重組人血小板源生長(zhǎng)因子的藥學(xué)研究進(jìn)展

范寶慶，薛雯，于聰，曹小丹，黃瑞晶，李靜，徐立華，張學(xué)況，張玲，李劍

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重組人血小板源生長(zhǎng)因子的藥學(xué)研究進(jìn)展

范寶慶，薛雯，于聰，曹小丹，黃瑞晶，李靜，徐立華，張學(xué)況，張玲，李劍

300452 天津，天士力控股集團(tuán)研究院生物藥品研究所

血小板源生長(zhǎng)因子（platelet-derived growth factor，PDGF）是一種通常存貯于血小板 α 顆粒中的堿性蛋白質(zhì)，由血小板趨化到受損部位的巨噬細(xì)胞，受損血管處的平滑肌細(xì)胞以及受損部位的血管內(nèi)皮細(xì)胞等多種細(xì)胞所分泌。自從發(fā)現(xiàn) PDGF 后，人們已成功地純化了人、豬、牛、羊等的 PDGF，并對(duì)其理化性質(zhì)進(jìn)行了大量的研究。PDGF 是一種熱穩(wěn)定的陽(yáng)離子型糖蛋白，分子量為 28 ~ 35 kD，是由分子量分別為 13 ~ 14 kD 和 16 ~ 17 kD 的兩個(gè)亞基通過(guò)二硫鍵連接組成。PDGF 的等電點(diǎn)為 9.8 ~ 10.2，具有耐高溫（100 ℃）、耐酸（pH 2.5）以及耐受各種解離劑（4 mol/L 鹽酸胍、6 mol/L 尿素、2% SDS）的特點(diǎn)。凝膠層析發(fā)現(xiàn)，人 PDGF 在體內(nèi)有兩種形式，即 PDGF-I（分子量為 31 kD）和 PDGF-II（分子量為 28 kD），兩者在氨基酸及以共價(jià)鍵相連的碳水化合物的組成上有所不同，但其致絲裂活性相似[1]。

PDGF 是由 A、B 兩條多肽鏈通過(guò)二硫鍵連接而成的同型或異型二聚體，包括三種形式：PDGF-AA、PDGF-BB、PDGF-AB。在人類(lèi)血小板來(lái)源中 85% ~ 90% 的 PDGF 為 AB 型，10% ~ 15% 為 BB 型，A、B 鏈基因分別位于第 7、22 號(hào)染色體，經(jīng) 2-巰基乙醇還原或胰蛋白酶消化后，分解為兩條無(wú)活性的亞基，其生物學(xué)活性也幾乎完全消失，由此證明連接兩個(gè)亞基的二硫鍵對(duì)保持PDGF 的生物學(xué)活性起著十分重要的作用，其空間結(jié)構(gòu)如圖 1 所示。

PDGF 的主要生物學(xué)特性有：①趨化作用：刺激成纖維細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞的趨化遷移，對(duì)機(jī)體的損傷修復(fù)極為重要；②致分裂性：促進(jìn)多種細(xì)胞的 DNA 合成和細(xì)胞裂解、增殖；③增加細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的合成積聚：促進(jìn)多種 ECM 成分如膠原纖維、整合素、纖維連接蛋白（FN）、層黏蛋白（LN）、黏多糖等的合成，抑制 ECM 的降解，參與組織器官纖維化、硬化的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程；④血管活性效應(yīng)：能誘導(dǎo)不同類(lèi)型血管的收縮[2]。

