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      高效液相色譜法測定谷氨酰胺的含量

      2014-11-10 04:44:02秦朝英馮瑞彩姜媛嬡崔節(jié)榮陳平閆倩瑩田智慧
      科技資訊 2014年14期
      關(guān)鍵詞:測定谷氨酰胺高效液相色譜法

      秦朝英++馮瑞彩++姜媛嬡++崔節(jié)榮++陳平++閆倩瑩++田智慧

      摘 要:建立高效液相色譜法測定谷氨酰胺含量的方法。色譜柱為氨基柱,流動相為:0.05 mol/L的磷酸二氫鉀(取磷酸二氫鉀6.8 g,加水至1000 ml,用磷酸調(diào)節(jié)pH值為4.0)∶乙腈=70∶30,檢測波長為215 nm,結(jié)果表明該方法在所試驗的濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系,r為0.999,精密度RSD等于0.37%,平均回收率為98.3%。

      關(guān)鍵詞:谷氨酰胺 高效液相色譜法 測定

      中圖分類號:R927 文獻標(biāo)識碼:A 文章編號:1672-3791(2014)05(b)-0240-02

      谷氨酰胺(Glutamin)亦被稱作麩酰胺酸,為人體中含量最豐富的非必需氨基酸。臨床上主要用于改善胃潰瘍和十二指腸潰瘍的癥狀。常見的分析方法有毛細管電泳法[1]。本文建立了通過高效液相色譜法測定谷氨酰胺的方法,實驗證明該方法操作簡便、專一性及靈敏度高,結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

      1 材料與方法

      1.1 儀器

      HLPC色譜儀型號:LC-20A,色譜儀編號:L20134506488AE,分析天平型號:AE100 分析天平編號:LS012,超聲波型號:AS3120A,檢測波長:λ=215 nm。

      1.2 色譜條件

      檢測器型號:SPD-20A,檢測器靈敏度:2.0AUFS柱溫:35 ℃,進樣體積:20 ul流速:1.0 ml/min,流動相:0.05 moL/L的磷酸二氫鉀(取磷酸二氫鉀6.8 g,加水至1000 ml,用磷酸調(diào)節(jié)PH值為4.0)∶乙腈=70∶30,色譜柱:NH¢4.6×250 mm,色譜柱號:312316。

      1.3 材料與試劑

      乙腈(色譜純,康科德公司),磷酸二氫鉀(AR級),磷酸(AR級),谷氨酰胺對照品(山東寶齡生物技術(shù)有限公司),高純水。

      1.4 樣品制備

      標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備:精密稱取谷氨酰胺標(biāo)準(zhǔn)品250 mg于50 ml容量瓶中,用純化水稀釋并定容至刻度,搖勻,再精密吸取2 ml于10 ml容量瓶中,用流動相稀釋定容至刻度,搖勻,備用。其濃度為1 mg/ml。

      樣品溶液的制備:稱取本品約250 mg,精密稱定于50 ml容量瓶中,用純化水稀釋并定容至刻度,搖勻,再精密吸取2 ml于10 ml容量瓶中,用流動相稀釋定容至刻度,搖勻,備用。其濃度為1 mg/ml。

      1.5 測定方法

      分別取標(biāo)準(zhǔn)品溶液和供試品溶液盛裝于2 ml自動進樣瓶中,進行自動進樣(進樣量為20 ul),注入液相色譜儀,按外標(biāo)法以峰面積計算供試品中谷氨酰胺的含量。

      2 實驗結(jié)果

      2.1 系統(tǒng)適用性試驗

      在上述色譜條件下,取標(biāo)準(zhǔn)溶液進行自動進樣,連續(xù)進樣6針,谷氨酰胺峰與其相鄰色譜峰的分離度均大于1.5;理論板數(shù)、拖尾因子,6次色譜峰峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)、六次色譜峰的保留時間分別為:9.80、9.79、9.79、9.78、9.70、9.71,其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=1.2%,小于2.0%;6次色譜峰面積分別為:1205488、10665、1200380、1204391、1170905、1186594,其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.2%小于5%;拖尾因子分別為:1.2、1.2、1.3、1.4、1.4、1.4,其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.7%均小于2%;理論塔板數(shù)分別為:4886、4867、5001、5185、5545、5867,均大于4000。

      2.2 線性

      用對照品制備不同濃度的樣品,使其濃度分別為0.5 mg/ml、0.75 mg/ml、1.0 mg/ml、1.25 mg/ml、1.5 mg/ml。每個濃度連續(xù)進樣3針。以檢測得到的峰面積平均值、濃度作線性回歸,其線性回歸方程為y=1188457x,其中y為峰面積,x為谷氨酰胺濃度(見圖1),線性相關(guān)系數(shù)R2為0.999。結(jié)果表明在目標(biāo)濃度0.5 mg/ml~1.5 mg/ml內(nèi),該方法具有良好的線性關(guān)系。

      2.3 準(zhǔn)確度

      分別制備濃度約為1 mg/ml的對照品溶液和濃度約為1 mg/ml的樣品溶液。分別吸取樣品溶液1 ml和標(biāo)準(zhǔn)溶液0.8 ml;樣品溶液1 ml和標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0 ml;樣品溶液1 ml和標(biāo)準(zhǔn)溶液1.2 ml分別加入10 ml容量瓶中,用流動相稀釋定容至刻度,制備濃度分別為80%、100%、120%的三種濃度的混合溶液。每個濃度連續(xù)進樣三針,記錄實驗結(jié)果。實驗結(jié)果表明該方法在三個濃度下其回收率分別為99.5%、97.6%、97.9%。平均回收率達到98.3%,表明該測定方法具有較高的檢測準(zhǔn)確度。

      2.4 精密度

      稱取標(biāo)準(zhǔn)品約250 mg,精密稱定于50 ml容量瓶中,用純化水稀釋并定容至刻度,搖勻,作為貯備液備用。再分別加標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液0.8 ml、1.0 ml、1.2 ml,用流動相稀釋定容至刻度,搖勻,制成濃度分別為80%、100%、120%的三種濃度,備用。每個濃度連續(xù)進樣三針,記錄色譜圖。實驗結(jié)果表明三個實驗下其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD分別為0.47%、0.42%、0.20%,平均相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0.37%。該結(jié)果表明該方法重現(xiàn)性較好。

      2.5 專一性

      從圖2可以看出,用該方法可以較好的分離測定谷氨酰胺的相關(guān)物質(zhì)如谷氨酸、焦谷氨酸等,具有專一性高的特點。

      3 討論

      本文建立的高效液相色譜法測定谷氨酰胺含量的方法,其檢測波長為215nm,流動相為0.05 mol/L的磷酸二氫鉀(用磷酸調(diào)節(jié)PH值為4.0)∶乙腈=70∶30,實驗結(jié)果表明該方法在其線性范圍內(nèi)具有專一性高,檢測結(jié)果準(zhǔn)確的特點。

      參考文獻

      [1] 吳建,鄧留杰,郭利芬,等.毛細管電泳法檢測轉(zhuǎn)化液中谷氨酰胺和谷氨酸[J].食品科學(xué),2008,29(4).endprint

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