連錢草總多酚提取及其抗氧化性分析

賢景春+謝婷婷

摘要：以連錢草（Glechoma longituba）為原料，乙醇為溶劑，采用浸提法提取連錢草中總多酚含量并對其抗氧化性進行分析，研究乙醇體積分數(shù)、溫度、時間和料液比對總多酚含量的影響，通過正交試驗對浸提條件進行了優(yōu)化。結(jié)果表明，最佳浸提條件為50%乙醇，溫度80 ℃，時間2.0 h，料液比1∶25（g∶mL）。在此條件下浸提，得到的總多酚含量為4.275 mg/g，且連錢草提取物對自由基具有一定的清除能力。

關(guān)鍵詞：連錢草（Glechoma longituba）；多酚；抗氧化性

中圖分類號：R282 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）17-4139-03

Extraction of Total Polyphenol in Glechoma longituba

and Its Anti-oxidation

XIAN Jing-chun，XIE Ting-ting

（The College of Chemistry and Life Science， Quanzhou Normal College， Quanzhou 362000， Fujian， China）

Abstract： Using Glechoma longituba as materials and ethanol as extractant， total polyphenol was extracted from Glechoma longituba with soaking method and its anti-oxidation was studied. The effects of volume fraction of ethanol， temperature， time，ratio of material to liquid on total quantity polyphenol were investigated. The results showed that the optimal conditions of extraction were 50% ethanol， temperature 80 ℃ ，extraction time 2.0 h， ratio of material to liquid on 1∶25（g∶mL）. Under these conditions， the rate of extraction reached up to 4.275 mg/g. The Glechoma longituba had strong anti-oxidation.

Key words： Glechoma longituba；polyphenol；anti-oxidation stability

連錢草（Glechoma longituba）又名金錢草、活血丹，為唇形科多年生草本植物。味辛、微苦、性微寒。主要用于利小便，治療膀胱結(jié)石、腎結(jié)石、輸尿管結(jié)石、腎炎水腫、濕熱黃疸等病癥[1]。有關(guān)研究表明，連錢草有降糖作用[2]。植物多酚具有降血脂和降血糖的雙重作用[3]。目前，對于連錢草的研究主要以化學成分、揮發(fā)油成分居多，有關(guān)連錢草多酚提取的系統(tǒng)性研究尚未見報道。本試驗用乙醇浸取法對連錢草的多酚進行提取并對其抗氧化性進行研究，以期為連錢草的進一步開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、藥劑和儀器

供試材料：連錢草（購于泉州藥店）。

藥劑：無水乙醇（恒隆化工服份有限公司），七水合硫酸亞鐵、焦性沒食子酸（國藥集團化學試劑有限公司），酒石酸鉀鈉（天津基準化學試劑有限公司），磷酸二氫鉀（廣東汕頭西隴化工公司），磷酸氫二鉀（汕頭市西隴化工有限公司）。

儀器：電子天平（上海舜宇恒平科學儀器有限公司），循環(huán)水真空泵（河南省予華儀器有限公司），離心機（上海安亭科學儀器廠制造），料理機（山東九陽家電有限公司）。

1.2 連錢草總多酚含量的測定

根據(jù)Folin-Ciocalten法，以焦性沒食子酸為標準品，采用可見分光光度法測定連錢草的多酚含量。取0.25 mg/mL焦性沒食子酸標準液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分別置于25 mL的容量瓶中，加去離子水5 mL，酒石酸鐵溶液5 mL，用pH 7.5的磷酸鹽緩沖溶液定容。振蕩混勻靜置后，在波長為540 nm下測其吸光度[4]。以焦性沒食子酸標準液濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。

1.3 連錢草總多酚提取條件的確定

將連錢草清洗干凈，60 ℃烘干，烘干后粉碎過40目篩。稱取1.000 g連錢草粉末，放入小燒杯中，控制單因素條件浸提總多酚。①乙醇體積分數(shù)。分別用不同體積分數(shù)（30%、40%、50%、60%、70%）的乙醇為提取劑，料液比1∶25，在60 ℃下提取2 h；②料液比。分別用不同的料液比（連錢草∶乙醇）（1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35）（g∶mL，下同），乙醇體積分數(shù)60%，溫度60 ℃提取2 h；③時間。乙醇體積分數(shù)60%，料液比1∶30，在60 ℃下不同時間（1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h）下提取；④溫度。乙醇體積分數(shù)60%，料液比1∶30，分別用不同的溫度（40、50、60、70、80 ℃），提取2 h。