1 PDGF 的生產(chǎn)工藝研究進(jìn)展

繼PDGF-A 鏈和PDGF-B 鏈的氨基酸序列被報(bào)道后，關(guān)于PDGF 的研究工作迅速開(kāi)展起來(lái)。20 世紀(jì) 80 年代初期美國(guó)就開(kāi)始對(duì) PDGF 展開(kāi)研究，到 80 年代末 90 年代初取得了實(shí)質(zhì)性進(jìn)展，并申請(qǐng)了大量專(zhuān)利，形成了 PDGF 的核心技術(shù)。其中 Chiron 公司研究獲得突破，通過(guò)重組 DNA 技術(shù)，制備了 PDGF-AA，并申請(qǐng)了專(zhuān)利。此外，其他許多公司對(duì)該項(xiàng)目也投入了大量研究，其中有關(guān)于 PDGF-BB、PDGF-AB 的制備技術(shù)和PDGF 藥物的作用等研究工作[3]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，美國(guó)有關(guān) PDGF 的專(zhuān)利有 46個(gè)，主要針對(duì)其載體及表達(dá)菌株的構(gòu)建、相關(guān)疾病的治療研究等方面，其中 12 個(gè)專(zhuān)利具有很大的研究和借鑒價(jià)值。FDA 于 1997 年 12 月 16 日批準(zhǔn)了 Ortho-McNeil Pharmaceuticals 和 Johnson & Johnson 公司用于治療糖尿病神經(jīng)病理性下肢潰瘍的貝卡普勒明凝膠（Becaplermin）（商品名Regranex）的生產(chǎn)[4]。

圖 1 PDGF-BB 的蛋白結(jié)構(gòu)

國(guó)內(nèi)多家單位也進(jìn)行了大量相關(guān)的基礎(chǔ)性研究，李發(fā)武等根據(jù) PDGF-B 鏈序列設(shè)計(jì)合成含靶向PDGF 基因 siRNA 轉(zhuǎn)錄模板的莖環(huán)結(jié)構(gòu)，與兩端分別有H I、III酶切位點(diǎn)的 pSilencer3.1-Hlhygro 質(zhì)粒連接，轉(zhuǎn)化大腸桿菌，擴(kuò)增、純化得到所需質(zhì)粒。通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳及基因測(cè)序鑒定其分子量及插入片段的序列。結(jié)果表明，PCR 擴(kuò)增片段與預(yù)期結(jié)果相符，雙酶切證實(shí) PDGF siRNA 表達(dá)載體克隆構(gòu)建成功[5-6]。楊春露等[7]利用RT-PCR從人血管內(nèi)皮細(xì)胞總RNA 中擴(kuò)增出PDGF-B 的 cDNA，然后克隆至酵母表達(dá)質(zhì)粒 pMETB 和 pMETαA，從而獲得了含信號(hào)肽（578 bp）和不含信號(hào)肽（340 bp）的編碼 PDGF-B 鏈基因，構(gòu)建了 PDGF-B 的酵母表達(dá)載體 pMETB-PDGFB1、pMETαA-PDGFB2。陳建庭等[8]用基因重組技術(shù)構(gòu)建 pQE-PDGF-B 原核表達(dá)載體，在 M15 大腸桿菌中進(jìn)行 PDGF-B 單體蛋白的表達(dá)。結(jié)果經(jīng)酶切鑒定、PCR 鑒定及基因測(cè)序證明，pQE30 載體上成功地插入了PDGF-B 成熟肽基因。薛亮等[9]建立了重組人血小板源生長(zhǎng)因子-BB（rhPDGF-BB）在釀酒酵母中的表達(dá)及純化工藝。在 5 L 發(fā)酵罐中，探討接種量、溶氧、誘導(dǎo)溫度和誘導(dǎo) pH 值對(duì)菌體密度及目的蛋白表達(dá)量的影響，并通過(guò)離子交換層析和凝膠過(guò)濾層析對(duì)目的蛋白進(jìn)行純化。經(jīng) 84 h 發(fā)酵，細(xì)胞600值可達(dá) 65.1，目的蛋白表達(dá)量占 26%。純化后的蛋白純度可達(dá) 95%，產(chǎn)量為 15.4 mg/L，收率為 21.9%，為其大規(guī)模生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)。董榮娜等[10]通過(guò)脂質(zhì)體瞬間轉(zhuǎn)染的方法將含有rhPDGF-BB 全長(zhǎng)的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CHO 細(xì)胞系，穩(wěn)定表達(dá) rhPDGF-BB 的 CHO 細(xì)胞具有新的生物學(xué)功能，實(shí)現(xiàn)了組織工程種子細(xì)胞的構(gòu)建，為研究糖尿病潰瘍創(chuàng)面愈合的生物材料提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。任雨笙等[11]采用超聲裂解、酸醇抽提、離子交換色譜、凝膠色譜等方法提純 PDGF，用 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)定其相對(duì)分子質(zhì)量，并檢測(cè)其生物學(xué)活性，建立簡(jiǎn)單有效的豬PDGF 純化方法，純化的 PDGF相對(duì)分子質(zhì)量為（2.879 ~ 3.078）× 104，活性回收率為 3%，比活性為 3.41176 × 105U/mg，為進(jìn)一步研究PDGF 的理化性質(zhì)及生物學(xué)特性打下基礎(chǔ)。高凱等[12]建立了重組人血小板源生長(zhǎng)因子（rhPDGF-BB）的質(zhì)控方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，具有保證產(chǎn)品安全、有效、質(zhì)量可控的特點(diǎn)，可用于重組人血小板源生長(zhǎng)因子產(chǎn)品的常規(guī)檢定。

