沈陽市及周邊地區(qū)規(guī)?；i場豬繁殖與呼吸障礙綜合征疫苗免疫效果及病原調(diào)查

耿慶華，胡 殊，付海濱

（沈陽出入境檢驗(yàn)檢疫局，遼寧 沈陽 110016）

豬繁殖與呼吸系統(tǒng)綜合征（porcine reproductive and respiration syndrome，PRRS）俗稱豬藍(lán)耳病，是由豬生殖和呼吸系統(tǒng)綜合征病毒引起的目前危害養(yǎng)豬業(yè)的主要疾病之一，主要表現(xiàn)為母豬繁殖障礙及不同日齡豬的呼吸道癥狀[1-2]。我國在1996年由郭寶清等首次在國內(nèi)疑似PRRSV感染的豬群中分離出PRRSV[3]，證明了該病毒在我國的存在，目前已遍及全國絕大部分省份，多數(shù)集約化豬場都遭受到了PRRSV的侵襲。尤其是2006年以來由PRRSV變異株引起的高致病性豬藍(lán)耳病，仔豬發(fā)病率高達(dá)100%，死亡率50%以上，同時(shí)也可造成母豬的高流產(chǎn)率，目前已是嚴(yán)重威脅我國養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的重要疫病之一[4-6]。本次調(diào)查是為了解沈陽市及周邊地區(qū)近幾年該病的感染發(fā)病情況和規(guī)模化豬場的疫苗保護(hù)效果，對沈陽市規(guī)模化豬場制定科學(xué)的免疫程序起到了指導(dǎo)作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料及血清來源 2011年1月～2013年6月，在沈陽市及周邊16個(gè)市（縣）地區(qū)的豬場和屠宰場現(xiàn)場采集病料（包括扁桃體、肺臟、脾臟、淋巴結(jié)等樣品），共收集3 340份病料樣品；采集沈陽市5個(gè)規(guī)模化豬場902份血清樣品，送至本實(shí)驗(yàn)室檢測。

1.1.2 主要試劑及儀器 磁珠核酸提取試劑盒、RT-PCR試劑（包括Taq DNA聚合酶、RNase Inhibitor、dNTP、DL2000、AMV反轉(zhuǎn)錄酶、DL2000 Marker），購于寶生物工程（大連）有限公司；無水乙醇、異丙醇等分析試劑，均為國產(chǎn)分析純試劑；豬繁殖與呼吸障礙綜合征抗體檢測試劑盒，購自法國LSI公司。

1.2 方法

1.2.1 病毒核酸的提取 組織樣品經(jīng)研磨后，反復(fù)凍融3次，然后以10 000 r/min離心10 min，取上清液用Ambion的磁珠核酸提取試劑盒說明書操作提取病毒核酸。

1.2.2 RT-PCR方法檢測樣品 利用本實(shí)驗(yàn)室建立的檢測PRRSV的RT-PCR方法檢測送檢樣品。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)在20μL體系中進(jìn)行，包括提取樣品總RNA 5μL，反轉(zhuǎn)錄溶液：50 mmol/LTris-HCl（pH 8.3）、75 mmol/L KCl、3 mmol/L MgCl2、10 mmol/L DTT 4μL、dNTP 6μL、50 pmol/L PRRSV反轉(zhuǎn)錄引物1μL、AMV反轉(zhuǎn)錄酶（200 U/μL）1μL和RNA酶抑制劑（40 U/μL）1μL，用DEPC水補(bǔ)足至20μL，42℃水浴1 h，70℃ 5 min。將反轉(zhuǎn)錄的cDNA于-20℃保存。PCR反應(yīng)：10×PCR緩沖液5.0μL，ExTaq DNA聚合酶0.5μL，2.5 mmol/L dNTPs 1.0μL，上、下游引物各1.8μL（濃度為10μmol/L），反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物cDNA 2.0μL，加DEPC水至50μL。反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性5 min，94℃變性60 s，56℃退火40 s，72℃延伸40 s，共35個(gè)循環(huán)，72℃延伸10 min。PCR產(chǎn)物利用1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測。

1.2.3 豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒抗體檢測方法豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒抗體利用豬繁殖與呼吸障礙綜合征抗體檢測試劑盒檢測。

