高效液相色譜法測定頸舒膠囊中葛根素含量

馬善治，郭劍華，劉渝松，郭 亮，林 於，劉 新，彭文忠，王 健，廖興隆，胡 曉

（1.重慶市中醫(yī)骨科醫(yī)院，重慶400010；2.重慶醫(yī)科大學，重慶400016）

頸舒膠囊系重慶市中醫(yī)骨科醫(yī)院臨床使用多年的驗方制劑，是由葛根、桂枝、白芍10味等藥物組成，其中葛根作為方中君藥，而葛根素是葛根的主要有效成分。為控制制劑質(zhì)量，我們用高效液相色譜法測定葛根中的葛根素的含量［1，2］，取得滿意結(jié)果。

1 儀器和試藥

SY-810高效液相色譜儀（瑞利分析儀器公司），色譜柱Kromasil NH2（250mm×4.6mm，5μ），乙腈（色譜純），重蒸水，分析純，葛根素對照品（供含量測定用，批號110713-200609，中國生物制品檢定所提供），頸舒膠囊樣品（重慶市中醫(yī)骨科醫(yī)院提供）。

2 測試方法

色譜條件：色譜柱（Kromasil NH2（250mm×4.6mm，5μ），流動相，乙腈，水（8∶2），流速1mL/min，檢測波長為250nm。理論板數(shù)按葛根素峰計算應不低于3000。色譜條件下葛根素分離良好，陰性無干擾（圖1-3）［3］。

圖1 葛根素HPLC

圖2 樣品HPLC

圖3 陰性樣品HPLC

供試品溶液的制備：取頸舒膠囊內(nèi)容物4g，碾細，精密稱定，用甲醇100mL分二次超聲提取，每次5min；放冷，離心取上清液，合并上清液，用石油醚（60～90℃）50mL萃取1次，棄石油醚液，甲醇液蒸干，殘渣用甲醇分次使溶解并轉(zhuǎn)移至50mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

對照品溶液的制備：精密稱取葛根素對照品適量，用甲醇制成每1mL含50μg的溶液，即得。

葛根素線性關(guān)系考察：精密稱取葛根素對照品適量，用甲醇制成每1mL含5.2、26.0、52.0、78.0、104μg/mL的系列溶液，在選定的色譜條件下分別進樣20μL，記錄色譜圖中葛根素峰面積積分值，葛根素在5.2～104.0μg/mL范圍與其峰面積積分值之間線性關(guān)系良好，見表1。

表1 葛根素與其峰面積積分值的關(guān)系

儀器精密度考察：取同一葛根素對照品溶液，重復進樣相等量5次，記錄葛根素的峰面積積分值，見表2。

表2 儀器精密度測試結(jié)果

供試品溶液的穩(wěn)定性考察：取同一剛制備的供試品溶液，分別于0、5、9、12和24小時在選定的色譜條件下進樣20μL，記錄葛根素的峰面積積分值，即供試品溶液在24h內(nèi)保持穩(wěn)定，見表3。

表3 供試品溶液穩(wěn)定性測試結(jié)果

方法重現(xiàn)性考察：取同一批樣品，依法取5份樣品，精密稱定，依法制備5份供試品溶液，在選定的色譜條件下分別進樣10μL，記錄葛根素的峰面積積分值，即方法重現(xiàn)性符合要求，見表4。

表4 方法重現(xiàn)性測試結(jié)果

加樣回收率試驗：從己知葛根素含量（0.045%）的樣品中取6份供試品，精密稱定，分別精確加入葛根素對照品的甲醇稀釋液，依法制備6份供試品溶液，依法測定，記錄葛根素的峰面積積分值，按下式計算回收率，其平均回收率為97.6%，見表5。

表5 加樣回收率測定結(jié)果

中試樣品含量測定：取本品中試樣品3批，依法測定葛根素含量，見表6。

表6 中試樣品含量測定結(jié)果

3 討 論

采用照高效液相色譜測定法對頸舒膠囊有效成分之一的葛根素作定量研究，可有效測定葛根素的含量，使頸舒膠囊的配制以及制定有效成分的下限有了明確標準。

［1］黃亞非，張永明，何翱，等.采用高效液相色譜法測定心脈通口服液中葛根素的含量［J］.中國中藥雜志，2001，26（11）：760-761.

［2］王建平，秦紅巖，何偉，等.HPLC法測定解酒靈沖劑中葛根素的含量［J］.時珍國藥研究，1997，8（4）：322.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典中藥材薄層鑒別彩色圖鑒［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2010.