北京金賽獅生物制藥技術(shù)開(kāi)發(fā)有限責(zé)任公司成功建立了生產(chǎn)rhPDGF-BB的方法，將 PDGF-B 基因正確置于酵母表達(dá)載體 pPICZ-αA，轉(zhuǎn)化酵母菌株 SMD1168H，經(jīng)篩選建立分泌表達(dá) rhPDGF-BB 的工程菌株，經(jīng)過(guò)兩級(jí)種子培養(yǎng)，上罐發(fā)酵，純化，從而獲得了rhPDGF-BB 重組蛋白。天士力控股集團(tuán)研究院從北京金賽獅生物制藥技術(shù)有限公司引進(jìn) rhPDGF-BB 項(xiàng)目，并進(jìn)一步推進(jìn)其藥學(xué)研究，包括發(fā)酵工藝優(yōu)化放大研究，最佳培養(yǎng)基配方篩選、優(yōu)化 pH、溫度、發(fā)酵時(shí)間、氧載體等發(fā)酵工藝參數(shù)，確定最佳發(fā)酵工藝路線(xiàn)，使表達(dá)量達(dá)到 40 mg/L，為大規(guī)模發(fā)酵奠定基礎(chǔ)；同時(shí)進(jìn)行了純化工藝的優(yōu)化放大研究，利用正交實(shí)驗(yàn)和析因?qū)嶒?yàn)研究最佳上樣量、流速、pH 和電導(dǎo)等參數(shù)，確定最佳的工藝路線(xiàn)，使收率和產(chǎn)量比轉(zhuǎn)讓工藝有大幅度提高，為大規(guī)模純化奠定基礎(chǔ)；制劑工藝學(xué)研究，采用先進(jìn)的生物活性凝膠制劑作為藥物劑型，深入研究如何大規(guī)模制備穩(wěn)定的 rhPDGF-BB 水凝膠制劑，在此基礎(chǔ)上已經(jīng)成功進(jìn)行了臨床I、II 以及 III 期用藥的生產(chǎn)工作。

