骨髓涂片中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色診斷非霍奇金淋巴瘤的臨床價(jià)值

鐘禮瀑，吳青青，呂賽平，徐光明，鄒學(xué)森，陳岳青，劉琴

(江西省腫瘤醫(yī)院1、輸血科，2、檢驗(yàn)科，江西 南昌 330029)

非霍奇金淋巴瘤 (non-Hodgkin’s lymphoma，NHL)是一種病因仍不明確的惡性實(shí)體瘤，其淋巴組織(或器官)由不同類別或階段的淋巴細(xì)胞過度增生，易發(fā)生淋巴結(jié)外多部位或多器官的浸潤，臨床表現(xiàn)和預(yù)后多樣，臨床常將Ann Arbor分期的Ⅰ、Ⅱ期稱為早期，Ⅲ、Ⅳ期稱為晚期[1]。當(dāng)前臨床對(duì)NHL的診斷主要還是癥狀結(jié)合病理[2]、影像等檢查手段，實(shí)驗(yàn)室檢查也起重要作用，但有關(guān)骨髓片中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色 (neutrophil alkaline phosphatase，NAP)在NHL中的應(yīng)用報(bào)道不多，本文探討骨髓細(xì)胞NAP染色在非霍奇金淋巴瘤診斷中的價(jià)值，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 觀察組病例來源于我院2009年1月到2013年2月有淋巴結(jié)腫大的患者經(jīng)臨床組織病理學(xué)、淋巴結(jié)穿刺物涂片、淋巴結(jié)印片等方法[3]檢查確診、臨床資料完整的NHL住院患者共117例，其中男性84例，女性33例，中位年齡56歲，屬NHL早期41例，晚期76例；正常對(duì)照組17例，系我院同期首診取材時(shí)確診為非腫瘤、無感染、發(fā)熱等征象，骨髓象基本正常的良性病患者，其中男性7例，女性10例，中位年齡39歲。

1.2 方法

1.2.1 試劑配制 (1)稱取 α-磷酸萘酚鈉40mg，固蘭B鹽15mg，臨用前溶于40ml 0.1MTris緩沖液中即成應(yīng)用液；(2)稱取1克甲基綠溶于100ml蒸餾水，配成1%甲基綠溶液。

1.2.2 取材與染色 所有入組病例均取其首診時(shí)第一次骨髓片2張(一張備用)；標(biāo)本先95%乙醇固定15min后以潔凈自來水輕緩沖洗0.5～1min,涼干；取固定好的髓片放入經(jīng)37℃預(yù)溫10min后的應(yīng)用液中染色1h，取出以自來水輕緩淋洗0.5～1min后涼干；再以1%甲基綠溶液復(fù)染10min，取出自來水輕緩淋洗0.5～1min后涼干待檢。

1.2.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)和計(jì)分方法 先用低倍鏡找好細(xì)胞均勻分散的視野后換油鏡觀察100個(gè)中性粒細(xì)胞，以細(xì)胞漿內(nèi)無紅色物質(zhì)為-，胞漿內(nèi)有1/4面積顯褐色為+，紅褐色占胞漿面積1/2以下為2+，胞漿內(nèi)有致密的黑色顆粒為3+，胞漿內(nèi)或胞核上充滿了致密深染的棕黑色顆粒為4+；以+、2+、3+、4+陽性的細(xì)胞數(shù)分別乘以1、2、3、4即為各級(jí)陽性細(xì)胞積分，最后計(jì)算出陽性率和總積分。

2 結(jié)果

2.1 觀察組與對(duì)照組骨髓細(xì)胞堿性磷酸酶積分及陽性率的比較 觀察組骨髓細(xì)胞堿性磷酸酶積分、陽性率均顯著低于對(duì)照組，兩者相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，見表1。

表1 觀察組與對(duì)照組骨髓細(xì)胞堿性磷酸酶積分及陽性率比較(±s)

表1 觀察組與對(duì)照組骨髓細(xì)胞堿性磷酸酶積分及陽性率比較(±s)

組別 積分(分) 陽性率(%)觀察組(n=117)對(duì)照組(n=17)t P 77.50±43.45 108.53±29.80 2.844<0.01 52.95±22.66 75.53±15.31 3.973<0.01

2.2 早期與晚期非霍奇金淋巴瘤患者骨髓細(xì)胞堿性磷酸酶積分及陽性率的比較 早期與晚期非霍奇金淋巴瘤患者的骨髓細(xì)胞堿性磷酸酶積分、陽性率相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表2。

3 討論

NAP是一種存在于成熟中性粒細(xì)胞漿內(nèi)的非特異性水解酶，幼稚粒細(xì)胞中此酶含量很低，可視作成熟粒細(xì)胞功能的標(biāo)志物之一，也間接反映著機(jī)體由成熟粒細(xì)胞協(xié)同參與的一些免疫機(jī)能狀況的強(qiáng)弱。從我們的研究結(jié)果來看，NHL組中無論是骨髓中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶積分還是其陽性率均顯著低于正常對(duì)照組，提示骨髓細(xì)胞NAP積分和陽性率減低對(duì)NHL的診斷均有較大的參考價(jià)值，或可成為NHL一項(xiàng)新的觀察指標(biāo)，與參考文獻(xiàn)一致[4]；但本NHL早期組與晚期組的積分和陽性率兩兩相比又均無顯著差異，說明NHL的NAP積分并不隨病程的進(jìn)展而升高，不能以此來判別NHL的病程，與此前非嚴(yán)格按Ann Arbor分期設(shè)計(jì)的相關(guān)報(bào)道[5，6]結(jié)論不符，也有報(bào)道NHL的NAP積分與淋巴細(xì)胞類型有關(guān)[7]，故我們的結(jié)果是否因Ann Arbor分期與NHL的細(xì)胞類型無關(guān)所致，仍有待進(jìn)一步研究。

表2 早期與晚期非霍奇金淋巴瘤患者骨髓細(xì)胞堿性磷酸酶積分及陽性率的比較(±s)

表2 早期與晚期非霍奇金淋巴瘤患者骨髓細(xì)胞堿性磷酸酶積分及陽性率的比較(±s)

組別 積分(分) 陽性率(%)早期組(n=41)晚期組(n=76)t P 77.10±40.18 77.68±45.35 0.055>0.05 53.22±23.18 52.80±22.52 0.095>0.05

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