2 結(jié)果

2.1 豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒感染情況檢測結(jié)果 對來自遼寧地區(qū)沈陽、大連、鞍山16個(gè)市（縣）地區(qū)的豬場和屠宰場的樣品，豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒感染情況見表1。

表1 2011～2013年豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒感染情況調(diào)查表Table1 Survey of PRRS viralinfection in 2011～2013

由表1可知，2011年遼寧省豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒的陽性率為9.28%，2012年為27.3%，2013年上半年為0.6%，3年平均陽性率為12.1%，其中來自丹東和綏中地區(qū)的豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒的陽性率最高，分別為36.9%和57.1%。

2

2..22 沈陽市規(guī)?；i場豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒疫苗免疫抗體水平監(jiān)測 對來自遼寧地區(qū)沈陽等地的5個(gè)注射過豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒疫苗規(guī)模化養(yǎng)豬場采集的株血清進(jìn)行監(jiān)測，3年來5個(gè)豬場豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒疫苗免疫抗體監(jiān)測情況詳見表2。

表2 2011～2013年豬場豬繁殖與呼吸障礙綜合征疫苗免疫效果情況調(diào)查表Table2 The imm une effect of PRRS vaccine in 2011～2013

由表2可知，2011年5個(gè)豬場豬繁殖與呼吸障礙綜合征疫苗免疫抗體合格率為97.3%，2012年為98.8%，2013年上半年為94.8%，3年平均陽性率為97.5%。

2.3 豬場豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒仔豬母源抗體監(jiān)測情況 對某豬場經(jīng)過豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒疫苗免疫過母豬產(chǎn)下的仔豬進(jìn)行母源抗體的檢測，分別在仔豬哺乳前、7日齡、14日齡、21日齡、35日齡、42日齡和49日齡時(shí)采血分離血清檢測仔豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒母源抗體。

如圖1所示，仔豬豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒母源抗體在7日齡時(shí)達(dá)到最大值，直到21日齡維持在較高水平，之后呈現(xiàn)下降趨勢。

3 討論

相比規(guī)?；潭容^小或散養(yǎng)戶而言，規(guī)?；潭容^高的豬場無論是在藍(lán)耳病抗體免疫陽性率還是在抗體離散度方面均優(yōu)于較小規(guī)模豬場，這應(yīng)該與規(guī)?；i場較合理、科學(xué)的免疫程序應(yīng)用相關(guān)。目前，由于PRRS沒有特效治療措施，從而接種疫苗成為PRRS的主要防控手段，而PRRS會損害免疫系統(tǒng)引起并發(fā)和繼發(fā)感染，甚至?xí)?dǎo)致免疫失敗。因此，養(yǎng)豬業(yè)應(yīng)時(shí)刻保持對豬藍(lán)耳病的高度警惕，尤其是較小規(guī)模的養(yǎng)殖場更應(yīng)該高度重視藍(lán)耳病的防控工作，適時(shí)接種疫苗，建立個(gè)性化豬藍(lán)耳病疫苗免疫程序，平時(shí)加強(qiáng)免疫效果的監(jiān)測工作，配合加強(qiáng)日常飼養(yǎng)管理，是當(dāng)前豬場防制豬藍(lán)耳病的有效方法。

圖1 仔豬PRRSV母源抗體消長規(guī)律Fig.1 The grow th and decline law of PRRSV m aternal antibody in pig lets

[1]趙德明，張中秋譯.豬病學(xué)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2000：205.

[2]Lunnet J K,Rockland B.Immune parameters may signal why some pigs clear PRRS virus[J].Nat Hog Farmer,2007,52(1):12-21.

[3]郭寶清，陳章水，劉文興，等.從疑似PRRS流產(chǎn)胎兒分離PRRSV的研究[J].中國畜禽傳染病，1996，87（2）：1-5.

[4]Rosina S,Dot ti S,Martel li P.How to avoid the introduction of porcine reproductive and respiratory syndrome virus onto afarm[J].Rivista di Suinicoltra,2007,48(4):96-98.

[5]趙愛華，李玉文，齊欣.關(guān)于遼寧省規(guī)模豬場高致病性豬藍(lán)耳病流行及防控情況的調(diào)研報(bào)告[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2013，2：34-35.

[6]Dotii S,Rosina S,Mar telii P.Porcine reproductive and respir tory syndrome good control limits economic losses[J].Rivistadi Suinicoltura,2007,48(5):28-32.