2 PDGF 的制劑制備研究進(jìn)展

卓冰[13]報(bào)道了新的重組血小板源生長(zhǎng)因子的水凝膠制劑制備方法。該水凝膠制劑含有：藥物成分rhPDGF-BB、水凝膠基質(zhì)、穩(wěn)定劑、等滲劑和 pH 調(diào)節(jié)劑。其中水凝膠基質(zhì)主要外用于治療糖尿病患者的潰瘍傷口，特點(diǎn)在于：在濕潤(rùn)的環(huán)境下，有利于傷口的愈合；基質(zhì)本身具有彈性和柔軟性，同時(shí)外觀透明；透過(guò)凝膠持續(xù)緩慢釋放藥物，維持藥效作用時(shí)間。經(jīng)過(guò)試驗(yàn)和篩選，選擇了新型輔料卡波姆?？ú肥且环N聚丙烯酸交聯(lián)樹(shù)脂，在很低的濃度下即可形成較高黏度的凝膠[14-16]。可用于制備水凝膠的卡波姆型號(hào)較多，主要有兩類(lèi)。其中Carbomer 1940 分子鏈較短、黏度高、吸附能力強(qiáng)，藥物釋放緩慢。用其作為基質(zhì)時(shí)藥物釋放緩慢、持久。經(jīng)試驗(yàn)表明，當(dāng)其濃度為 0.4% 時(shí)具有很好的穩(wěn)定性和藥效。而 Carbomer 1981 類(lèi)分子鏈長(zhǎng)、黏度低。當(dāng)它作為 PDGF 藥物基質(zhì)時(shí)，該凝膠皮膚吸附力強(qiáng)，較快發(fā)揮藥效。另外，選擇氨基酸作為穩(wěn)定劑，0.9% 氯化鈉、5% 葡萄糖和 3% 甘露醇作為等滲劑，10% NaOH 作為 pH 調(diào)節(jié)劑，在藥劑學(xué)中常用的防腐劑中優(yōu)選 0.8% 的尼泊金乙酯，另加入金屬絡(luò)合劑 0.3% 的 EDTA-Na 起到穩(wěn)定作用。FDA 批準(zhǔn)的 rhPDGF-BB 在中國(guó)知識(shí)產(chǎn)權(quán)局申請(qǐng)的專(zhuān)利 96198773.1 中，其權(quán)利要求保護(hù)的是 PDGF 的凝膠制劑，該凝膠制劑凝膠基質(zhì)為纖維素聚合物，及可藥用的帶電荷化學(xué)物質(zhì)，包括賴(lài)氨酸、精氨酸、組氨酸、魚(yú)精蛋白、丙氨酸等與鋅、鎂的組合[17-18]。

3 PDGF 的藥理毒理學(xué)研究進(jìn)展

戴禮蘋(píng)等[19]以鏈脲霉素（streptozocin，STZ）所致糖尿病小鼠（STZ 小鼠）以及非肥胖型糖尿?。╪on-obese diabetes，Nod）小鼠（Nod 小鼠）為模型，制作全厚度皮膚切口，用 rhPDGF 對(duì)其連續(xù)治療 5 d，觀察皮膚創(chuàng)口愈合情況，結(jié)果 rhPDGF 能明顯促進(jìn)糖尿病小鼠皮膚創(chuàng)口的愈合，10 μg/cm2即有明顯促進(jìn)糖尿病小鼠皮膚創(chuàng)口愈合的作用。孫同柱等[20]將 26 只糖尿病大鼠在背部?jī)蓚?cè)各制備 2 個(gè)全層皮膚缺損創(chuàng)面，隨機(jī)分成五組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示 rhPDGF-BB 對(duì)糖尿病大鼠全層皮膚缺損創(chuàng)面有明顯促修復(fù)作用，表現(xiàn)在促進(jìn)創(chuàng)面肉芽組織生長(zhǎng)、毛細(xì)血管胚芽形成與再上皮化。rhPDGF-BB 的三種不同劑量中，以中劑量（7.0 μg/cm2）組表現(xiàn)出促創(chuàng)面修復(fù)作用最為明顯。鐘建莉等[21]探討了 rhPDGF-BB 對(duì)大鼠正畸牙移動(dòng)過(guò)程中破骨細(xì)胞 FAK 表達(dá)的影響，發(fā)現(xiàn) rhPDGF-BB 作為局部調(diào)節(jié)因子促進(jìn)了正畸牙移動(dòng)骨改建過(guò)程。在大鼠正畸牙壓力側(cè)牙槽骨改建的過(guò)程中，F(xiàn)AK 參與了整合素 α_vβ_3 在破骨細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的下游通路，其表達(dá)能被外源性的 rhPDGF-BB 所調(diào)節(jié)。陳強(qiáng)等[22]以切除小白鼠背部皮膚制作創(chuàng)傷模型，人造皮膚覆蓋傷口，并在人造皮膚下注射牛PDGF 2 pg/d，共注射 3 d，于注射完畢后第 3、7、10 天對(duì)傷口新生上皮肉芽組織生長(zhǎng)情況進(jìn)行觀察，結(jié)果表明，牛 PDGF 能促進(jìn)肉芽組織生長(zhǎng)上皮再生，使傷口加速愈合，提示牛 PDGF 可應(yīng)用于臨床創(chuàng)傷治療[22-25]。