將提取液趁熱抽濾，并將其轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，用同體積分數(shù)乙醇溶劑定容。從中量取1 mL置于10 mL的容量瓶中，加入1 mL酒石酸亞鐵溶液，用pH 7.5的磷酸鹽緩沖溶液定容，混勻、靜置、離心后在540 nm波長下測定其吸光度，參照標準曲線計算出連錢草中多酚的含量[5]。endprint

1.4 正交試驗

在單因素試驗的基礎(chǔ)上，以乙醇體積分數(shù)、溫度、時間和料液比4個因素進行L9（34）正交試驗[7]，確定浸提連錢草中總多酚的最佳條件。正交試驗因素和水平如表1所示。

1.5 抗氧化性

依次取9 mmol/L FeSO4、8.82 mmol/L雙氧水、9 mmol/L水楊酸溶液各2.0 mL于25 mL容量瓶中，向反應體系中分別加入1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL浸提液，用去離子水定容，搖勻，恒溫37 ℃下，在波長510 nm處測其吸光度值（AX），按此方法不加浸提液測定吸光度值（A0）[6]。 按照公式：清除率=（A0-AX）/A0×100%，計算連錢草中總多酚的抗氧化性。

2 結(jié)果與分析

2.1 標準曲線的繪制

以焦性沒食子酸標準液濃度為橫坐標，以吸光度值為縱坐標繪制標準曲線，得到的標準曲線如圖1所示?；貧w線方程為Y=-0.011 86+16.474 29×X。

2.2 乙醇體積分數(shù)對連錢草總多酚浸提效果的影響

從圖2可以看出，隨著乙醇體積分數(shù)的升高，連錢草總多酚含量呈上升趨勢。當乙醇體積分數(shù)為60%時，連錢草總多酚含量達到最高，含量為2.515 mg/g，而后隨著乙醇體積分數(shù)的升高，連錢草總多酚含量開始下降。因此，選擇乙醇體積分數(shù)為60%為宜。

2.3 料液比對連錢草總多酚浸提效果的影響

由圖3可知，在溶劑用量較小時，連錢草總多酚含量較低，加大溶劑用量，總多酚溶出率增大。當料液比為1∶30時，連錢草總多酚含量最高。如果繼續(xù)加大溶劑量，連錢草總多酚含量反而下降。因此，選擇料液比1∶30為宜。

2.3 時間對連錢草總多酚浸提效果的影響

由圖4可知，時間較短時，浸提得到的連錢草總多酚含量較低，隨著時間的延長，其總多酚不斷溶出，當浸提時間為2.0 h時，溶出達到平衡，連錢草總多酚含量達到峰值。再繼續(xù)延長時間，提取效果呈下降趨勢。因此，選擇2.0 h為浸提時間。

2.5 溫度對連錢草總多酚浸提效果的影響

由圖5可知，隨浸提溫度的升高，連錢草總多酚含量呈上升趨勢，當溫度達到70 ℃時，浸提效果最好，連錢草總多酚含量最高。溫度繼續(xù)升高，浸提效果明顯下降。因此，選擇溫度為70 ℃浸提連錢草中總多酚。

2.6 正交試驗結(jié)果

由表2結(jié)果可知，4個因素對連錢草總多酚浸提效果影響最大的是浸提溫度，其次是時間，影響最小的是料液比。浸提連錢草中總多酚的最佳條件組合為A1B3C2D1，即50%乙醇、溫度80 ℃，時間2.0 h、料液比1∶25（g∶mL）。在此條件下進行浸提，連錢草總多酚含量為4.275 mg/g。

