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    海港區(qū)某羊場常見寄生蟲病調(diào)查

    2014-10-09 05:45:56董春玲
    今日畜牧獸醫(yī) 2014年1期
    關(guān)鍵詞:蓋玻片計(jì)數(shù)法載玻片

    董春玲

    (秦皇島市海港區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所,河北秦皇島066000)

    羊在整個生長發(fā)育過程中都不斷受到寄生蟲病的侵襲。寄生蟲不僅消耗羊的營養(yǎng),降低羊?qū)︼暳系睦?,提高養(yǎng)殖成本,降低飼料報酬等,引起的經(jīng)濟(jì)損失是其他任何疾病不能相比的,而且還會降低其產(chǎn)品的品質(zhì),影響羊的體質(zhì)為其他的疾病打開門戶,嚴(yán)重時甚至引起羊只死亡,給養(yǎng)殖戶造成重大的經(jīng)濟(jì)損失,極大的制約了養(yǎng)羊業(yè)的發(fā)展和農(nóng)戶養(yǎng)羊的積極性。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 試驗(yàn)動物

    海港區(qū)某羊場波爾山羊100只。

    1.1.2 試驗(yàn)儀器

    載玻片、蓋玻片、小木棒、燒杯、銅篩或多層紗布、膠頭滴管、顯微鏡、鐵絲環(huán)、網(wǎng)兜、蟲卵計(jì)數(shù)器、培養(yǎng)皿、測微器、300毫升容量瓶、離心機(jī)、離心管、塑料袋。

    1.1.3 試劑

    50%甘油水、飽和硫酸鋅溶液(100毫升水中加入硫酸鋅33克)、飽和食鹽水(100毫升沸水中加入38克食鹽,使其溶解,以紗布過濾冷卻后,如有結(jié)晶析出即成飽和溶液)、盧戈氏碘液、明礬蘇木素(有甲乙二液合成:甲液以蘇木素1.0克,無水乙醇12毫升配成;乙液以明礬1.0溶于240毫升蒸餾水內(nèi),使用前以甲液2~3滴加入乙液數(shù)毫升中即可)、石炭酸復(fù)紅染色液(堿性復(fù)紅4克、95%酒精20毫升、苯酚8毫升、蒸餾水100毫升)、甲醛、木炭末、1.6%氫氧化鈉溶液。

    1.2 方法

    1.2.1 糞便檢查法

    1.2.1.1 糞便的采集

    清晨采集新鮮羊糞便,1份/羊,放于塑料袋中,編號后帶回實(shí)驗(yàn)室檢查。

    1.2.1.2 直接涂片法

    首先在載玻片上加50%甘油水?dāng)?shù)滴,再以小木棒取新鮮糞便少許,與玻片上的甘油水混合均勻,去掉大塊粉渣,將糞便涂成薄膜,其厚度以能透視書報上的字跡為度,然后加蓋玻片,置顯微鏡下檢查,檢查時應(yīng)順序地查遍蓋玻片下所有部分。檢查中發(fā)現(xiàn)有蟲卵數(shù)量不多的,因此每份糞樣作了3~5片進(jìn)行檢查。

    1.2.1.3 漂浮法

    利用比重大于蟲卵的飽和硫酸鋅溶液與糞混勻,銅篩過濾,用吸管吸取濾液于兩個離心管中,平衡后離心,1500轉(zhuǎn)/分鐘,離心5分鐘。然后用鐵絲環(huán)沾取上層液面鏡檢。

    1.2.1.4 沉淀法

    利用蟲卵比重大于水的特性,取10克糞便置于燒杯中,先加少量水,充分?jǐn)嚢鑼⒓S搗成糊狀,再加常水適量繼續(xù)攪拌,通過糞篩濾到另一容器內(nèi)然后加滿常水,靜置15分鐘,再傾去上清液。如此反復(fù)用水洗沉淀數(shù)次,直到上層液體透明為止。最后傾去上清液,用膠頭滴管吸取沉淀于載玻片上,加蓋玻片鏡檢。檢出比重較大的肝片吸蟲卵。

    1.2.1.5 蟲卵計(jì)數(shù)法一

    麥克馬斯特氏法,此法先要用載玻片和一個蓋玻片做成蟲卵計(jì)數(shù)器,即在蓋玻片上刻長寬各1厘米的方格,再在大方格內(nèi)刻100個小方格,載玻片與蓋玻片間填上1.5毫米厚的玻條,并以粘合劑粘合。計(jì)數(shù)時取糞便2克置研缽中,先加入10毫升水,攪勻,再加飽和食鹽水50毫升,混勻后立即吸取糞液充滿計(jì)數(shù)室,靜置2分鐘,鏡檢記錄計(jì)數(shù)室的蟲卵數(shù)。蟲卵數(shù)乘以200即為每克糞便中蟲卵數(shù)。該法適用于線蟲。