4 PDGF 的臨床藥物的進(jìn)展

Becaplermin 是目前唯一一個(gè)被 FDA 批準(zhǔn)治療糖尿病足潰瘍的生長(zhǎng)因子藥物[26-30]。除此之外，Chiron 和Johnson & Johnson 研制的 rhPDGF-BB 針對(duì)壓迫性潰瘍和靜脈性潰瘍已經(jīng)進(jìn)入臨床 III 期試驗(yàn)。國(guó)內(nèi)多家科研單位也進(jìn)行了該項(xiàng)工藝的研發(fā)，但是沒(méi)有獲得實(shí)質(zhì)性的突破，且研究大多處于基礎(chǔ)研究階段。天士力控股集團(tuán)研究院自接手rhPDGF-BB 項(xiàng)目后，繼續(xù)推進(jìn) PDGF-BB 藥學(xué)及其臨床研究，現(xiàn)已成功完成此項(xiàng)目的基礎(chǔ)研究，并采用嚴(yán)格的隨機(jī)盲法對(duì)照方案，對(duì)試驗(yàn)藥品的有效性和安全性作出初步評(píng)價(jià)，在此基礎(chǔ)上完成了 I、II 期臨床研究，并已經(jīng)啟動(dòng)了 III 期臨床試驗(yàn)。在I 期臨床中，考察了單劑量和多劑量外用 rhPDGF-BB 凝膠劑在中國(guó)健康受試者中的耐受性特征，制劑規(guī)格為 5 g，每克含 rhPDGF-BB 0.1 mg 或 10 000 單位，中國(guó)健康受試者單劑量外用 0.25 ~ 4 g 和多劑量外用 0.5 ~ 2 g 的 rhPDGF-BB 凝膠劑是安全的，能夠很好耐受，為該藥臨床應(yīng)用的安全、合理使用提供依據(jù)。II 期臨床采用隨機(jī)、雙盲、多中心、安慰劑平行對(duì)照評(píng)價(jià) rhPDGF-BB 不同劑量治療慢性糖尿病足潰瘍 II 期的臨床效果。其安全性良好，不良反應(yīng)輕微，治療 20 周內(nèi)高劑量組（100 μg/g）目標(biāo)潰瘍完全愈合率優(yōu)于低劑量組（30 μg/g）和對(duì)照組，推薦采用高劑量組（100 μg/g）進(jìn)行 III 期臨床試驗(yàn)，進(jìn)一步確認(rèn)其治療慢性糖尿病皮膚潰瘍的有效性和安全性[31-32]。目前 III 期臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行中。

rhPDGF-BB 經(jīng)過(guò)十多年時(shí)間的市場(chǎng)應(yīng)用，其安全性和有效性在臨床上得到了充分證明；rhPDGF-BB 尤其對(duì)病理性深度潰瘍的傷口增殖修復(fù)、促進(jìn)皮膚血管的再生有明顯療效。國(guó)際市場(chǎng)上銷(xiāo)售的 Becaplermin（含 0.01% rhPDGF-BB），每支售價(jià)為 275 英鎊/15 g，天士力預(yù)計(jì)售價(jià)為 150 元人民幣，價(jià)格優(yōu)勢(shì)明顯，競(jìng)爭(zhēng)力強(qiáng)。此外，rhPDGF-BB 目前大量用于高檔生物化妝品和大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)，因此也可以出口 rhPDGF-BB 原料藥，擴(kuò)大產(chǎn)品市場(chǎng)。天士力開(kāi)發(fā)的制劑產(chǎn)品具有顯著的成本優(yōu)勢(shì)，具備同國(guó)際上同類(lèi)產(chǎn)品競(jìng)爭(zhēng)的實(shí)力，可以拓展國(guó)際市場(chǎng)，出口創(chuàng)匯，創(chuàng)造更大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。

5 結(jié)語(yǔ)