2.7 對羥基自由基的清除作用

由圖6可知，連錢草浸提液中總多酚對羥基自由基有一定的清除作用，且清除率與浸提液的濃度呈線性相關(guān)。

3 結(jié)論

通過單因素試驗與正交試驗確定了連錢草總多酚浸提的最佳工藝。結(jié)果表明，影響連錢草總多酚提取效果的因素大小順序為浸提溫度、時間、乙醇體積分數(shù)、料液比。最佳浸提條件為50%乙醇、料液比1∶25，時間2.0 h，溫度80 ℃。在此浸提條件下，浸提得到的連錢草總多酚含量達到4.275 mg/g，且連錢草提取物對羥基自由基有一定的清除作用。

參考文獻：

[1] 宋 銳，張 云，叢曉東，等.連錢草的化學成分及生物活性研究進展[J].中華中醫(yī)藥學刊，2010，28（12）：2511-2514.

[2] 袁春玲，王佩琪，郭偉英.連錢草的降血糖作用及其機制研究[J].中藥藥理與臨床，2008，24（3）：57-58.

[3] 翟清波，李 誠，王 靜，等.植物多酚降血糖和降血脂作用研究進展[J].中國藥房，2012，23（3）：279-281.

[4] 牛春艷，姜曉坤.葡萄皮渣中多酚物質(zhì)提取工藝的研究[J].遼寧化工，2011，40（9）：917-919.

[5] 賢景春，鄭鑫源，陳明真.少花龍葵多酚超聲提取工藝及其抗氧化性研究[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學，2012，40（8）：275-277.

[6] 金 鳴，蔡亞欣，李金榮，等.鄰二氮菲-Fe2+氧化法檢測H2O2/Fe2+產(chǎn)生的羥自由基[J].生物化學與生物物理進展，1996，23（6）：553-555.

[7] 賈冬英，姚 開，譚 薇，等.石榴皮中多酚提取條件的優(yōu)化[J]，林產(chǎn)化學與工業(yè)，2006，26（3）：123-126.endprint

1.4 正交試驗

在單因素試驗的基礎(chǔ)上，以乙醇體積分數(shù)、溫度、時間和料液比4個因素進行L9（34）正交試驗[7]，確定浸提連錢草中總多酚的最佳條件。正交試驗因素和水平如表1所示。

1.5 抗氧化性

依次取9 mmol/L FeSO4、8.82 mmol/L雙氧水、9 mmol/L水楊酸溶液各2.0 mL于25 mL容量瓶中，向反應體系中分別加入1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL浸提液，用去離子水定容，搖勻，恒溫37 ℃下，在波長510 nm處測其吸光度值（AX），按此方法不加浸提液測定吸光度值（A0）[6]。 按照公式：清除率=（A0-AX）/A0×100%，計算連錢草中總多酚的抗氧化性。

2 結(jié)果與分析

2.1 標準曲線的繪制

以焦性沒食子酸標準液濃度為橫坐標，以吸光度值為縱坐標繪制標準曲線，得到的標準曲線如圖1所示?；貧w線方程為Y=-0.011 86+16.474 29×X。

2.2 乙醇體積分數(shù)對連錢草總多酚浸提效果的影響

從圖2可以看出，隨著乙醇體積分數(shù)的升高，連錢草總多酚含量呈上升趨勢。當乙醇體積分數(shù)為60%時，連錢草總多酚含量達到最高，含量為2.515 mg/g，而后隨著乙醇體積分數(shù)的升高，連錢草總多酚含量開始下降。因此，選擇乙醇體積分數(shù)為60%為宜。

2.3 料液比對連錢草總多酚浸提效果的影響

由圖3可知，在溶劑用量較小時，連錢草總多酚含量較低，加大溶劑用量，總多酚溶出率增大。當料液比為1∶30時，連錢草總多酚含量最高。如果繼續(xù)加大溶劑量，連錢草總多酚含量反而下降。因此，選擇料液比1∶30為宜。

2.3 時間對連錢草總多酚浸提效果的影響

由圖4可知，時間較短時，浸提得到的連錢草總多酚含量較低，隨著時間的延長，其總多酚不斷溶出，當浸提時間為2.0 h時，溶出達到平衡，連錢草總多酚含量達到峰值。再繼續(xù)延長時間，提取效果呈下降趨勢。因此，選擇2.0 h為浸提時間。

