yù)后方面的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源 370份血清標(biāo)本采自2012年1月至2013年3月首次來本院皮膚性病科、泌尿外科和婦科門診就診的疑似梅毒患者。其中男179例，年齡 18～59歲，女 191例，年齡 17～60歲。

1.2 儀器與試劑 微量震蕩儀，RPR旋轉(zhuǎn)儀，TPPA試劑為日本富士瑞必歐株式會(huì)社生產(chǎn)，RPR試劑為上海科華生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，所有試劑均在有效期內(nèi)使用。

1.3 方法 所有試驗(yàn)均嚴(yán)格按照廠家試劑說明書進(jìn)行操作，每次試驗(yàn)均設(shè)陰陽性對照。

1.3.1 TPPA試驗(yàn) 室溫條件下，在U形板上用稀釋液將每份血清樣本倍比稀釋，分別形成1:5、1:10、1:20、1:40共4種稀釋度，再將未致敏與致敏明膠顆粒試劑分別加入1:20和1:40的稀釋血清中，震蕩混勻30s，靜置2h后觀察結(jié)果，加致敏粒子孔凝集而加未致敏粒子孔不凝集判斷為陽性。

1.3.2 RPR試驗(yàn) RPR定性試驗(yàn)：分別吸取50μl梅毒陽性對照和陰性對照均勻鋪加在紙卡的兩個(gè)圓圈中，另吸取50μl待檢血清均勻鋪加在紙卡的另一圓圈中，用試劑盒中的專用針頭、滴管吸取RPR試劑，分別垂直滴加1滴于上述血清和對照中，用RPR旋轉(zhuǎn)儀水平轉(zhuǎn)動(dòng)紙卡8min，l00r／min，然后3min內(nèi)在光線充足處判斷結(jié)果。RPR定量試驗(yàn)：對檢測樣本進(jìn)行倍比稀釋，然后按定性試驗(yàn)方法進(jìn)行檢測，以最大稀釋倍數(shù)凝集處作為最終滴度。

2 結(jié)果

370例疑似梅毒患者的血清標(biāo)本中，TPPA陽性129例，陽性率為34.86%(129/370)；RPR陽性80例，陽性率為21.62%(80/370)。見表1。

表1 TPPA法與RPR法檢測結(jié)果比較

3 討論

梅毒螺旋體感染人體后，特異性抗體IgM產(chǎn)生最早，約在感染后2周即可出現(xiàn)，隨著疾病發(fā)展，lgG抗體才慢慢上升，經(jīng)過有效治療后IgM抗體消失，而IgG抗體則持續(xù)存在，甚至終身不消失，血清反應(yīng)持續(xù)陽性。而非特異性抗體的出現(xiàn)較特異性抗體約晚 2～3周[2]。TPPA用梅毒螺旋體Nichols株的精制菌體成分包被在明膠粒子上作抗原，能同時(shí)檢測IgG型和IgM型抗體，敏感度高，其發(fā)生的非特異性凝集可通過作吸收試驗(yàn)后復(fù)檢排除，特異性好，感染早期(2～4周)即可檢出，是目前公認(rèn)的梅毒血清確認(rèn)試驗(yàn)。RPR試驗(yàn)操作簡單、快速，抗體效價(jià)隨著病情的變化而變化，與梅毒的活動(dòng)性和患者的臨床癥狀密切相關(guān)，當(dāng)梅毒患者接受治療或疾病處于非梅毒活動(dòng)期時(shí)，RPR水平會(huì)迅速下降或消失，容易出現(xiàn)假陰性反應(yīng)，造成漏檢。在某些自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等，RPR還容易出現(xiàn)假陽性反應(yīng)[3]。因此，RPR不適合作為梅毒的篩選試驗(yàn)。