隨著對(duì) PDGF 基礎(chǔ)研究的深入，rhPDGF 表達(dá)的各種不同的工程菌被構(gòu)建，發(fā)酵和純化等路線(xiàn)的進(jìn)一步優(yōu)化，PDGF 的產(chǎn)業(yè)化會(huì)很快實(shí)現(xiàn)，對(duì)于它的藥理與毒理學(xué)的認(rèn)識(shí)也會(huì)進(jìn)一步加深，rhPDGF-BB 作為臨床用藥，在治療一些慢性難愈合性傷口如糖尿病潰瘍、慢性靜脈性潰瘍、褥瘡、放射性潰瘍等方面已經(jīng)取得了非常不錯(cuò)的療效，并且將被進(jìn)一步用于佐劑、蛋白載體、生物材料等多個(gè)方面，估計(jì)在不久的將來(lái)，rhPDGF 會(huì)在醫(yī)學(xué)、生物學(xué)等各方面發(fā)揮更重要的作用。

[1] Ren YS, Jia GL. An experimental study of biological effects of platelet-derived growth factor on vascular histiocytes. Chin J Cardiac Func, 1999, 11(2):83-84. (in Chinese)

任雨笙, 賈國(guó)良. 血小板衍化生長(zhǎng)因子對(duì)血管組織細(xì)胞生物學(xué)作用的研究. 心功能雜志, 1999, 11(2):83-84.

[2] Zhang L, Yang LY. The research progress of platelet-derived growth factor and diabetes. Chin J Gerontol, 2008, 28(9):934-936. (in Chinese)

張蕾, 楊立勇. 血小板源生長(zhǎng)因子與糖尿病的研究進(jìn)展. 中國(guó)老年學(xué)雜志, 2008, 28(9):934-936.

[3] Dong RN, Wu ZM, Yu DM. Study on construction of accelerating ulcer concrescence cell/hydrogel compound and its biological

character. Med Innovation China, 2012, 9(26):1-2. (in Chinese)

董榮娜, 毋中明, 于德民. 促潰瘍愈合細(xì)胞/水凝膠三維復(fù)合物的初步構(gòu)建及表征. 中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新, 2012, 9(26):1-2.

[1] Xu T, Li J. Total triterpenoid from Prunella vulgaris L prevents fibrosis in CC14 induced hepatic fibrosis in the rat and its mechanism research on PDGF-induced rat hepatic stellate cell.Chin Pharmacol, 2012, 29(3):64.

[2] Fang YQ. The nature of PDGF, relationship with the disease and its clinical application. Prog Microbiol Immunol, 1996, 24(4):70-73. (in Chinese)

方玉強(qiáng). PDGF的性質(zhì)、與疾病的關(guān)系及其臨床應(yīng)用. 微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展, 1996, 24(4):70-73.

[3] Li FW, Lu FG, Yu ZJ, et al. Construction and identification of plasmids expressing siRNAs targeting platelet-derived growth factor. Chin J Practical Med, 2010, 37(15):15-16, 19. (in Chinese)

李發(fā)武, 盧放根, 余治健, 等. 靶向性血小板衍生生長(zhǎng)因子siRNA表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定. 中國(guó)實(shí)用醫(yī)刊, 2010 , 37(15):15-16, 19.

[4] Yang CL, Chen JT, Deng F, et al. Construction and identification of yeast expression vectors containing human platelet-derived growth factor B-chain gene. J First Mil Med Univ, 2004, 24(3):273-276. (in Chinese)

楊春露, 陳建庭, 鄧凡, 等. 人血小板衍生生長(zhǎng)因子B鏈基因酵母表達(dá)載體的構(gòu)建. 第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào), 2004, 24(3):273-276.

[5] Chen JT, Yang CL, Deng F, et al. Molecular cloning and expression of human PDGF-B chain mature peptide gene. Chin J Sur, 2004, 42(19): 1170-1173. (in Chinese)

陳建庭, 楊春露, 鄧凡, 等. 人血小板衍生生長(zhǎng)因子B鏈成熟肽基因克隆及表達(dá). 中華外科雜志, 2004, 42(19):1170-1173.

[6] Xue L, Zhu YF, Peng D, et al. Development of a procedure for expression of human platelet-derived growth factor-BB in saccharomyces cerevisiae and purification of expressed product. Chin J Biologicals, 2009, 22(4):402-405. (in Chinese)

薛亮, 朱艷飛, 彭端, 等. 人血小板衍生生長(zhǎng)因子-BB在釀酒酵母中的表達(dá)及純化工藝的建立. 中國(guó)生物制品學(xué)雜志, 2009, 22(4): 402-405.