2.5 溫度對連錢草總多酚浸提效果的影響

由圖5可知，隨浸提溫度的升高，連錢草總多酚含量呈上升趨勢，當溫度達到70 ℃時，浸提效果最好，連錢草總多酚含量最高。溫度繼續(xù)升高，浸提效果明顯下降。因此，選擇溫度為70 ℃浸提連錢草中總多酚。

2.6 正交試驗結(jié)果

由表2結(jié)果可知，4個因素對連錢草總多酚浸提效果影響最大的是浸提溫度，其次是時間，影響最小的是料液比。浸提連錢草中總多酚的最佳條件組合為A1B3C2D1，即50%乙醇、溫度80 ℃，時間2.0 h、料液比1∶25（g∶mL）。在此條件下進行浸提，連錢草總多酚含量為4.275 mg/g。

2.7 對羥基自由基的清除作用

由圖6可知，連錢草浸提液中總多酚對羥基自由基有一定的清除作用，且清除率與浸提液的濃度呈線性相關(guān)。

3 結(jié)論

通過單因素試驗與正交試驗確定了連錢草總多酚浸提的最佳工藝。結(jié)果表明，影響連錢草總多酚提取效果的因素大小順序為浸提溫度、時間、乙醇體積分數(shù)、料液比。最佳浸提條件為50%乙醇、料液比1∶25，時間2.0 h，溫度80 ℃。在此浸提條件下，浸提得到的連錢草總多酚含量達到4.275 mg/g，且連錢草提取物對羥基自由基有一定的清除作用。

參考文獻：

[1] 宋 銳，張 云，叢曉東，等.連錢草的化學成分及生物活性研究進展[J].中華中醫(yī)藥學刊，2010，28（12）：2511-2514.

[2] 袁春玲，王佩琪，郭偉英.連錢草的降血糖作用及其機制研究[J].中藥藥理與臨床，2008，24（3）：57-58.

[3] 翟清波，李 誠，王 靜，等.植物多酚降血糖和降血脂作用研究進展[J].中國藥房，2012，23（3）：279-281.

[4] 牛春艷，姜曉坤.葡萄皮渣中多酚物質(zhì)提取工藝的研究[J].遼寧化工，2011，40（9）：917-919.

[5] 賢景春，鄭鑫源，陳明真.少花龍葵多酚超聲提取工藝及其抗氧化性研究[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學，2012，40（8）：275-277.

[6] 金 鳴，蔡亞欣，李金榮，等.鄰二氮菲-Fe2+氧化法檢測H2O2/Fe2+產(chǎn)生的羥自由基[J].生物化學與生物物理進展，1996，23（6）：553-555.

[7] 賈冬英，姚 開，譚 薇，等.石榴皮中多酚提取條件的優(yōu)化[J]，林產(chǎn)化學與工業(yè)，2006，26（3）：123-126.endprint

1.4 正交試驗

在單因素試驗的基礎(chǔ)上，以乙醇體積分數(shù)、溫度、時間和料液比4個因素進行L9（34）正交試驗[7]，確定浸提連錢草中總多酚的最佳條件。正交試驗因素和水平如表1所示。

1.5 抗氧化性

依次取9 mmol/L FeSO4、8.82 mmol/L雙氧水、9 mmol/L水楊酸溶液各2.0 mL于25 mL容量瓶中，向反應體系中分別加入1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL浸提液，用去離子水定容，搖勻，恒溫37 ℃下，在波長510 nm處測其吸光度值（AX），按此方法不加浸提液測定吸光度值（A0）[6]。 按照公式：清除率=（A0-AX）/A0×100%，計算連錢草中總多酚的抗氧化性。