    1.2.1.6 蟲卵計(jì)數(shù)法二

    片形吸蟲蟲卵計(jì)數(shù)法,稱取羊糞10克,置于300毫升的容量瓶中。加入少量1.6%氫氧化鈉溶液,靜置過夜,次日,將糞塊攪碎,再加入1.6%氫氧化鈉至300毫升刻度處。再搖勻,立即吸取7.5毫升糞液注入到離心管內(nèi),在離心機(jī)內(nèi)以每分鐘1000轉(zhuǎn)離心2分鐘,傾去上層液體,換加飽和鹽水,再次離心后,再傾去上層液體,再換加飽和鹽水,如此反復(fù)操作,直到上層液體完全清澈為止。傾去上層液體,即將沉渣全部分別滴于數(shù)張載玻片上,檢查全部的載玻片上的蟲卵并計(jì)數(shù),以總數(shù)乘以4,即為每克糞便中的肝片吸蟲蟲卵數(shù)。

    1.2.2 血液檢查法

    1.2.2.1 血液的采集

    采集頸靜脈血液,1份/羊,放于裝有抗凝劑的試管中,編號后帶回實(shí)驗(yàn)室檢查。

    1.2.2.2 血液中蠕蟲檢查

    取新鮮血液一滴于玻片上,覆以蓋片在低倍鏡下檢查。血中幼蟲較多時可做推片經(jīng)明礬蘇木素染色后檢查。血中幼蟲較少可采一大滴,在載玻片上略加涂布,待其自然干燥,使結(jié)成一層厚血膜,而后將此玻片反轉(zhuǎn),血膜面向下,斜浸入一小杯蒸餾水中,待其完全溶血,取出晾干,在浸入甲醛中固定10分鐘,晾干后以明礬蘇木素染色,待白細(xì)胞的核染成深紫色,取出以蒸餾水沖洗2分鐘,顯微鏡下檢查。血中幼蟲很少時,可采血于離心機(jī)中,加入5%醋酸溶液以溶血,待溶血完成后離心,取沉淀渣檢查。

    1.2.2.3 血液內(nèi)原蟲的檢查-鮮血壓滴標(biāo)本檢查

    將采出的血液滴于載玻片上,加等量生理鹽水,混合均勻后,加蓋片,立即放低倍顯微鏡下檢查。用于伊氏錐蟲和附紅細(xì)胞體的檢查。

    1.2.2.4 血液內(nèi)原蟲的檢查-涂片染色標(biāo)本檢查

    采血,滴于載玻片一端,按常規(guī)推制成血片,并使其晾干。滴甲醛2滴于血膜上,使其固定,染色(姬氏染色法取姬氏染色粉0.5克,中性純甘油25.0毫升,無水中性甲醛25.0毫升。先將姬氏染色粉置研缽中,加少量甘油充分研磨,再加再磨,直到甘油全部加完為止。將其倒入100毫升容量的棕色小口試劑瓶中;在研缽中加少量的甲醛以沖洗甘油染液,沖洗液仍傾入上述瓶中,再加再洗再傾入,直至25毫升甲醛全部用完為止。塞緊瓶口,充分搖勻,而后將瓶置于65℃溫箱中24小時,并不斷搖動,此即為原液。染色時將原液2.0毫升加到中性蒸餾水100毫升中,即為染液。染液加與血膜上染色30分鐘后,用水洗5分鐘,晾干,鏡檢。)用油鏡檢查。用于泰勒蟲等多種寄生蟲的檢查。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 糞便檢查

    2.1.1 直接涂片法

    在顯微鏡下發(fā)現(xiàn)蟲卵種類有消化道圓線蟲卵,鞭蟲卵,感染率分別為82%、18%。

    2.1.2 漂浮法

    在顯微鏡下發(fā)現(xiàn)蟲卵種類有消化道圓線蟲卵,鞭蟲卵。感染率分別為100%、38%。

    消化道圓線蟲卵:顯微鏡下觀察三種圓線蟲卵兩端都無“塞”且在蟲卵內(nèi)都未形成幼蟲,蟲卵長度大于60微米小于85微米的是捻轉(zhuǎn)胃蟲卵,蟲卵長度大于90微米且有16~32卵胚細(xì)胞,其中略大的是馬歇爾線蟲蟲卵,而略小的是奧斯特線蟲卵。