[7] Dong RN, Wu ZM, Song D, et al. Study on establishment of CHO cell line with stable expression of rhPDGF-BB and its biological character. Tianjin Med J, 2009, 37(2):124-127. (in Chinese)

董榮娜, 毋中明, 宋丹, 等. 穩(wěn)定表達(dá)rhPDGF-BB的CHO細(xì)胞系的建立及其生物學(xué)特性研究. 天津醫(yī)藥, 2009, 37(2):124-127.

[8] Ren YS, Chen Q, Jia GL, et al. Extraction and purification of porcine platelet-derived growth factor. Acad J Second Mil Med Univ, 2000, 21(3):246-249. (in Chinese)

任雨笙, 陳強(qiáng), 賈國(guó)良, 等. 豬血小板衍生生長(zhǎng)因子的提取和純化.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào), 2000, 21(3):246-249.

[9] Gao K, Han CM, Rao CM, et al. Study on methods and requirements for quality control of recombinant human platelet-derived growth factor-BB (rhPDGF-BB). Chin J Pharm Anal, 2004, 24(1):4-7. (in Chinese)

高凱, 韓春梅, 饒春明, 等. 重組人血小板衍生生長(zhǎng)因子(rhPDGF- BB)質(zhì)控方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究. 藥物分析雜志, 2004, 24(1):4-7.

[10] Zhuo B. Hydrogel preparation of recombinant platelet derived growth factor: China, 20215397X. 2004-06-30. (in Chinese)

卓冰. 重組血小板源生長(zhǎng)因子的水凝膠制劑: 中國(guó), 02153957X. 2004-06-30.

[11] Guo HY, Yi BW, Yan XP, et al. Application status of carbomer in gel preparations. Chin J Exp Traditional Med Formulae, 2013, 19(17): 371-374. (in Chinese)

郭紅葉, 伊博文, 閆小平, 等. 新型輔料卡波姆在凝膠劑中應(yīng)用現(xiàn)狀. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2013, 19(17):371-374.

[12] Wang SH, Lin YQ. Preparation and pharmaceutical aids of hydrogels. Food Drug, 2006, 8(2A):55-57. (in Chinese)

王淑華, 林永強(qiáng). 水性凝膠劑的制備及常用輔料. 食品與藥品, 2006, 8(2A):55-57.

[13] Chini J, Fenkelu A. Gel formulations containing growth factors: China, 961987731. 2004-03-24. (in Chinese)

奇尼 J, 芬克盧 A. 含生長(zhǎng)因子的凝膠制劑: 中國(guó), 961987731. 2004-03-24.

[14] Wang JZ. Biological technology research and development and quality control of drugs. Beijing: Science Press, 2002:68. (in Chinese)

王軍志. 生物技術(shù)藥物研究開(kāi)發(fā)和質(zhì)量控制. 北京: 科學(xué)出版社, 2002:68.

[15] Zhuo B. Fermentation process for recombinant human platelet derived growth factor: China, 021568391. 2004-06-30. (in Chinese)

卓冰. 重組人血小板源生長(zhǎng)因子的發(fā)酵方法: 中國(guó), 021568391. 2004-06-30.

[16] Dai LP, Dai XH, Guan YF, et al. Study on pharmacodynamics of recombinant human platelet-derived growth factor-BB.Chin J Biomed Sci Appl, 2002(1):25-28. (in Chinese)

戴禮蘋(píng), 戴曉華, 管云楓, 等. 基因重組人血小板源性生長(zhǎng)因子(rhPDGF)藥效學(xué)研究. 中國(guó)醫(yī)學(xué)生物技術(shù)應(yīng)用雜志, 2002(1):25-28.

[17] Sun TZ, Fu XB, Li W, et al. Experimental study on recombinant human platelet derived growth factor gel in a diabetic rat model of cutaneous incisal wound healing. Infeet Inflamm Rep, 2003, 3(4):252. (in Chinese)

孫同柱, 付小兵, 李威, 等. rhPDGF-BB凝膠劑促進(jìn)糖尿病大鼠創(chuàng)面愈合的實(shí)驗(yàn)研究. 感染?炎癥?修復(fù), 2003, 3(4):252.