2 結(jié)果與分析

2.1 標準曲線的繪制

以焦性沒食子酸標準液濃度為橫坐標，以吸光度值為縱坐標繪制標準曲線，得到的標準曲線如圖1所示?；貧w線方程為Y=-0.011 86+16.474 29×X。

2.2 乙醇體積分數(shù)對連錢草總多酚浸提效果的影響

從圖2可以看出，隨著乙醇體積分數(shù)的升高，連錢草總多酚含量呈上升趨勢。當乙醇體積分數(shù)為60%時，連錢草總多酚含量達到最高，含量為2.515 mg/g，而后隨著乙醇體積分數(shù)的升高，連錢草總多酚含量開始下降。因此，選擇乙醇體積分數(shù)為60%為宜。

2.3 料液比對連錢草總多酚浸提效果的影響

由圖3可知，在溶劑用量較小時，連錢草總多酚含量較低，加大溶劑用量，總多酚溶出率增大。當料液比為1∶30時，連錢草總多酚含量最高。如果繼續(xù)加大溶劑量，連錢草總多酚含量反而下降。因此，選擇料液比1∶30為宜。

2.3 時間對連錢草總多酚浸提效果的影響

由圖4可知，時間較短時，浸提得到的連錢草總多酚含量較低，隨著時間的延長，其總多酚不斷溶出，當浸提時間為2.0 h時，溶出達到平衡，連錢草總多酚含量達到峰值。再繼續(xù)延長時間，提取效果呈下降趨勢。因此，選擇2.0 h為浸提時間。

2.5 溫度對連錢草總多酚浸提效果的影響

由圖5可知，隨浸提溫度的升高，連錢草總多酚含量呈上升趨勢，當溫度達到70 ℃時，浸提效果最好，連錢草總多酚含量最高。溫度繼續(xù)升高，浸提效果明顯下降。因此，選擇溫度為70 ℃浸提連錢草中總多酚。

2.6 正交試驗結(jié)果

由表2結(jié)果可知，4個因素對連錢草總多酚浸提效果影響最大的是浸提溫度，其次是時間，影響最小的是料液比。浸提連錢草中總多酚的最佳條件組合為A1B3C2D1，即50%乙醇、溫度80 ℃，時間2.0 h、料液比1∶25（g∶mL）。在此條件下進行浸提，連錢草總多酚含量為4.275 mg/g。

2.7 對羥基自由基的清除作用

由圖6可知，連錢草浸提液中總多酚對羥基自由基有一定的清除作用，且清除率與浸提液的濃度呈線性相關(guān)。

3 結(jié)論

通過單因素試驗與正交試驗確定了連錢草總多酚浸提的最佳工藝。結(jié)果表明，影響連錢草總多酚提取效果的因素大小順序為浸提溫度、時間、乙醇體積分數(shù)、料液比。最佳浸提條件為50%乙醇、料液比1∶25，時間2.0 h，溫度80 ℃。在此浸提條件下，浸提得到的連錢草總多酚含量達到4.275 mg/g，且連錢草提取物對羥基自由基有一定的清除作用。

參考文獻：

[1] 宋 銳，張 云，叢曉東，等.連錢草的化學成分及生物活性研究進展[J].中華中醫(yī)藥學刊，2010，28（12）：2511-2514.

[2] 袁春玲，王佩琪，郭偉英.連錢草的降血糖作用及其機制研究[J].中藥藥理與臨床，2008，24（3）：57-58.

[3] 翟清波，李 誠，王 靜，等.植物多酚降血糖和降血脂作用研究進展[J].中國藥房，2012，23（3）：279-281.

[4] 牛春艷，姜曉坤.葡萄皮渣中多酚物質(zhì)提取工藝的研究[J].遼寧化工，2011，40（9）：917-919.

[5] 賢景春，鄭鑫源，陳明真.少花龍葵多酚超聲提取工藝及其抗氧化性研究[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學，2012，40（8）：275-277.

[6] 金 鳴，蔡亞欣，李金榮，等.鄰二氮菲-Fe2+氧化法檢測H2O2/Fe2+產(chǎn)生的羥自由基[J].生物化學與生物物理進展，1996，23（6）：553-555.

[7] 賈冬英，姚 開，譚 薇，等.石榴皮中多酚提取條件的優(yōu)化[J]，林產(chǎn)化學與工業(yè)，2006，26（3）：123-126.endprint