    鞭蟲卵:顯微鏡下觀察蟲卵呈紡錘形黃褐色,大小為50~54×22~23微米,卵殼厚,蟲卵兩端各有一個“塞”,即為鞭蟲卵。

    2.1.3 沉淀法

    在顯微鏡下發(fā)現(xiàn)蟲卵種類有消化道圓線蟲卵,鞭蟲卵,肝片吸蟲卵。感染率分別為100%、38%、25%。

    肝片吸蟲卵:長橢圓形,大小為130~150微米×63~90微米,黃褐色,有小蓋,卵內(nèi)充滿卵黃細(xì)胞,卵細(xì)胞不易看清。

    2.1.4 蟲卵計(jì)數(shù)法(一)-麥克馬斯特氏法

    在每克糞便中查到有10052個消化道圓線蟲卵,感染程度是重度感染。

    2.1.5 蟲卵計(jì)數(shù)法(二)-片形吸蟲蟲卵計(jì)數(shù)法

    在每克糞便中查到有386個肝片吸蟲卵,感染程度是輕度感染。

    2.2 血液檢查

    2.2.1 血液中蠕蟲檢查

    在血液中沒有查到蠕蟲感染。

    2.2.2 鮮血壓滴標(biāo)本檢查

    沒有查到伊氏錐蟲、查到附紅細(xì)胞體感染。

    2.2.3 血液內(nèi)原蟲的檢查-涂片染色標(biāo)本檢查

    僅查到有泰勒蟲感染,感染率為35%。

    以上各種方法的檢查,結(jié)果匯總見下表。

    抽檢一百只波爾山羊的寄生蟲感染情況

    3 討論

    本次調(diào)查中證明了該羊場中的波爾山羊體內(nèi)寄生蟲主要為圓線蟲,其次為肝片吸蟲和鞭蟲,其中圓線蟲在每克糞便中查到10052個圓線蟲卵,屬于重度感染,應(yīng)該給予驅(qū)蟲,但并沒有引起發(fā)病,造成羊的死亡,因此還沒有造成宏觀上的經(jīng)濟(jì)損失,但由于寄生蟲病是一種慢性、消耗性的疾病,不會在短時間內(nèi)造成大面積的發(fā)病、死亡,只是在消耗體內(nèi)營養(yǎng),尤其是影響生長發(fā)育、生長緩慢、消瘦、抵抗力下降、降低飼料報酬,造成重大的微觀上的經(jīng)濟(jì)損失,也是對牧場的羊造成損失比較嚴(yán)重的一個根源。

    3.1 在各種檢查方法中,各自的優(yōu)點(diǎn)

    3.1.1 在糞便檢查法中,直接涂片法的優(yōu)點(diǎn)就是操作簡單、迅速,在短時間內(nèi)就可以出現(xiàn)結(jié)果,缺點(diǎn)是結(jié)果不完全且檢出率低,通過此法檢查到的蟲卵有消化道圓線蟲卵和鞭蟲卵,感染率分別是82%、18%。

    3.1.2 沉淀法的優(yōu)點(diǎn)是檢查出來的結(jié)果檢出率高,缺點(diǎn)是操作復(fù)雜,需要很長的時間,通過此法檢查到的蟲卵有消化道圓線蟲卵,鞭蟲卵,肝片吸蟲卵。感染率分別為100%、38%、25%。

    3.1.3 漂浮法只能檢查出比重小于所使用的漂浮液,該法的優(yōu)缺點(diǎn)介于直接涂片法和沉淀法兩者之間,要比直接涂片法檢出率高,但又沒有沉淀法檢出的結(jié)果完全,通過此法檢查到的蟲卵有消化道圓線蟲卵,鞭蟲卵。感染率分別為100%、38%。

    3.1.4 蟲卵計(jì)數(shù)法一-麥克馬斯特氏法可粗略的推斷動物寄生蟲感染程度,但有局限性,僅適用于線蟲卵的計(jì)數(shù)。

    3.1.5 蟲卵計(jì)數(shù)法二-片形吸蟲蟲卵計(jì)數(shù)法用于比重較大的片形吸蟲卵,操作時間相對于麥克馬斯特氏法要稍長。

    3.1.6 血液檢查法中,血液中蠕蟲檢查要根據(jù)幼蟲的多少運(yùn)用不同的方法,首先要考慮幼蟲較多,其次在考慮較少,最后考慮很少。

    3.1.7 血液內(nèi)原蟲的檢查-鮮血壓滴標(biāo)本檢查操作簡單,節(jié)省時間,但檢查出的結(jié)果僅限于伊氏錐蟲和附紅體細(xì)胞,具有局限性。