本組資料中，TPPA陽性的129例患者經(jīng)臨床綜合分析最后均診斷為梅毒現(xiàn)癥感染者或既往梅毒感染者。而RPR試驗(yàn)的陽性率(21.62%)明顯低于TPPA(34.86%)。在TPPA陽性RPR陰性的49例患者中，有19例為梅毒感染的早期，在之后復(fù)診時(shí)RPR出現(xiàn)陽性，并且隨著病情發(fā)展，RPR的滴度呈現(xiàn)上升的趨勢；有24例為治療后轉(zhuǎn)陰；還有6例為以前感染過梅毒，近期又有不潔性接觸史而來復(fù)診。有1例29歲女性患者，在治療過程中，RPR 滴度依次出現(xiàn) 1:2，1:4，1:8，1:32，1:16，1:4，1:2這樣明顯的峰值變化，又過2個(gè)月后RPR滴度卻出現(xiàn)了1:16這樣的變化，臨床分析可能為再感染或復(fù)發(fā)。可見RPR及滴度的檢測適用于梅毒患者的療效觀察以及判斷是否復(fù)發(fā)或再感染。在檢測中未發(fā)現(xiàn)RPR陽性而TPPA陰性的患者，可能與本組選擇的患者人群有關(guān)。

文獻(xiàn)報(bào)道，用ELISA方法檢測梅毒患者血清中的特異性抗體與TPPA法結(jié)果有較好的一致性，且試劑成本較低、操作簡便，可使用全自動(dòng)酶標(biāo)儀實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作，適合大批量標(biāo)本梅毒的篩查，但ELISA方法存在假陰性反應(yīng)。TPPA法由于試劑成本高、操作煩瑣、耗時(shí)較長不適合大量標(biāo)本的篩查，主要用于確診試驗(yàn)[4]。正是由于TPPA的敏感度高，特異性好，試劑穩(wěn)定，不需要專門儀器，肉眼觀察判斷結(jié)果等特點(diǎn)，更適用于標(biāo)本量較少的基層醫(yī)院對梅毒患者的直接篩選和確認(rèn)。

RPR和TPPA同時(shí)檢出陽性的患者往往是梅毒現(xiàn)癥感染者，是臨床上可開展治療的指標(biāo)之一，本組資料也證明了這一點(diǎn)。但還需要根據(jù)臨床癥狀、體征及不潔性行為史綜合確診。尤其是老年患者，由于可能存在基礎(chǔ)性疾病，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗梅毒螺旋體的特異性或非特異性抗體，造成TPPA和RPR試驗(yàn)出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。因此，在否認(rèn)發(fā)病史和疾病接觸史的老年人中，梅毒抗體試驗(yàn)陽性不能用正在或曾經(jīng)感染梅毒解釋，陽性結(jié)果不能作為患者感染梅毒螺旋體的絕對依據(jù)，應(yīng)結(jié)合臨床綜合分析。梅毒的治療需要患者的性伴侶同時(shí)檢測同時(shí)進(jìn)行足劑量、足療程治療，才能達(dá)到真正的治愈。本組資料中1例29歲女性患者的治療過程就說明了這一點(diǎn)。

綜上所述，由于基層醫(yī)院門診患者數(shù)量相對較少，對疑似梅毒患者血清直接做TPPA和RPR試驗(yàn)，減少了ELISA法的篩查步驟，可以縮短檢測時(shí)間方便患者就診。TPPA和RPR同時(shí)陽性有助于梅毒患者的診斷，RPR滴度測定有助于梅毒患者療效觀察和判斷預(yù)后。

[1]Srisupanant M，Wiwanitkit V.Screening for syphilis by serology of Thai workers going abroad[J].Travel Med Infect Dis,2009,7(3)：169-170．

[2]陳剛.梅毒血清學(xué)試驗(yàn)中特異性抗體與非特異性抗體檢測的臨床應(yīng)用[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2008,7(2):59.

[3]李愛民,劉斌,蔡峰.3種梅毒血清學(xué)檢測方法的應(yīng)用評價(jià)[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2011,32(15):1718-1719.

[4]黎新桂,周紅翠,尹承祥.三種梅毒血清試驗(yàn)方法的應(yīng)用評估[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2012,30(3):276-277.