[18] Zhong JL, Guan XY, Liu JG, et al. Effect of recombinant human platelet-derived growth factor-BB on focal adhesion kinase in the osteoclast during orthodontic tooth movement in rats. J Dental Prev Treat, 2013, 21(11):575-579. (in Chinese)

鐘建莉, 管曉燕, 劉建國(guó), 等. 重組人血小板衍生生長(zhǎng)因子-BB對(duì)大鼠正畸牙移動(dòng)過(guò)程中破骨細(xì)胞內(nèi)黏著斑激酶表達(dá)的影響. 廣東牙病防治, 2013, 21(11):575-579.

[19] Chen Q, Shi JN, Jin Y. Study on cattle platelet-derived growth factor to promote wound healing of rat. Chin J Conservative Dentistry, 1995, 5(4):202-203. (in Chinese)

陳強(qiáng), 史俊南, 金巖. 牛血小板衍化生長(zhǎng)因子促進(jìn)小鼠傷口愈合的研究. 牙體牙髓牙周病學(xué)雜志, 1995, 5(4):202-203.

[20] Seifert RA, Alpers CE, Bowen-Pope DF. Expression of platelet-derived growth factor and its receptors in the developing and adult mouse kidney. Kidney Int, 1998, 54(3):731-746.

[21] Zhang ZM, Chen JT, Jin DD. The biological function of platelet derived growth factor-BB in the osteoblast osteoclast co culture system. Nat Med J China, 2001, 81(7):425-428. (in Chinese)

張忠民, 陳建庭, 金大地. 血小板衍生生長(zhǎng)因子-BB在成骨細(xì)胞-破骨細(xì)胞培養(yǎng)體系中的生物學(xué)作用. 中華醫(yī)學(xué)雜志, 2001, 81(7): 425-428.

[22] Hellberg C, Ostman A, Heldin CH. PDGF and vessel maturation. Recent Results Cancer Res, 2010, 180:103-114.

[23] Kubota K, Sakikawa C, Katsumala M, et a1. Platelet-derived growth factor BB secreted from osteoclasts acts as an osteoblast genesis inhibitory factor. J Bone Miner Res, 2002, 17(2):257-265.

[24] Donovan J, Abraham D, Norman J. Platelet-derived growth factor signaling in mesenchymal cells. Front Biosci (Landmark Ed), 2013, 18:106-119.

[25] Bauman JE, Eaton KD, Martins RG. Antagonism of platelet-derived growth factor receptor in non smalceH lung cancer:rationale and investigations. Clin Cancer Res, 2007, 13(15 Pt 2):s4632-s4636.

[26] Perrien DS, Young CS, Alvarez-Urena PP, et al. Percutaneous injection of augment injectable bone graft (rhPDGF-BB and beta-tricalcium phosphate [beta-TCP]/bovine type I collagen matrix) increases vertebral bone mineral density in geriatric female baboons. Spine J, 2013, 13(5):580-586.

[27] Friedlaender GE, Lin S, Solchaga LA, et al. The role of recombinant human platelet-derived growth factor-BB (rhPDGF-BB) in orthopaedic bone repair and regeneration. Curr Pharm Des, 2013, 19(19):3384-3390.

[28] Kim J, Hollinger JO. Effects of dual delivery of rhPDGF-BB and rhBMP-2 on osteogenic differentiation of human mesenchymal stem cells. Tissue Eng Regenerative Med, 2014, 11(2):143-148.

[29] Paul-Vissel G, Zachrisson O, Varrone A, et a1. Safety and efficacy of recombinant human platelet derived growth factor BB (rhPDGF-BB) in Parkinson’s Disease//17th international congress of Parkinson’s disease and movement disorders. Milwaukee: 2013.

天津市科技支撐計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目（09CKFSH00200）；“十二五”國(guó)家科技重大專(zhuān)項(xiàng)（2011ZX09202-301-06）

李劍，Email：lijian16@tasly.com.cn

2013-11-07

10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2014.06.009