    3.1.8 血液內(nèi)原蟲的檢查-涂片染色標(biāo)本檢查,此法中使用的試劑材料較多,時間要長,但檢查出來的結(jié)果完善。

    通過此次調(diào)查,大致總結(jié)出該地區(qū)秋季羊體肥大,糞中蟲卵占優(yōu)勢,這預(yù)示著羊體內(nèi)的幼蟲變成成蟲的數(shù)量在陸續(xù)增加。主要危害較大的消化道寄生蟲:圓線蟲和附紅細(xì)胞體還在威脅著養(yǎng)羊業(yè)的發(fā)展,仍然未得到有效的控制。

    寄生蟲病的傳播和流行,必須具備傳染來源、傳播途徑和易感動物三個基本環(huán)節(jié),切斷或控制其中任一個環(huán)節(jié),就可以有效地防制某種寄生蟲病的發(fā)生與流行。此外,寄生蟲病的傳播和流行,還受到自然因素和社會因素的影響和制約。

    3.2 加強(qiáng)寄生蟲病防治工作

    3.2.1 制訂寄生蟲病防治的長期規(guī)劃

    根據(jù)本次調(diào)查的結(jié)果和不同寄生蟲病的流行程度及其分布特點(diǎn),應(yīng)對該地區(qū)制訂重點(diǎn)寄生蟲病防治的長期規(guī)劃,將把對其前后盤吸蟲、華支睪吸蟲防治作為重點(diǎn)領(lǐng)域,把對人類健康危害較大的肝吸蟲病作為重點(diǎn)防治的寄生蟲病,從而保證該地區(qū)寄生蟲病防治工作有計(jì)劃、有重點(diǎn)地開展。

    3.2.2 大力開展寄生蟲病防治知識的宣傳

    寄生蟲病的傳播和流行與人們的行為密切相關(guān)。有必要通過各種宣傳途徑和方式,引導(dǎo)和教育群眾逐步改變不利于健康的生產(chǎn)、生活習(xí)慣和飲食、衛(wèi)生習(xí)慣,特別要加強(qiáng)對中小學(xué)生、婦女和農(nóng)牧民群眾的宣傳教育工作,提高群眾的防病意識和自我保護(hù)能力,減輕寄生蟲病的危害。

    3.2.3 逐步加大該地區(qū)寄生蟲病防治力度

    針對對人類危害較大的,感染率較高的多種寄生蟲病的現(xiàn)狀,采取有效的干預(yù)措施,把寄生蟲病防治工作與農(nóng)業(yè)、農(nóng)村和農(nóng)民問題緊密聯(lián)系起來,實(shí)施重點(diǎn)寄生蟲病綜合防治。通過開展重點(diǎn)寄生蟲病綜合防治項(xiàng)目,逐步壓縮流行范圍,防止因人員流動和物質(zhì)交流的頻繁而造成寄生蟲病的傳播。

    3.2.4 進(jìn)一步降低線蟲感染率

    國內(nèi)外寄生蟲病防治經(jīng)驗(yàn)證明,采取以藥物驅(qū)蟲為主,結(jié)合開展健康教育、改水改廁等綜合防治措施,對于消除傳染源,降低寄生蟲感染率有顯著成效。按照“因地制宜、分類指導(dǎo)、科學(xué)防治”的原則,在寄生蟲感染率較大的重度流行區(qū),每年有計(jì)劃地開展集體驅(qū)蟲治療;在中度感染率的流行區(qū),可采取對重點(diǎn)人群每年進(jìn)行驅(qū)蟲治療的防治策略,進(jìn)一步降低人群感染率,保障人民群眾身體健康。

    3.2.5 加強(qiáng)重點(diǎn)寄生蟲病防治的應(yīng)用性科研

    建立和完善寄生蟲病的監(jiān)測體系,研究制訂重點(diǎn)寄生蟲病的防治標(biāo)準(zhǔn)、技術(shù)規(guī)范和工作方案,使寄生蟲病防治工作科學(xué)、系統(tǒng)、規(guī)范地進(jìn)行,保證我國寄生蟲病防治工作的可持續(xù)發(fā)展。

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